C. 예인대 Blastomere 해부 : 달걀 껍질을 제거하고 배아 세포를 해리하는 방법

- 이 해부에 대해 두 개의 마이크로 파이프를 사용합니다 : 계란과 거의 동일한 너비와 두 배 너비의 개구부와 우물에서 조직 된 일련의 솔루션이 있습니다.

첫째, 성인용 헤르마로디테를 난자 소금 용액에 넣으세요.

그런 다음, 2세포 단계 배아를 식별합니다. 이들 세포는 수정란의 분열에 의해 형성된 블라스트미어입니다.

단 40~55초 만에 배아를 셸튼의 성장 배지또는 SGM으로 옮기면 각 배아를 SGM의 두 우물에서 짧게 세척하여 표백제의 모든 흔적을 제3의 우물에 배치합니다.

지금, 더 작은 마이크로파이펫을 사용하여 반복적으로 계란 껍질을 제거하고 blastomeres를 노출하는 기계적 힘을 제공하는 배아를 피펫. 부드럽게 개별 blastomere 세포를 분리하기 위해 배아를 파이펫계속.

- 마이크로모세혈관의 각 끝을 좌우로 10마이크로리터의 용량으로 잡아주세요.

해부 현미경하에서, 모세혈관을 편모로 손으로 당긴 팁을 다듬는다. 두 팁 개구부 크기를 각각 배아 이송 및 달걀 껍질 제거를 위한 C. 예레간 배아의 약 2배 및 1배 짧은 축 길이를 만듭니다.

당겨진 모세관을 입 파이프팅 장치에 부착합니다.

5~10명의 성인 C. 예레간을 우물에 놓고, 초기 C. 예레간 배아를 얻으려면, C. 예레간 몸의 오른쪽과 왼쪽에 두 개의 바늘을 배치하고 바늘을 서로 미끄러지게 하여 성인을 조각으로 자릅니다.

파이펫 45 마이크로리터의 알염 용액을 잘 옆에, 쉘튼의 성장 배지의 파이펫 45 마이크로리터를 후속 3개의 우물로 옮기는 것. 1세포 단계및 초기 2세포 단계 배아를 더 큰 크기의 개구부로 시체 초염 용액으로 옮기고 40~55초 동안 기다립니다.

처음 두 우물각각에서 1~2초씩 쉘튼의 성장 배지로 다음 3개의 우물로 배아를 옮기면 배아를 세척합니다.

그 후, 2세포 단계 배아 블라스토미어를 분리하기 위해 손으로 그린 모세관을 지속적으로 피펫한다.

- 달걀 껍질 제거 후, 파열을 방지하기 위해 배아를 위아래로 파이펫팅의 힘을 최소화합니다.