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上皮細胞ライセートからのGSTタグ付き突然変異体のRhoタンパク質(GST-RhoAは(G17A))を使用してアクティブロー-GEFの親和性降水
JoVE Journal
Biology
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JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
DOI:

11:28 min

March 31, 2012

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

ここで紹介する方法が有効にGEFをするための高い親和性を有する変異体RhoAのGST融合タンパク質を利用することにより、培養細胞におけるRhoAの特定のGDP / GTP交換因子(GEF)の活性化に従うアッセイを説明しています。 GEFを、ウエスタンブロット法とデンシトメトリーにより定量によって検出された細胞溶解液から沈殿させる。

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