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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
Passaging Cells
  • 00:00Overview
  • 00:40Basic Principles of Subculturing Cells
  • 02:59Common Equipment/Reagents for Passaging Cells
  • 06:36How to Passage Cells
  • 08:03Applications
  • 09:36Summary

Subkultivierung von Zellen

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Overview

Zelllinien werden häufig in biomedizinischen Experimenten benutzt, da sie eine schnelle Kultur und Expansion von verschiedenen Zellarten für die experimentelle Analyse bereitstellen. Zelllinien werden unter ähnlichen Bedingungen kultiviert wir frisch isolierte, oder primäre Zellen. Es gibt jedoch ein paar wichtige Unterschiede: Zellinien benötigen ihre eigenen spezifischen Wachstumsfaktormischungen und ihr Wachstum muss im Gegensatz zu primären Zellen häufiger kontrolliert werden, da sie Mutationen haben, welche es ihnen ermöglichen schnell und unbegrenzt zu wachsen, was zu Überwucherungen führen kann. Deshalb muss man Zellen, welche die Mehrheit der Oberfläche der Zellkulturschale bedecken, also circa 90% konfluent sind, resuspendieren, waschen, experimentell nutzen, für die spätere Benutzung einfrieren, oder eben in neue Zellkulturbehälter subkultivieren.

Dieses Video zeigt wie man die Indikatoren in dem Nährstoffmedium benutzt, um die Zellgesundheit zu beurteilen, welche Reagenzien und Ausrüstung man braucht um sicher die adhärenten Zellen von der Kultur zu entfernen, und verschiedenen Methoden, um schnell expandierende Zellen in eine neue Kultur zu subkultivieren. Außerdem wird gezeigt wie Fütterzellen, die wichtig für das Bereitstellen von unentbehrlichen Wachstumsfaktoren für Zelllinien sind, kultiviert werden und wie man eine größere Anzahl von Zelllinienkulturen auf einmal produziert.

Procedure

Das Passagieren, oder Subkultivieren, von Zellen ist eine häufig angewendete Methode, bei der Zellen von einer bestimmten Kultur unter Verdünnung in eine neue Kultur überführt werden. Dabei werden neue Nährstoffe durch das frische Medium zugesetzt, um eine weitere Expansion zu ermöglichen. Eigentlich ist das Konzept an sich ziemlich einfach, aber in diesem Video erörtern wir einige wichtige Schritte für die erfolgreiche Erhaltung und Expansion von Zelllinien.Toxische Stoffwechselprod…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Passaging Cells. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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