I denne protokol, vi har til formål at beskrive en reproducerbar metode til at kombinere dissocieres humane pluripotente stamceller afledt neuroner og astrocytter sammen i 3D sfære cocultures, vedligeholdelse af disse områder i frie flydende betingelser, og efterfølgende måle synaptic kredsløb aktivitet af kugler med immunoanalysis og multielectrode array optagelser.