Translasyonel vaskülarize kompozit allotransplantasyon araştırmaları için Rat 'ta değiştirilmiş heterotopik Hindekstremite Osteomokutanöz Flap modeli

Klinik olarak yapılan vaskülarize kompozit allotransplants az sayıda greft reddi altta yatan nedenleri incelemek için güvenilir, tekrarlanabilir hayvan modeli gerektirir. Modelde deri, kas ve kemik gibi klinik olarak ilgili dokular mevcuttur. Ayrıca, modelimizin fonksiyonel olmayan doğası daha hızlı cerrahi, flep için daha az iskemik süre ve VCA ortotopik modellere göre daha düşük morbidite sağlar.

El nakli alıcılarında, donör damarların vaskülopatisi damarların tamamen kapanmasına ve aşılı elin iskemik hasarına yol açabilir. Bu model bu vaskülopatik olayların gelişimini incelemek için bir araçtır. Bu cerrahi modeli denemeden önce, birincil cerrah makrovasküler cerrahi teknikleri aşina ve usta olmalıdır.

Bu karmaşık ve uzun bir prosedürdür. Görsel gösteri, diğer laboratuvarların buna göre hazırlanmasına ve ameliyatın adımlarını anlamasına yardımcı olacaktır. Başlamak için, ilk kasık kavite bir deri kesi yaparak bir donör sıçan arka ekstremite hasat, femoral damarları açığa.

Pedikül diseksiyonyardımcı olacak bir ventral deri kesi, olun. Diz ve ayak bileğinin parçalanınmasını takiben, dorsal deri kesimleri yapmak, grefti serbest kılmak için pedikülü transedin ve grefti hemen alıcı cerrahi tabloya taşıyın, burada alıcı hayvanın cerrahi bölgesi greftin iskemik süresini en aza indirmek için önceden hazırlanır. Alıcı hayvan, ortaya çıkarmak ve daha önce olduğu gibi femoral damarları incelemek, ve sonra greft anastomoz, ven uç-uç, arter uç.to-end.

Grefti inguinal cebine sok ve baş aşağı yönlendir. Son olarak, deri dikiş. İşleme başlamak için, anestezili donör sıçan tıraş ve sonra tüy dökücü krem kullanın.

Scruff bölgesine 30 ünite heparin enjekte edin. Bir ısıtma yastığı üzerinde hayvan supine yerleştirin ve prepping tarafından steril bir cerrahi alan üretmek, ovma, ve bacak dorsal yönü de dahil olmak üzere cerrahi alan, draping. Donör sıçan kasık kavitesinde 3 santimetrelik deri kesiyapmak için neşter bıçak sayısı 15 kullanın.

Yanal inguinal yağ yastığı yansıtmak için Iris makas kullanın. Bir pamuklu bez ile künt diseksiyon kullanarak, ortak femoral damarları ortaya çıkarmak, ve sonra karın kasları geri çekmek için elastik bir bant ile bir tel kanca yerleştirin. 40X büyütme ile bir diseksiyon mikroskop altında, mikro-makas kullanın, üç numaralı düz kuyumcu forceps, ve beş adet 45 derece açılı forceps inguinal ligament altında ortak femoral damarların ortaya çıkmasından proksimal peküli incelemek için, ve distally greft içine popliteal damarların birleşimiiçin.

Mikro klipsler ve bipolar kuyumcular forceps kullanarak, ligate ve ana femoral damarları seferber etmek için büyük arteriyel ve venöz dalları bölmek. Herhangi bir küçük dalları cauterize için ince bipolar forceps kullanın. Ayak bileği bölgesine arka bacak ventral tarafı boyunca kesilmiş önceki derinin merkezinden bir deri kesi yapmak için Iris makas kullanın.

Medial proksimal geniküler damarları, derin dallı küçük damarları ve siyatik siniri ortaya çıkarmak ve inkâr etmek için gracilis kasını ve altındaki diğer addüktör kaslarını dikey bir şekilde kesin. Bu noktada, ayrı bir cerrahi tabloda, diğer cerrah entübasyon ve greft yerleştirme için alıcı cerrahi site hazırlamak için alıcı hayvan anestezik ve greft iskemik süresini en aza indirmek gerekir. Diz ve ayak bileği düzeyinde çevresel deri kesiler yapmak, diz ve ayak bileği disarticulate, ve yabancı kas ve doku kaldırmak.

Fibula ve tibia oluşan greft serbest etmek için arka bacak sırt tarafında dikey bir deri kesi olun, ve şimdi sadece pedikül ile bağlı. Femoral arter ve ven üzerinde mümkün olduğunca proksimally olarak küçük kelepçeler yerleştirin ve inguinal ligament mümkün olduğunca yakın pedikül kesti. Kan grefti floş için femoral arter içine heparinized tuzlu enjekte etmek için bir 27-gauge flushing künt kanül kullanın.

İzole grefti sıcak tuzlu gazlı bezle sarın ve hemen alıcı hayvanla birlikte masaya taşıyın, cerrahi bölge zaten vasküler anastomoz için hazırlanmıştır. Alıcı sıçan entübe, ve derinden 2.5-3% buharlaşmış isofluranile anestezik, oksijen dakikada bir litre ile dengeli. Bir ısıtma yastığı üzerine hayvan supine yerleştirin ve ovmak ve cerrahi site örtüsü.

İlk cerrah donör hayvandan greft ilerlerken, anestezi alan sıçanın kasık boşluğunda üç santimetrelik deri kesisi yapmak için 15 numaralı neşter bıçağını kullanın. Yanal inguinal yağ yastığı yansıtmak için Iris makas kullanın. Donör hayvan ile aynı şekilde ortak femoral damarları açığa sonra, karın kasları geri çekmek için elastik bir bant ile bir tel kanca yerleştirin.

O zaman Murphy dallarını ayırVe böl. 10-0 naylon kullanarak dikişler, anastomoz donör damarları kesildi. Venöz uç-yan tekniği ile alıcı gemilere.

Daha sonra uçtan uca teknikle arteriyel anastomoz yapın. Kelepçeleri yavaş yavaş serbest bıraktıktan sonra, kanama için anastomoz bölgelerini izleyin ve gerekirse ek dikişler ekleyin. Etkili greft reperfüzyonu sağlamak için vasküler anastomozu görsel olarak değerlendirin.

Sonra inguinal cebine greft inset, ve baş aşağı yönlendirmek, ayak bileği eklemi üstün, ve diz eklemi inferior. Komşu kaslara greft güvenli için tucking dikişler kullanın. Son olarak, kesilen yatay yatak cilt emilebilir 4-0 dikişler ile cildi kapatın ve el yazması açıklandığı gibi post-operatif bakım ile devam edin.

Sıçan VCA heterotopik hindlimb osteomiyokütanöz flep modeli immünsupresyon altında uzun süreli allogreft sağkalım sağlar. Flep kasık bölgesinde iyi gizlenmiş ve hayvan için minimal morbidite ve rahatsızlık oluşturmaktadır. İmmünsupresyon tedavisi durdurulduğunda greft reddedildi.

Allograft Doppler görüntüleri hemen post-VCA minimal kan profüzyonu bir kayma göstermektedir, gün flep tam revaskülarizasyon 64. 45. günde bir singenik allogreftin deri biyopsisi deri bileşenlerinin normal morfolojisini gösterirken, 75. 45. günde sinjenenik allograft’ın kas biyopsisi normal morfolojigösterirken, kas atrofisi ve mononükleer hücre infiltrasyonu 98.

Gün bir syngenekkik allograft Femoral arter biyopsisi 45 arterin normal morfolojisi gösterir, gün reddi bir allojenik allograft femoral arter aksine 98, bir immünsupazan daha düşük bir doz ile günlük tedavi. Bu model akut ret, kronik ret ve enfeksiyon ve cerrahi hakaret gibi çevresel faktörlerin vaskülopati gelişimi üzerindeki etkilerini test etmek için bir araç sağlar. İmmünsupresif ilaçlar greftin uzun süreli hayatta kalması için gereklidir.

Bu ilaçlar kimyasal olarak tehlikelidir ve dikkatli ve uygun personel koruyucu ekipman ile ele alınmalıdır.