在这里,我们提出了一个协议,描述了一个简化的方法,用于有效生成质粒,同时表达CRISPR酶和相关的单导RNA(sgRNA)。哺乳动物细胞与这种sgRNA/CRISPR载体的共转染,以及检查双链断裂修复的双荧光素酶报告器载体,可以评估敲除效率。