Journal
/
Bioengineering
/
בניית פלסמידים CRISPR וזיהוי יעילות נוקאאוט בתאים יונקים באמצעות מערכת כתב לוציפראז כפול
JoVE Journal
Bioengineering
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Bioengineering
Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

בניית פלסמידים CRISPR וזיהוי יעילות נוקאאוט בתאים יונקים באמצעות מערכת כתב לוציפראז כפול

DOI:
10.3791/59639-v

•

05:51 min

•

December 05, 2020

•

, , , , , ,
1Qingdao Agricultural University, Qingdao, China, 2University of Cantabria, Santander y Torrelavega, Spain

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
  • 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
  • 02:42Dual-luciferase Detection
  • 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
  • 05:20Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המתאר שיטה יעילה עבור הדור היעיל של פלסמידים המבטאים הן את אנזים CRISPR והן את RNA מדריך יחיד (sgRNAs). שיתוף פעולה של תאים יונקים עם וקטור sgRNA / CRISPR זה וקטור כתב לוציפראז כפול הבוחן תיקון הפסקה דו-גדילי מאפשר הערכה של יעילות נוקאאוט.

Tags

CRISPRPlasmid ConstructionDual Luciferase Reporter SystemSgRNAGene EditingPCRCell TransformationBacterial ColonyRecombinant PlasmidsCell LysisDual Luciferase Assay

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

איתור בידוד של תאים מלנומה במחזור באמצעות Flowmetry photoacoustic

גילוי חיידקים וזיהוי באמצעות חיישנים אלקטרוכימיים

בנייה ואפיון של Bioreactor פולד רומן וקאלי

טיפוח של תאי יונקים באמצעות מערכת פניאומטיים Bioreactor יחיד שימוש

Electrotaxis מחקרים של תאי סרטן ריאות באמצעות רב-ערוצי דו-חשמלי-שדה שבב microfluidic

פרוטוקול של נוקאוט גנים מרובים עכבר קטן Organoids באמצעות CISPR-concatemer

דור יעיל ועריכה של נטול מזין IPSCs מתאי הלבלב האנושי באמצעות מערכת CRISPR-Cas9

אורביטל טלטול התרבות של תאים בתרבית של צורת O כלי לייצר אגרגטים אחיד

ייצור מדרגי של הערוץ מתיחה, כפול, צ'יפס Microfluidic איברים

בניית גיליון מרובה שכבות תאי גזע Mesenchymal עם מערכת תרבות דינמית תלת-ממד

Read Article