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이중 루시파라제 기자 시스템을 통해 포유류 세포에서 CRISPR 플라스미드 의 건설 및 녹아웃 효율 검출
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JoVE Journal Bioengineering
Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System
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이중 루시파라제 기자 시스템을 통해 포유류 세포에서 CRISPR 플라스미드 의 건설 및 녹아웃 효율 검출

DOI:
10.3791/59639-v

•

05:51 min

•

December 05, 2020

•

, , , , , ,
1Qingdao Agricultural University, Qingdao, China, 2University of Cantabria, Santander y Torrelavega, Spain

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
  • 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
  • 02:42Dual-luciferase Detection
  • 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
  • 05:20Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

여기서, CRISPR 효소와 관련 단일 가이드 RNA(sgRNAs)를 모두 발현하는 플라스미드의 효율적인 생성을 위한 간소화된 방법을 설명하는 프로토콜을 제시한다. 이 sgRNA/CRISPR 벡터와 이중 루시파라제 리포터 벡터를 결합하여 포유류 세포의 공동 배빙을 통해 녹아웃 효율을 평가할 수 있습니다.

Tags

CRISPRPlasmid ConstructionDual Luciferase Reporter SystemSgRNAGene EditingPCRCell TransformationBacterial ColonyRecombinant PlasmidsCell LysisDual Luciferase Assay

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