Qui presentiamo un protocollo che descrive un metodo semplificato per la generazione efficiente di plasmidi che esprimono sia l'enzima CRISPR che l'RNA a guida singola associato (sgRNA). La co-trasfezione delle cellule di mammifero con questo vettore sgRNA/CRISPR e un vettore reporter a doppia luciferasi che esamina la riparazione della rottura a doppio filamento consente la valutazione dell'efficienza knockout.