यहां, हम CRISPR एंजाइम और संबद्ध एकल गाइड आरएनए (SgRNAs) दोनों को व्यक्त करते हुए प्लाज्मिड की कुशल पीढ़ी के लिए एक सुव्यवस्थित विधि का वर्णन करते हुए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इस sgRNA/CRISPR वेक्टर और एक दोहरी लूसिफ़ेरेस रिपोर्टर वेक्टर है कि डबल स्ट्रैंड तोड़ मरम्मत की जांच के साथ स्तनधारी कोशिकाओं के सह-ट्रांसफेक्शन नॉकआउट दक्षता के मूल्यांकन की अनुमति देता है ।