Journal
/
/
Byggandet av CRISPR Plasmids och detektion av Knockout Effektivitet i däggdjursceller genom en Dual Luciferase Reporter System
JoVE Journal
Bioengineering
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Bioengineering
Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System
DOI:

05:51 min

December 05, 2020

, , , , , ,

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
  • 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
  • 02:42Dual-luciferase Detection
  • 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
  • 05:20Conclusion

Summary

Automatic Translation

Här presenterar vi ett protokoll som beskriver en strömlinjeformad metod för effektiv generering av plasmider som uttrycker både CRISPR-enzymet och tillhörande single guide RNA (sgRNAs). Co-transfection av däggdjursceller med denna sgRNA/ CRISPR vektor och en dubbel luciferase reporter vektor som undersöker dubbel-strand bryta reparation möjliggör utvärdering av knockout effektivitet.

Related Videos

Read Article