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二重ルシファーゼレポーターシステムによるCRISPRプラスミドの構築と哺乳動物細胞におけるノックアウト効率の検出
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Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System
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二重ルシファーゼレポーターシステムによるCRISPRプラスミドの構築と哺乳動物細胞におけるノックアウト効率の検出

DOI:
10.3791/59639-v

•

05:51 min

•

December 05, 2020

•

, , , , , ,
1Qingdao Agricultural University, Qingdao, China, 2University of Cantabria, Santander y Torrelavega, Spain

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
  • 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
  • 02:42Dual-luciferase Detection
  • 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
  • 05:20Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

ここでは、CRISPR酵素と関連する単一ガイドRNA(sgRNA)の両方を発現するプラスミドの効率的な生成のための合理化された方法を説明するプロトコルを提示する。このsgRNA/CRISPRベクターと二本鎖破断修復を調べる二重ルシファーゼレポーターベクターを用いた哺乳動物細胞の共トランスフェクションにより、ノックアウト効率の評価が可能です。

Tags

CRISPRPlasmid ConstructionDual Luciferase Reporter SystemSgRNAGene EditingPCRCell TransformationBacterial ColonyRecombinant PlasmidsCell LysisDual Luciferase Assay

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