Journal
/
/
Bygging av CRISPR Plasmids og påvisning av Knockout effektivitet i pattedyrceller gjennom en Dual Luciferase Reporter System
JoVE Journal
Bioengineering
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Bioengineering
Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System
DOI:

05:51 min

December 05, 2020

, , , , , ,

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
  • 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
  • 02:42Dual-luciferase Detection
  • 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
  • 05:20Conclusion

Summary

Automatic Translation

Her presenterer vi en protokoll som beskriver en strømlinjeformet metode for effektiv generering av plasmider som uttrykker både CRISPR-enzymet og tilhørende enkeltguide RNA (sgRNAs). Samtidig transfection av pattedyrceller med denne sgRNA / CRISPR vektor og en dobbel luciferase reporter vektor som undersøker dobbel-strand pause reparasjon tillater evaluering av knockout effektivitet.

Related Videos

Read Article