Medicine
This content is Open Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En preklinisk råtta modell för studiet av ischemia-reperfusion skada i rekonstruktiv microsurgery
Summary November 8th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Här beskriver vi en preklinisk djurmodell för att studera patofysiologin av ischemia-reperfusion skada i rekonstruktiv mikrokirurgi. Denna fria hudflikar modell baserad på den ytliga caudal epigastriska fartyg i råtta kan också möjliggöra utvärdering av olika terapier och föreningar för att motverka ischemia-reperfusion skada-relaterade skador.
Transcript
Ischemi-reperfusion skada är den främsta orsaken till lock misslyckande i rekonstruktiv microsurgery. Denna video beskriver en pre-kliniska djur modell för studiet av denna Patofysiologi. Denna fria hud lock modell baserad på den ytliga caudal epigastrisk fartyg i råttan kan tillåta utvärdering av olika terapier och föreningar för att motverka ischemi-reperfusion skada relaterade skador.
Mikrokirurgiska rekonstruktioner är idealiska för en stor variation av defekter. Dessa förfaranden säkerställer dock en obligatorisk period av ischemi följt av reperfusionen. Denna period är oftast väl tolererad, och andelen framgångsrika mikrokirurgiska förfaranden överstiger 90%Dock kan endast 73,7% av klaffar som kräver kirurgisk revidering vara helt säker.
Dessutom, i fall av replantation av finger avulsion skador, är andelen framgångsrika om 60%och i fall av sammansatta vävnad re-transplantation, lidande ischemi-reperfusion skada projektion procentsatser ökas sedan skada aktiverar medfödda immunitet. Därför är studiet av detta patofysiologiska fenomen av intresse. För att börja detta förfarande, använd en kirurgisk markör för att dra en tre centimeter med sex centimeter lock, se till att en av de sex centimeter sidor matchar buken mittlinjen.
Därefter gör en sex centimeter hud snitt vid mittlinjen av buken, två vinkelräta tre centimeter snitt, samt en av sex centimeter parallellt med det första snittet. För att börja dissekera den utsedda hudfliken, använd sax och Adson-forceps för att höja klaffen. Dra försiktigt klaffen från kranialområdet mot området kring kaudial.
Dissekera klaffen pedicle utan att röra den eller genom att gripa adventitia så lite som möjligt för att undvika att skada kärlet väggen. Använd 8-0 nylon suturer till occlude genom ligaturer de saphenous fartyg, laterala cirkumflex femorala fartyg, och den proximala caudal femorala fartyg. Kläm fast kärlpediclen och skär den sedan för att starta den åtta timmars ischemiperioden.
Använd hepariniserad saltlösning för att genomstäma klaffen, ta sedan bort det stillastående blodet från mikrocirkulationen. Använd 10-0 nylon suturer för att utföra de mikrokirurgiska anastomoserna. Efter åtta timmars ischemi, reperfuse klaffen genom att ta bort de mikrovaskulära klämmorna, och kontrollera den vaskulära patency.
Först, bedöma blodflödet med hjälp av en transit-tid ultraljud flödesmätare och mikrokirurgiska sonder. Placera målkärlet i flödessondens ultraljudsavkänningsfönster för att kvantifiera flödesvolymen. När bra koppling uppnås och kärlet placeras i det akustiska fönstret utan någon spänning, klicka på postknappen på displayen för att lagra data.
Efter detta, använd 4-0 resorberbara suturer för att stänga huden. För att bedöma klaffens mikrocirkulation, använd laser speckle kontrastanalys. Gör en ny inspelning för varje prov och för varje uppföljning studie genom att klicka på fil, ny inspelning.
Ett nytt fönster öppnas som visar inställningspanelen. Här redigerar du informationen för projektets namn, ämne, operator och inspelningsnamn. Justera arbetsavståndet genom att flytta lasern i förhållande till vävnaden.
Zooma laserhuvudet in eller ut mot vävnaden av intresse. I bildinställningen standardiserar du mätområdet genom att ange önskad bredd och höjd. Ställ in punkttätheten på hög.
Vid bildfångsinställningen väljer du bildhastighet och varaktighet för inspelningen. Klicka sedan på inspelningsknappen för att starta inspelningen. Inställningspanelen ersätts av inspelningspanelen och data sparas automatiskt.
Ta ögonblicksbilder under proceduren för att aktivera ytterligare jämförelse. Efter detta använder Du ImageJ programvara för att mäta överlevnad och nekros områden genom att först placera en linjal på platsen för klaffen och ta kontrollbilder för makroskopisk mätning. I verktygslådan för ImageJ markerar du rak linje och drar en linje över en centimeter av linjalen.
Klicka på analysera, ange skala, och i textboxen för kända avstånd, ange värdet av en centimeter. Klicka på polygonvalsverktyget och rita polygonlinjerna över klaffen för att beräkna det livskraftiga området. Klicka på analysera, mått för att erhålla området värde.
Placera sedan ett postoperativt förband på djuret innan du inhyser för att förhindra självstympning. Sju dagar efter operationen, fotografera det kirurgiska området för att möjliggöra makroskopiska mätningar av lock överlevnad och nekros områden. Med hjälp av den tidigare beskrivna laser speckle kontrast analysteknik, visualisera och kvantifiera perfusion skillnader för att bedöma lockens mikrocirkulation.
Efter den makroskopiska analysen, ta bort 4-0 suturer, höja luckan, och använda transit-tid ultraljud för att omvärdera vaskulär pedicle blodflödet. Utför vävnadsprovtagning genom att i längsled dela upp klaffen i två delar som mäter 1,5 centimeter med sex centimeter. Omedelbart efter skapandet av den mikrokirurgiska anastomoses, vi fått högre blodflödesvärden än de minsta flöden som rekommenderas i litteraturen.
Således var alla microsurgical anastomoses patent en vecka efter operationen. Observation av microcirculatory depravation av blodflödet under den skandinaviska förolämpning var möjligt med laser speckle kontrast analys tekniken. Detta inkluderar den omedelbara hyperperfusion under klaffen reperfusion och perioperatively, de olika områdena med mindre perfusion hade en högre risk för postoperativa lock nekros som var verkligen necrotized sju dagar efter slutet av studien.
Den lock överlevnad område efter åtta timmar av ischemi och dess efterföljande reperfusion var runt 40%Tidigare publicerade resultat visar statistiskt signifikanta skillnader när denna modell jämförs med klaffar där ingen ischemisk förolämpning tillfogas. Kom ihåg att dissekera flik pedicle utan att röra den eller genom att gripa adventitia så lite som möjligt för att undvika att skada kärlet väggen, samt utföra korrekt microsurgical anastomoses i syfte att undvika komplikationer på grund av den kirurgiska tekniken. Intraoperatively, transit-tid ultraljud teknik tillåter oss att kvantifiera blodflödet av mikrokirurgiska anastomoser och därmed förutsäga lock perfusion.
Postoperativt, laser speckle kontrast analys möjliggör en semi-kontinuitet i realtid kartläggning av flödet inom fria klaffar. Det är en lovande teknik, hur ytterligare forskning som än behövs. Denna video har beskrivit protokollet av en lämplig modell för utvärdering av terapeutiska medel för att motverka ischemi-reperfusion skada inom området rekonstruktiv microsurgery.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
