Detta protokoll presenterar ett detaljerat förfarande för att förbereda biologiska kryomplar för synkrotronbaserade röntgenabsorptionsspektroskopiexperiment. Vi beskriver alla steg som krävs för att optimera provberedning och kryokonservering med exempel på protokollet med cancer- och växtplanktonceller. Denna metod ger en universell standard för prov kryoberedning.