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Überwachung von Protein-Liganden-Interaktionen in menschlichen Zellen durch quantitative In-Zell-NMR in Echtzeit mit einem Bioreaktor mit hoher Zelldichte
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Monitoring Protein-Ligand Interactions in Human Cells by Real-Time Quantitative In-Cell NMR using a High Cell Density Bioreactor
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Überwachung von Protein-Liganden-Interaktionen in menschlichen Zellen durch quantitative In-Zell-NMR in Echtzeit mit einem Bioreaktor mit hoher Zelldichte

DOI:
10.3791/62323-v

•

10:25 min

•

March 09, 2021

•

,
1Magnetic Resonance Center − CERM,University of Florence, 2Consorzio Interuniversitario Risonanze Magnetiche di Metalloproteine − CIRMMP, 3Neurofarba Department,University of Florence

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:47Bioreactor Setup
  • 01:34Preparation of the Cell Sample
  • 04:03Bioreactor Operation and NMR Experiments
  • 06:00MCR-ALS Analysis
  • 08:06Results: Monitoring Protein-Ligand Interactions by Real-Time Quantitative In-Cell NMR
  • 09:48Conclusion

Summary

Automatic Translation

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Dieses Protokoll beschreibt den Aufbau eines NMR-Bioreaktors, um verkapselte menschliche Zellen bis zu 72 h lebensfähig zu halten, gefolgt von einer zeitaufgelösten NMR-Datenerfassung und -analyse in der Zelle. Die Methodik wird angewendet, um intrazelluläre Protein-Ligand-Interaktionen in Echtzeit zu überwachen.

Tags

In-cell NMRProtein-ligand InteractionsHuman CellsBioreactorReal-time MonitoringProtein StructureProtein FunctionConformational ChangesChemical ChangesIsotope LabelingHEK 293T CellsAgarose ThreadsCell EmbeddingFlow UnitNMR TubeTemperature ControlCell ViabilityCell Metabolism

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