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CRISPR/Cas9による遺伝子ノックインとマクロファージおよびT細胞株における細胞分類
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines
DOI:

11:32 min

November 13, 2021

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Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
  • 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
  • 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
  • 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
  • 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
  • 10:16Representative Results
  • 10:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

このプロトコルは、蛍光レポーターと細胞分類を使用して、マクロファージおよびT細胞株におけるノックイン実験を簡素化します。これらの単純なノックイン実験、すなわちCRISPR/Cas9-およびDsRed2発現プラスミドと、免疫細胞内の Rosa26 遺伝子座に永久に統合されたEBFP2を発現する相同組換えドナープラスミドの2つのプラスミドが使用されます。

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