Journal
/
Bioengineering
/
In vitro Selectie van gemanipuleerde transcriptionele repressoren voor gerichte epigenetische uitschakeling
JoVE Journal
Bioengineering
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioengineering
In Vitro Selection of Engineered Transcriptional Repressors for Targeted Epigenetic Silencing
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

In vitro Selectie van gemanipuleerde transcriptionele repressoren voor gerichte epigenetische uitschakeling

DOI:
10.3791/64403-v

•

10:44 min

•

May 05, 2023

•

, , , , , , ,
1San Raffaele Telethon Institute for Gene Therapy (SR-Tiget),IRCCS San Raffaele Scientific Institute, 2Center for Omics Sciences,IRCCS San Raffaele Institute, 3Institute for Biomedical Technologies,National Research Council, 4Vita-Salute San Raffaele University

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 01:34Engineering a Fluorescence-Based Reporter Cell Line
  • 03:10Designing gRNAs for CRISPR/dCas9-Based Epigenetic Silencing of Target Gene
  • 04:13Arrayed Transient Delivery of CRISPR/dCas9-Based ETRs in Reporter Cell Line
  • 07:19Analyzing Transcriptional Activity of Target Gene Over Time
  • 08:11Results: dCas9 ETR-Mediated Epigenetic Silencing of Human B2M Gene by gRNAs
  • 09:23Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Hier presenteren we een protocol voor de in vitro selectie van gemanipuleerde transcriptionele repressoren (ETR's) met een hoge, langdurige, stabiele, on-target uitschakelingsefficiëntie en een lage genoombrede, off-target activiteit. Deze workflow maakt het mogelijk om een initieel, complex repertoire van kandidaat-ETR's terug te brengen tot een shortlist, geschikt voor verdere evaluatie in therapeutisch relevante settings.

Tags

Keywords: Epigenetic SilencingGene SilencingArtificial NucleasesEngineered Transcriptional RepressorsChromatin CompactionTranscriptional InhibitionGene DisruptionRNA InterferenceB2M GeneCRISPR Cas9Nucleofection

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/64403?article_type=v

Cellulaire vetextractie voor gerichte stabiele isotopen Verdunning vloeistofchromatografie-massaspectrometrie Analyse
check_url/64403?article_type=v

Chirurgische techniek voor de inplanting van Tissue Engineered vaattransplantaten en de daaropvolgende<em> In Vivo</em> Monitoring
check_url/64403?article_type=v

Productie, karakterisering en toepassingsmogelijkheden van een 3D Tissue-engineered Human Slokdarmkanker Mucosale Model
check_url/64403?article_type=v

Test op oogirritatie (EIT) voor Risico oog irriterende stoffen met gereconstrueerde humane Cornea-achtige Epithelial (RHCE) Tissue Model
check_url/64403?article_type=v

Engineered Gevasculariseerd Muscle Flap
check_url/64403?article_type=v

Een gecombineerde 3D Weefselmanipulatieproducten<em> In Vitro</em> /<em> In Silico</em> Lung Tumor Model voor het voorspellen van de Drug Effectiveness in Specifieke Mutatie Achtergronden
check_url/64403?article_type=v

Gerichte plasmamembraan Levering van een hydrofobe Cargo ingekapseld in een Liquid Crystal nanodeeltjes Carrier
check_url/64403?article_type=v

Een<em> In Vitro</em> Organ Culture Model van het Muizen tussenwervelschijf
check_url/64403?article_type=v

Productie van genetisch gemanipuleerde gouden Syrische Hamsters door Pronuclear injectie van het Complex van de CRISPR/Cas9
check_url/64403?article_type=v

Onderdrukken van Gene transcriptie door cellulaire machines met chemische epigenetische Modifiers omleiden

Read Article