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イン・ビトロ 標的エピジェネティックサイレンシングのための遺伝子操作転写リプレッサーの選択
JoVE Journal
Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering
In Vitro Selection of Engineered Transcriptional Repressors for Targeted Epigenetic Silencing
DOI:

10:44 min

May 05, 2023

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Chapters

  • 00:05Introduction
  • 01:34Engineering a Fluorescence-Based Reporter Cell Line
  • 03:10Designing gRNAs for CRISPR/dCas9-Based Epigenetic Silencing of Target Gene
  • 04:13Arrayed Transient Delivery of CRISPR/dCas9-Based ETRs in Reporter Cell Line
  • 07:19Analyzing Transcriptional Activity of Target Gene Over Time
  • 08:11Results: dCas9 ETR-Mediated Epigenetic Silencing of Human B2M Gene by gRNAs
  • 09:23Conclusion

Summary

Automatic Translation

ここでは、高い、長期にわたる、安定したオンターゲットサイレンシング効率と、低いゲノムワイドなオフターゲット活性を持つ、遺伝子操作された転写抑制因子(ETR)の in vitro 選択のためのプロトコルを提示します。このワークフローにより、候補となるETRの初期の複雑なレパートリーを、治療上重要な設定でのさらなる評価に適した短いリストに減らすことができます。

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