Моделирование мышей колит использованием декстрана сульфата натрия (DSS)

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Декстран сульфата натрия (DSS) вводят в питьевой воде является признанным мышиной модели воспалительных травмы острого колита. Этот протокол описывает метод для DSS лечения и подготовки ткани.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Whittem, C. G., Williams, A. D., Williams, C. S. Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS). J. Vis. Exp. (35), e1652, doi:10.3791/1652 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Колит может быть вызван вирусной или бактериальной инфекции, ишемический инсульт, или аутоиммунные расстройства, особенно неспецифический язвенный колит и толстой вариант Болезнь Крона - Колит Крона. Острого колита могут проявляться болями в животе и вздутие живота, нарушение всасывания, понос, Hematochezia и слизи в стуле. Мы начинаем понимать сложные взаимодействия между окружающей средой, генетики и эпителиального барьера в дисфункция Воспалительные заболевания кишечника и животных моделях колита, сыграли существенную роль в продвижении нашего понимания этого заболевания. Один из популярных моделей не предусматривает дополняющие питьевой воды мышей с низкой молекулярной массой декстран сульфата натрия (DSS), что приводит к повреждению эпителия и надежный воспалительную реакцию в толстой кишке в течение нескольких дней

Protocol

Часть 1: Травма-Ремонт колит модели

  1. Базовый вес должен быть получен для каждой мыши до начала лечения DSS.
  2. Сделайте 3% (м / о) Декстран Сульфат натрия Солевой раствор в воде и фильтр с 0,45 мкм фильтр из ацетата целлюлозы.
  3. Замените питьевую воду в клетке мыши с 3% DSS решение в течение четырех дней. Мышей не должны иметь доступ к любому другому источнику воды (т.е. советы исключения размещены на автоматизированные системы полива).
  4. На четвертый день, замените DSS раствор водой в течение еще трех дней, что позволило некоторым толстой эпителиальных восстановления. Мышей должна быть взвешена на четвертый день для того, чтобы количественно системные последствия колита. Потеря веса общего с серьезной травмой.
  5. На 7-й день, взвесить и жертвы мышей. Мыши могут быть умерщвлены путем ингаляционного передозировки изофлуран или другие институционально IACUC утвержденными методиками.

Часть 2: вскрытие и уборки Колон

  1. Expose брюшной стороне мыши и безопасной ноги для обеспечения беспрепятственного доступа к животу. Влажные живота полностью с 70% этанола.
  2. Возьмитесь средней линии живота с тканью щипцы и расширить вверх таким образом места для палаток кожи. Используйте с острым концом ножниц надрезать брюшко тем самым подвергая содержимого брюшной полости. Расширение Разрез до кончика xyphoid процесс в средней линии, а затем распространяется вдоль нижней аспект прибрежных полей на двусторонней основе.
  3. Определить тонкой кишки, слепой кишки и толстой кишки. Осторожно рассекают / дразнить толстой кишки с окружающими брыжейки. Трансекта толстой кишки в глубине таза, чтобы освободить дистальной толстой и прямой кишки. Трансекта толстой кишки на colonocecal маржу, чтобы освободить проксимальных толстой кишки. Необходимо соблюдать осторожность во время этого процесса, чтобы не повредить толстую кишку, как очистка толстой кишки будет проблематично, если перфорация происходит.
  4. Использование 20G игла кормления и 10 мл шприца, интубация и промойте толстой ледяной PBS до элюата совершенно ясно, кала.
  5. На данный момент, если макроскопического анализа с рассекает микроскопом желательно, двоеточия может быть зафиксирован как "колбаса". Если гистологический анализ только желательна, чем приступить к Части 4 «Создание швейцарских Валки для гистологического анализа острого колита".

Часть 3: Обработка как "Колбасы" для макроскопических Анализ всей толстой кишки

  1. Очень важно поддерживать правильную ориентацию толстой кишки, поэтому держать дистального конца толстой кишки ближе к оператору. Отрежьте два куска, не рассасывающиеся нити (SP116 1,5 метрический плетеные шелковые), один около 1 дюйма в длину, другие 2 дюйма.
  2. Использование 2-дюймовый кусок шва, чтобы связать с дистального конца как можно ближе к краю, как возможно, сохраняя хорошее уплотнение.
  3. Место 20G иглу кормления, содержащий 5 мл 10% буферный формалин фосфата в проксимальном конце толстой кишки. Свободно галстук оставшийся кусок шва сразу проксимальнее луковица кормления иглы. Возьмите толстую кишку твердо на луковицу кормления иглы и настаивать формалина до толстой кишки расширена. Затяните узел на шов, как вы снять кормления иглой, оставляя таким образом переплетаются, расширение толстой кишки, как "колбаса".
  4. Заполнить 15 мл коническую трубку с 10% буферный формалин фосфата и место двоеточия в трубку. Fix течение 24 часов.
  5. Вылейте формалина и заменить 70% этанола для дополнительных 24 часов. (Двоеточие могут быть сохранены в 70% этанола на неопределенное время при комнатной температуре.)
  6. Удалить из толстой кишки конической трубе и сократить строки на каждом конце с помощью скальпеля, соблюдая осторожность, чтобы не повредить толстую кишку. Помните, что дистальный конец имеет самую длинную веревочку. Вырезать продольно от дистальной к проксимальной конце толстой кишки, так что он образует длинный лист. На данный момент, толстой кишки можно рассматривать под микроскопом вскрытии.

Часть 4: Создание швейцарских Валки для гистологического анализа острого колита

  1. Очень важно поддерживать правильную ориентацию толстой кишки, поэтому держать дистального конца толстой кишки ближе к оператору.
  2. Измерьте длину толстой кишки. Этот показатель является еще одним показателем тяжести травмы. Колит увеличивается отек и сокращает общую длину толстой кишки.
  3. Использование с острым концом ножниц, надрезать продольно от дистальной к проксимальной конце толстой кишки. Использование тонкой наконечником захватить пинцетом или края разреза и открытой с боков продвигаясь дистально-> проксимально, демонстрируя тем самым толстой кишки в виде плоского листа.
  4. Роллинг толстой кишки необходима пара щипцов и двуручным техники. Возьмите любого края дистального края щипцами. Приступить к последовательно рулон толстой кишки поворотом и выпуская щипцов перейти к проксимального края. Таким образом генерации спираль с третьим измерением, или "швейцарской ролл".Для поддержания формы проката, держитесь крепко ролл пинцетом и разрез ее 27G1 / 2 иглы. Безопасные иглы, согнув иглу при выходе из рулона.
  5. Место обвалять в соответствующей маркировкой кассет ткани и поместите в банку с 10% буферный формалин фосфата при комнатной температуре в течение 24 часов, чтобы обеспечить фиксацию ткани.
  6. Вылейте формалина и заменить 70% этанола для дополнительных 24 часов. (Двоеточие могут быть сохранены в 70% этанола на неопределенное время при комнатной температуре.)
  7. Как только образец был зафиксирован, он может быть парафин, секционные и установлен на салазках для гистологического анализа.

Часть 5: Представитель Результаты

DSS модель для острого колита позволяет исследователю получать, фиксировать и анализировать толстой кишки, что модели острого колита. Когда рулет режется и монтируется, она должна стать представителем кусочек всей толстой кишки, если проката должным образом (рис. 1). Установлен рулон могут быть окрашены с H & E для того, чтобы определить степень повреждения толстой кишки, от дистальной (внутри) конец проксимальных (снаружи) концом (рис. 2). Immunohistochemistry также может быть выполнена на рулет для идентификации и количественного определения воспалительных инфильтратов. Если колбаса метода была выполнена правильно, фиксированный толстой кишки будут расширены и всей поверхности слизистой оболочки можно легко манипулировать и рассматривать под микроскопом рассечение (рис. 3).

Рисунок 1
Рисунок 1. Должным образом выполнены "рулет". (А) толстой кишки выпадает из дистальнее проксимального конца, пересекаются с иглой и обеспеченные изгиба конца иглы. Он помещается в ткань кассеты для фиксации. (B) H & E 5 мкм окрашивали разделе рулет из толстой кишки мышей получавших DSS (D = дистальной толстой кишки р = проксимальных толстой кишки).

Рисунок 2
Рисунок 2. DSS рассматриваются двоеточия проявлять признаки острого колита. Воспаление и склеп повреждения проявляются в DSS обработанных толстой кишки по сравнению с воды, обработанной контроля.

Рисунок 3
Рисунок 3. Пример "колбаса". Колбасы придают с формалином и полностью расширен. Небольшим углом будет присутствовать вторичной по отношению к естественной кривизны толстой кишки. Открыл колбасы должны сохранять плоскую форму.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Этот протокол может быть изменена для модели острого повреждения, травмы, ремонт, или хронические процессы толстой травмы.

Модификация острого травматизма:

DSS лечения импровизировать в течение 4-6 дней, после чего немедленно жертвы

Травма-Ремонт изменения:

Травма с 4-6 дней лечения DSS затем восстановительный период в 3-4 дня и жертвы (как описано выше в протокол).

Хронический колит Модификация:

Мыши размещены на трех пятидневного цикла 3% DSS с шестнадцати дней восстановления между каждым циклом. Мыши были принесены в жертву после финального 16-дневный период отдыха.

Есть несколько вопросов, которые исследователи должны быть осведомлены о данной модели:

  1. Изменчивость в месте повреждения: в наших руках, мы видим, преимущественно дистального травмы узором, с относительной скуп на проксимальных толстой кишки и слепой кишки. Другие страны сообщили о более проксимальных преобладание на травму узор.
  2. Экологическая изменчивость. Существует значительная изменчивость окружающей среды. Это, вероятно, отчасти, из-за различия в микрофлоре кишечника, диету и другие экологические соображения.
  3. Эта модель является неэффективной, если высоким молекулярным весом DSS используется (т.е. 500 000 Da).
  4. Существует значительная вариабельность напряжение с этой моделью 4.

Биохимический анализ толстой кишки может быть выполнено путем взятия проб из проксимальных или дистальных краев. В зависимости от тяжести травмы это может повлиять на вашу способность генерировать гистологические оценка травмы. В естественных условиях BrdU маркировки для измерения распространения может быть достигнуто при введении препарата в 16,7 мкг / кг BrdU 2 часа до жертву затем α-BrdU IHC обработки.

В качестве альтернативы "колбаса", толстой кишки может быть установлена ​​совершенно плоским. Линия нижней части контейнера с Tupperware ватмане и замочить бумагу с 10% буферный формалин фосфата. Рассеките толстой кишки, как описано в "Часть 2: вскрытие и уборки Колон". Опять же, держать дистального конца толстой кишки ближе к оператору. Использование с острым концом ножниц, надрезать продольно от дистальной к проксимальной конце толстой кишки. С тонкой наконечником щипцы понять любого края разреза и открытой с боков работает, демонстрируя тем самым толстой кишки в виде плоского листа. Передача этого плоского листа, чтобы предварительно пропитанной ватмане. Обложка плоский толстой кишки с другой частью ватман и мокрым от 10% буферный формалин фосфата. Ватман должна быть полностью покрыта в формалине, но не так сильно, что она взлетает толстой кишки. Печать Tupperware и исправить в течение 24 часов. Удалить из толстой Tupperware и поместить его в 10 мл 70% этанола в 15 мл коническую трубку. (Двоеточие могут быть сохранены в 70% этанола на неопределенное время при комнатной температуре.)

Есть несколько методов для количественного толстой травмы 5,6,7. Один из методов, например, использует многопараметрические масштаба в том числе: воспаление, степень участия, регенерация, склеп повреждения, и процент участия 8.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами установленными Вандербильта IACUC.

Acknowledgements

Финансовые средства, предоставленные NIH (1 K08 DK080221-01) и Вандербильт институциональных фондов развития.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dextran Sulfate Sodium Salt USB Corp., Affymetrix 9011-18-1 mol wt 40,000-50,000
10% Buffered Formalin Phosphate Fisher Scientific SF100-4
Isoflurane, USP Phoenix Pharmaceuticals, Inc. NDC 57319-474-06
TISSUE PATH Macrosette Cassettes Fisher Scientific 15182706
BD 10 ml Syringe BD Biosciences 309604
Ethyl Alcohol Pharmco-AAPER E190 Dilute to 70% with distilled water
20G Straight Feeding Needle VWR international 20068-612
27G1/2 PrecisionGlide Needle BD Biosciences 305109
Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip VWR international 82027-588
Waugh Forceps VWR international 82027-428
Non-absorbable Suture LOOK Surgical SP116
Whatman Blotting Paper VWR international 28298-020 Cut as needed
Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter Cole-Parmer EW-06731-2
Carbon fiber composites digital caliper Fisher Scientific 15-007-958

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98, (3), 694-702 (1990).
  2. Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis. Gastroenterology. 131, (2), 579-588 (2006).
  3. Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Lab Anim. 15, (1), 57-59 (1981).
  4. Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).
  5. Aharoni, R. Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease. J Pharmacol Exp Ther. 318, (1), 68-78 (2006).
  6. Hahm, K. B. Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease. Gut. 49, (2), 190-198 (2001).
  7. Green, B. T. Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287, (6), G1238-1246 (2004).
  8. Dieleman, L. A. Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines. Clin Exp Immunol. 114, (3), 385-391 (1998).

Comments

55 Comments

  1. what kind of mice you used in the experiment? hao ole of the mice when you treatment with DSS

    Reply
    Posted by: echo r.
    March 18, 2010 - 8:43 PM
  2. We use both 1²9 and C57BL6 mice in this experiment but the protocol can be used in any background. The mice are at least 6 weeks old before we begin treatment with DSS.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    March 19, 2010 - 10:27 AM
  3. what kind of mice you used in the experiment? hao ole of the mice when you treatment with DSS

    Reply
    Posted by: echo r.
    March 18, 2010 - 9:36 PM
  4. what happens if we keep the colon more than ²4 hours in 10%formalin ?

    Reply
    Posted by: peyman m.
    May 23, 2010 - 6:17 AM
  5. Leaving them in the 10% formalin shouldn't be a problem. We have left them over the weekend. For counts, longer fixation shouldn't be problematic, but I would put them in 70% ethanol before the end of 3 days.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 23, 2010 - 6:38 PM
  6. should DSS be prepared daily? and why it need be filtered?&#²9²59;Is the coulor of the solution&#²9²59;(DSS solute in filter water ) yellow

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 15, 2010 - 8:50 AM
  7. The DSS dŒs not need to be prepared daily. You can fill a water bottle enough for the four days on DSS. It needs to be filtered because you will be handling it before filtering and it can harbor bacteria, etc. that you don't want to feed to your mice. Yes, the color of the solution is slightly yellow.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 15, 2010 - 11:52 AM
  8. should I store the solution in routine temperature or in the fridge?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2010 - 2:50 AM
  9. It is stored at room temperature.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 16, 2010 - 12:54 PM
  10. should I change the solution containing dss daily ? dŒs it influence the result if i do not change the solution daily?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2010 - 9:48 PM
  11. There is no need to change the solution daily. Just put enough DSS solution in the water bottle on day one to last for the duration of the first cycle of DSS.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:02 PM
  12. In our animal facility ,autoclaved tap water is used for all the mice. can I prepare DSS solution in tap water and then filter , or only distilled water shuld be used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:57 AM
  13. You can prepare the solution in tap water and then filter.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:03 PM
  14. Dear Drs Whittem, Williams and Williams:

    Hello, I am writing a protocol to my University's IACUC to perform DSS induction of colitis, and was hoping that you may be willing to answer some of my questions regarding the animals subjected to DSS. I will be using the acute injury and injury repair models mentioned in your article. Could you please provide additional details of the stress that the mice might experience throughout the course of the experiment? The signs stated on the tutorial included weight loss, bloody stools, and diarrhea. Do these mice have additional issues such as an inability to retrieve food from an overhead feeding dish/water bottle, anorexia, inability to groom, contractures (i.e. 'hunching' in response to pain) or additional signs that may be useful to note when submitting my protocol? Also, should I expect mortality during treatment? As recommended, I will use mice older than six weeks, but likely not several weeks older as I want to avoid age-related issues. Finally, would you recommend the use of any type of analgesic drug during the course of DSS-colitis experiments to minimize discomfort in these animals? If so, would you happen to know the effect the analgesic has on factors such as barrier function, healing, infection rate, overall survival etc.? As I do not yet have any personal experience with this model, any insight will be greatly appreciated. Thank you.

    Reply
    Posted by: Elle F.
    June 28, 2010 - 8:03 AM
  15. For the acute injury and injury repair models you should only see the stresses mentioned in the article, weight loss, bloody stool, and diarrhea. There are no additional issues and you should not expect mortality during treatment. I would not recommend the use of an analgesic drug because, for example, NSAIDs will injure the gut and they should not be needed. Good luck!

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 28, 2010 - 10:52 AM
  16. How do you utilize the sausages? I assume you slit them lengthwise after fixation and then stain (with what?) and examine them enface in a dissecting scope. What can you learn from this type of examination? Do you have a preferred method for quantitation of the resultand data?

    Reply
    Posted by: John W.
    July 30, 2010 - 3:05 PM
  17. You are correct, the sausages are cut lengthwise and stained with methylene blue and analyzed for aberrant crypt foci and polyp burden. The data is collected as and quantified as numbers of ACF/colon or number or size of polyps per colon.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    July 30, 2010 - 3:19 PM
  18. Read the abstract,
    "Mice are euthanized at the conclusion ... and at necropsy ... and can be 'Swiss rolled" 3 to allow microscopic analysis of the entire colon or infused with formalin as "sausages" to allow macroscopic analysis. Tissue is then embedded in paraffin, sectioned, and stained for histologic review."

    "Swiss roll" is for histological analysis, while "sausage" is for macroscopic analysis of the ENTIRE colon.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 6, 2010 - 11:21 AM
  19. is dextran a reliable model for colitis...?do i use the drug for treatment before or after colitis using dextran?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 12, 2011 - 7:20 AM
  20. DSS is one of the better models for colitis. The papers found at the following sites as well as those that we cite in our paper give good information on the topic. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9844047?dopt=Citation http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8881816?dopt=Citation http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14611673?dopt=Citation We have not performed treatments on mice on DSS. We mainly use it to analyze the response of knockout models to experimental colitis. Treatment times would depend on whether you would like to prevent or treat colitis.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 15, 2011 - 6:24 PM
  21. I'm working with this model, but using ²% DSS as described. We bought our chemicals from another company, but the molecular weight is the same. Can you tell me more about the bloody diarrhea. I have finished the DSS water, but did not notice any blood. There was a bit of an excessive amount of feces, but I did not see the mice hair (white) or bedding stained with dried blood. I've read in other papers that not all the mice have it, but dŒs the fact that I did not see any mean that something went wrong?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 17, 2011 - 1:21 PM
  22. There can be considerable variability in the severity of colitis induced by DSS. This depends on manufacturer, lot #, environment, differences in enteric flora. We typically track weights, DAI which includes stool consistency, blood, etc, measure colon length and weight at necropsy and for us, we consider the histology observed from reviewing the H+E's as the gold standard for injury. I would recommend reviewing the histology with a GI pathologist.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 20, 2011 - 3:00 PM
  23. I am submitting a protocol for DSS to the IACUC. They want to know how I "will deal with the diarrhea with occult blood". Is there anything that we can administer to the mice to make the IACUC happy? They want to know how long I will let these symptoms go on before removing the mouse from the study. Unfortunately, all of these things are facets of the disease.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2011 - 10:09 AM
  24. Hello Jesse,
    We insure that IACUC knows that mice that drop below ²0% weight loss are sac'd. The amount of time that mice are on DSS results in diarrhea and blood for only 4-6 days and mice recover well. You should not have to worry about mice having symptoms for more than a week.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 18, 2011 - 12:00 PM
  25. Thank you for your response. Another question...if the mice are in distress(eg. bloody diarrhea) but we don't give them any analgesic, then the IACUC will make them go down as Category E by USDA standards. DŒs anyone else have experience with this? DŒs anyone else list them as Category E?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2011 - 2:00 PM
  26. Ours are Category E

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 18, 2011 - 6:19 PM
  27. The water to be used with the DSS should be autoclaved water?

    Reply
    Posted by: Lilian N.
    August 18, 2011 - 10:50 PM
  28. DŒs anybody do anything to combat dehydration in these mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 19, 2011 - 10:56 AM
  29. Sucrose 6%.
    http://farncombe.mcmaster.ca/documents/Ghiaetal.GastrŒnterology²0091367²²80-²²88.pdf

    Reply
    Posted by: Lilian N.
    August 19, 2011 - 12:57 PM
  30. The water used with DSS dŒs not need to be autoclaved. You should filter it after making the DSS solution. We do IP saline injections.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 19, 2011 - 1:39 PM
  31. DSS will be degrade or not in water. How DSS solution will be filtered what is procedure for that.can u elaborate thanks

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2011 - 3:11 AM
  32. We have not officially tested whether DSS degrades in water over extended periods of time. We make fresh DSS solutions for each cycle of DSS that is administered and do not reuse the DSS that is remaining in the water bottles after each cycle. As mentioned in the protocol, we make a 3% (w/v) Dextran Sulfate Sodium Salt solution in water and filter with a 0.45 μm cellulose acetate filter (Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter, Cole-Parmer, catalog number: EW-06731-²). The directions for this filter come with it but it is simply a vacuum filtration system as pictured in the video (seen at 0:5², "Injury-Repair Colitis Model").

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    September 25, 2011 - 3:50 PM
  33. Has anyone used buprenorphine in the DSS model?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 27, 2011 - 1:29 PM
  34. Question: In this mouse model of DSS colitis, do we have to to remove the colon contents (stools) before histological analysis? How is this done? Thank you!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 14, 2011 - 10:49 AM
  35. At 3:17 in the video the removal of stools is shown. The colon is flushed with PBS using a ²0G straight feeding needle.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    October 17, 2011 - 4:38 PM
  36. In some protocols, people sacrifice the mice 3 or 5 days after DSS treatment. What is the purpose of this? How is this different from killing the mice after 4 days of DSS treatment.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 16, 2012 - 4:52 PM
  37. The number of days that you sac after DSS treatment will determine the amount of time the mice have to heal. we generally use 4 days because, in wild type mice, this is usually the best amount of time to see the beginnings of recovery while still noting damage in the mice of interest used in our lab. Basically, this is the point at which we see the most difference between the two groups. If you have a mouse that you expect to heal more quickly, 3 days may be suitable, and vice versa.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    January 18, 2012 - 1:21 PM
  38. Regarding the step 7 of part 4 in the protocol mentioned above, how do you remove a needle from a swiss-rolled tissue before going forward to paraffin-embedding? Just pull out? Do you have a specific way to do that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 17, 2012 - 6:05 PM
  39. Once the tissue is formalin fixed, the tissue will be stiff enough that you can either unbend or clip the needle and slide it out of the roll without altering the shape of the Swiss roll. Our tissue processing core knows how to handle our tissue, but if you need to do it yourself, insure that the tissue has been in 70% ethanol at least overnight and then use gloves and forceps to remove the needle from the roll.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    January 18, 2012 - 1:24 PM
  40. What are the strains of mice used for this model? And what is the health status of the animals?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 10, 2012 - 11:16 AM
  41. We use C57Bl6 mice for our experiments. Our mice are healthy before treatment with DSS.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    December 13, 2012 - 1:04 PM
  42. Hello, I am writing a protocol to my University's IACUC to perform DSS induction of colitis.Should I put DSS in Hazardous material form?Is there any method to detect the DSS excretion in feces and urine?How can we deal with the waste from DSS (unused solution)?

    Thanks,

    Reply
    Posted by: Jinggang L.
    December 13, 2012 - 11:22 AM
  43. Our IACUC protocol dŒs not include DSS as a hazardous material and we pour waste DSS down the drain. As far as I know, there is not a method to detect DSS excretion in feces and urine.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    December 13, 2012 - 1:06 PM
  44. Hi
    In the materials you list Dextran Sulfate Sodium Salt USB Corp., Affymetrix 9011-18-1 mol wt 40,000-50,000.
    However when I check Affymetrix website, this catalog number belongs to a MW: 500,000 product (http://www.affymetrix.com/esearch/search.jsp?pd=131111&N=4²94967²93) . is this what you used or otherwise what is the correct catalog number. thanks!

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 6, 2013 - 10:50 AM
  45. I am so sorry for the confusion. The number listed in the protocol is the CAS# which is similar between the 500,000 and 50,000 M.W. DSS. The actual catalog number is 14489. This number should get you what you need (http://www.affymetrix.com/estore/browse/brand/usb/product.jsp?productId=130²61#1_1).

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 6, 2013 - 12:00 PM
  46. Thanks a lot for the catalog number!
    Could you please explain the injection of saline to prevent dehydration? How often and how much should it be injected? I guess all mice should get the same amount at the same time, right?
    And when the mice get sick, should we put some food on the bottom of the cage, or are they usually capable of getting the food themselves? thanks again.

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 13, 2013 - 3:44 PM
  47. We usually only inject mice that are not looking healthy and we generally do this as needed. I will only inject a 1ml bolus on a single day. You can repeat this the next day, but this is really just a last resort. We sacrifice them once they reach ²0% weight loss so they don't have undue stress. When the mice get sick, I do tend to try and put food in the bottom of the cage in case the mice aren't able to reach up into the food distributor. If the mice are getting so sick that you need to inject with PBS or move the food down, you may want to try a smaller concentration of DSS (²% or 1%) or perform the treatment for a shorter time. We have had several genotypes that don't handle the DSS as well and decreasing the concentration or treatment time really helps them. There is also facility to facility variability dependent on mouse microbiomes so my mice may be less sensitive than your mice to DSS and even your WTs might have different responses than mine. In short, we often need to tweak the protocol so that we can get injury while insuring survival for the extent of the protocol that we need to perform.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 13, 2013 - 4:29 PM
  48. thanks a lot, Caityln, you are really helping a lot because we have no experience in that.

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 14, 2013 - 4:56 AM
  49. Inducing colorectal cancer in rats: I am in a predicament; instead of the DSS Mw 40,000, I have ordered DSS (Mr 5,000) by accident. Unfortunately I noticed this too late and have a very limited time. I have read that the Mw of DSS does play a role in inducing colitis, whereby 5 kDa could induce milder form of colitis. I plan to inject my rats with AOM (12 mg/Kg), expose the rats to 2 cycles of 1 week of 2% DSS following 2 weeks of water. These rats are quite old, 12 weeks to be exact. They are also Wistar rats so at this time they are prone to develop cancer easily. However, I would like to know is using 5 kDa DSS worth it? Could you please provide me with some advice?

    Reply
    Posted by: Lynn C.
    February 16, 2014 - 6:30 AM
  50. Unfortunately, I do not think that Mr 5,000 will work.

    Reply
    Posted by: Christopher W.
    February 19, 2014 - 9:21 AM
  51. can we use dss with m.w 500.000 for induce colitis?

    Reply
    Posted by: flora s.
    January 29, 2015 - 9:41 PM
  52. Is there a difference between female and male mice? Which would should i choose?

    Reply
    Posted by: stu a.
    February 17, 2015 - 11:42 AM
  53. We have not noticed a difference with gender; however, as the environment is a strong contributor to the severity of colitis, I would recommend test experiments with male and female WT mice in your facility.

    Reply
    Posted by: Christopher W.
    February 17, 2015 - 12:24 PM
  54. Would you also have an advice on how to minimize the variability between the cages? I was considering to mix treated and not treated animals in the same cage (our treatment is injected). However I am afraid that the groups will have cross effects on each other.
    Thank you

    Reply
    Posted by: stu a.
    February 17, 2015 - 2:25 PM
  55. Is it plausible to use 500,000 mw DSS? 1-2% for induction oftumours with AOM, I thank all advice.

    Reply
    Posted by: VERONICA M.
    May 14, 2015 - 5:04 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics