Murine Colitis Modeling met dextraansulfaat Natrium (DSS)

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Dextransulfaat natrium (DSS) toegediend in het drinkwater is een gevestigde murine inflammatoire letsel model van acute colitis. Dit protocol beschrijft de methode voor DSS behandeling en de preparatie van de weefsels.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Whittem, C. G., Williams, A. D., Williams, C. S. Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS). J. Vis. Exp. (35), e1652, doi:10.3791/1652 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Colitis kunnen het gevolg zijn van virale of bacteriële infecties, ischemische beledigen of auto-immuunziekten, met name colitis ulcerosa en de dikke variant van de ziekte van Crohn - Crohn Colitis. Acute colitis kunnen presenteren met buikpijn en buik, malabsorptie, diarree, hematochezia en slijm in de ontlasting. We beginnen de complexe interacties tussen milieu, genetica, en de epitheliale barrière dysfunctie bij inflammatory bowel disease en dierlijke modellen van colitis zijn essentieel in het bevorderen van onze kennis van deze ziekte te begrijpen. Een populair model betreft tot aanvulling van het drinkwater van muizen met een laag moleculair gewicht Dextran natriumsulfaat (DSS), wat resulteert in beschadiging van het epitheel en een robuuste ontstekingsreactie in de dikke darm meerdaagse

Protocol

Deel 1: Letsel-Repair Colitis Model

  1. Baseline gewicht moet worden verkregen voor elke muis voorafgaand aan het begin DSS de behandeling.
  2. Maak een 3% (w / v) dextraansulfaat Natrium zout-oplossing in water en filter met een 0,45 pm cellulose-acetaat filter.
  3. Vervang het drinkwater in de muis kooi met de 3%-DSS-oplossing voor vier dagen. De muizen zouden geen toegang tot een andere bron van water (met uitsluiting tips geplaatst op geautomatiseerde irrigatiesystemen).
  4. Op dag vier, vervang dan de DSS-oplossing met water voor een extra drie dagen, waardoor een aantal dikke epitheliale herstel. De muizen moeten worden afgewogen op dag vier, om systemische gevolgen van colitis kwantificeren. Gewichtsverlies is vaak met ernstig letsel.
  5. Op dag zeven, wegen en opoffering van de muizen. Muizen kunnen worden gedood door inhalatie-overdosis van isofluraan, of een ander institutioneel, IACUC goedgekeurde methoden.

Deel 2: autopsie en oogsten van Colon

  1. Expose de ventrale zijde van de muis en veilige benen om onbelemmerde toegang tot de buik te verzekeren. Volledig nat de buik met 70% ethanol.
  2. Pak de middellijn van de buik met weefsel pincet en zo naar boven uit te breiden tenten van de huid. Gebruik fijne punt schaar om de buik waardoor het blootstellen van de buikinhoud incise. Uitbreiding van de incisie aan de top van de xyphoid proces op de middenlijn en dan zich langs de inferieure aspect van de ribben marges bilateraal.
  3. Identificeer de dunne darm, blindedarm en dikke darm. Zorgvuldig te ontleden / plagen de dikke darm van de omringende mesenterium. Transect de dikke darm diep in het bekken naar het distale colon en het rectum vrij. Transect de dikke darm bij de colonocecal marge naar de proximale dikke darm vrij. Zorg moet worden genomen tijdens dit proces niet aan de dikke darm beschadigen als het reinigen van de dikke darm zal problematisch zijn als perforatie optreedt.
  4. Met behulp van een 20G naald voeden en 10 ml spuit, intuberen en spoel de dikke darm met ijskoude PBS, totdat het eluaat volledig vrij van ontlasting.
  5. Op dit punt, als macroscopische analyse met een dissectiemicroscoop gewenst is, kan de dubbele punten worden vastgesteld als "worst". Als histologische analyse alleen gewenst is dan verder met deel 4 "Het maken van Zwitserse Rolls voor de histologische analyse van acute colitis".

Deel 3: Verwerking als "worst" voor Macroscopische Analyse van de gehele dikke darm

  1. Het is belangrijk om de juiste stand van de dikke darm te behouden, dus houd het distale uiteinde van de dikke darm het dichtst bij de operator. Knip twee stukken van de niet-resorbeerbaar garen (SP116 1,5 metrische gevlochten zijde), een ongeveer 1 cm in lengte, de andere 2 centimeter.
  2. Gebruik het 2 inch stukje hechtdraad tot afhechten het distale einde zo dicht mogelijk bij de marge mogelijk met behoud van een goede afdichting.
  3. Plaats een 20G naald voeden met 5 ml 10% gebufferde formaline fosfaat in het proximale uiteinde van de dikke darm. Losjes binden de resterende stuk van hechtdraad onmiddellijk proximaal van de lamp van de voeding naald. Pak altijd de dikke darm aan de lamp van de voeding naald en bezielen formaline tot de dikke darm is uitgebreid. Draai de knoop in de hechtdraad als je terug te trekken de voeding naald, waardoor het de toegediende, uitgebreide dikke darm als een "worst".
  4. Vul een 15 ml conische buis met 10% gebufferde formaline fosfaat en plaats van de dikke darm in de buis. Fix voor 24 uur.
  5. Giet formaline en te vervangen door 70% EtOH voor een extra 24 uur. (Dubbele punten kunnen worden opgeslagen in 70% EtOH voor onbepaalde tijd bij kamertemperatuur.)
  6. Verwijder de dikke darm uit de conische buis en snijd de snaren op elk uiteinde met een scalpel, zorg dat u de dikke darm beschadigen. Vergeet niet dat het distale uiteinde van de langste touwtje heeft. Gesneden lengterichting van het distale tot proximale uiteinde van de dikke darm, zodat het vormt een lang vel. Op dit punt kan de dikke darm worden bekeken onder een microscoop dissectie.

Deel 4: Het maken van Zwitserse Rolls voor de histologische analyse van acute colitis

  1. Het is belangrijk om de juiste stand van de dikke darm te behouden, dus houd het distale uiteinde van de dikke darm het dichtst bij de operator.
  2. Meet de dikke darm lengte. Deze statistiek is een andere indicator van de ernst van letsel. Colitis verhoogt oedeem en verkort de totale lengte dikke darm.
  3. Met behulp van fijne punt schaar, lengterichting incise van distaal naar proximaal uiteinde van de dikke darm. Gebruik fijn getipt tang om de randen van de incisie te begrijpen en zijwaarts te openen werkt je weg distaal-> proximaal, waardoor de weergave van de dikke darm als een vlakke plaat.
  4. Rollen van de dikke darm is een tang en een twee handen techniek. Pak de randen van het distale marge met een tang. Ga verder naar de dikke darm sequentieel rollen door draaien en loslaten wordt de tang te gaan tot de proximale marge. Dus het genereren van een spiraal met een derde dimensie of "Zwitserse Roll".Voor behoud van de opgerolde vorm, stevig vastpakken de rol met een tang en transect met een 27G1 / 2 naald. Zet de naald door het buigen van de naald als het wordt uitgevoerd de rol.
  5. Leg de rol in een passend label weefsel cassette en plaats in een pot van 10% fosfaat gebufferde formaline bij kamertemperatuur gedurende 24 uur tot weefsel fixatie te garanderen.
  6. Giet formaline en te vervangen door 70% EtOH voor een extra 24 uur. (Dubbele punten kunnen worden opgeslagen in 70% EtOH voor onbepaalde tijd bij kamertemperatuur.)
  7. Nadat het monster is vastgesteld, kan het paraffine ingebedde, gesegmenteerd en gemonteerd op dia's voor histologische analyse.

Deel 5: representatieve resultaten

De DSS-model voor acute colitis kan de onderzoeker te verkrijgen, repareren, en een dubbele punt dat modellen acute colitis te analyseren. Als de Zwitserse rol wordt gesneden en gemonteerd, moet het vormen een representatief deel van de gehele dikke darm als gerold goed (figuur 1). De gemonteerde roll kan worden gekleurd met H & E in om de omvang van de schade vast te stellen in de dikke darm, vanaf het distale (binnen) einde aan de proximale (buiten) uiteinde (figuur 2). Immunohistochemie kan ook worden uitgevoerd op de Zwitserse rol te identificeren en te kwantificeren inflammatoire infiltraten. Als de worst methode correct is uitgevoerd, zal de vaste colon verwijd en de hele mucosale oppervlak kan gemakkelijk worden gemanipuleerd en bekeken onder de microscoop te ontleden (figuur 3).

Figuur 1
Figuur 1. De goed uitgevoerde "Zwitserse roll". (A) De dikke darm is gerold van de distaal van proximale uiteinde, doorsneden met een naald en beveiligd door het buigen aan het einde van de naald. Het wordt dan geplaatst in een weefsel cassette voor bevestiging. (B) H & E-lood 5 micrometer doorsnede van een Zwitserse broodje gemaakt van de dikke darm van een muis die behandeld worden met DSS (d = distale colon p = proximale colon).

Figuur 2
Figuur 2. DSS behandeld dubbele punten vertonen tekenen van acute colitis. Ontsteking en crypte schade zijn duidelijk zichtbaar in de DSS-behandelde dikke darm in vergelijking met een water-behandelde controle.

Figuur 3
Figuur 3. Een voorbeeld van een "worst". De worst doordrenkt met formaline en volledig uitgebreid. Een lichte hoek zal aanwezig zijn ondergeschikt aan de natuurlijke kromming van de dikke darm. De geopende worst moet plat.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Dit protocol kan worden aangepast om acuut letsel, letsel-reparatie, of chronische colon letsel te modelleren.

Acuut letsel Wijziging:

DSS behandeling ad lib voor 4-6 dagen gevolgd door onmiddellijke offer

Injury-Repair Modification:

Letsel met 4-6 dagen van DSS-behandeling gevolgd door herstel periode van 3-4 dagen en opoffering (zoals beschreven in bovenstaande protocol).

Chronische Colitis Wijziging:

Muizen zijn geplaatst op drie vijf-dagen cycli van 3% DSS met zestien dagen van herstel tussen elke cyclus. Muizen zijn opgeofferd na de laatste 16-daagse rustperiode.

Er zijn verschillende problemen die onderzoekers moeten zich bewust zijn van zijn met dit model:

  1. Variabiliteit in plaats van het letsel: In onze handen, zien we een overwegend distale patroon van verwondingen, met een relatieve sparen van de proximale dikke darm en de blindedarm. Anderen hebben gemeld meer proximale overwicht om de schade patroon.
  2. Milieu-variabiliteit. Er is significante milieu-variabiliteit. Dit is waarschijnlijk voor een deel te wijten aan verschillen in de intestinale microflora, voeding en andere milieu-overwegingen.
  3. Dit model is niet effectief als een hoog moleculair gewicht DSS wordt gebruikt (dwz 500.000 Da).
  4. Er is veel druk variabiliteit met dit model 4.

Biochemische analyse van de dikke darm kan worden uitgevoerd door het nemen van monsters uit de proximale of distale marges. Afhankelijk van de ernst van de verwonding kan dit invloed op uw vermogen om een ​​histologisch blessure score te genereren. In vivo BrdU etikettering om proliferatie te meten kan worden bereikt door intraperitoneale injectie van 16,7 ug / kg BrdU twee uur voorafgaand aan de te offeren, gevolgd door α-BrdU IHC verwerking.

Als alternatief voor de "worst", kan de dikke darm worden vastgesteld volledig vlak. Bekleed de bodem van een Tupperware bak met Whatman papier en geniet van het papier met 10% gebufferde formaline fosfaat. Ontleden de dikke darm, zoals beschreven in "Deel 2: autopsie en oogsten van Colon '. Nogmaals, houd het distale uiteinde van de dikke darm het dichtst bij de operator. Met behulp van fijne punt schaar, lengterichting incise van distaal naar proximaal uiteinde van de dikke darm. Met fijne getipt pincet greep de randen van de incisie en open zijwaarts werken, waardoor de weergave van de dikke darm als een vlakke plaat. Breng deze vlakke plaat aan de pre-geweekte Whatman papier. Bedek de geplette dikke darm met een ander stuk Whatman en nat met 10% gebufferde formaline fosfaat. De Whatman moet volledig worden gedekt in formaline, maar niet zoveel dat hij vrij in de dikke darm. Sluit de Tupperware en fix voor 24 uur. Verwijder de dikke darm van de Tupperware en plaats het in 10 ml 70% ethanol in een 15 ml conische buis. (Dubbele punten kunnen worden opgeslagen in 70% EtOH voor onbepaalde tijd bij kamertemperatuur.)

Er zijn verschillende methoden voor het kwantificeren van colon letsel 5,6,7. Een methode, bijvoorbeeld, maakt gebruik van een multi-parameter schaal, waaronder: ontsteking, omvang betrokkenheid, vernieuwing, crypte schade, en de betrokkenheid procent 8.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Experimenten op dieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door Vanderbilt IACUC in te stellen.

Acknowledgements

Financiering door NIH (1 K08 DK080221-01) en de Vanderbilt institutionele ontwikkeling fondsen.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dextran Sulfate Sodium Salt USB Corp., Affymetrix 9011-18-1 mol wt 40,000-50,000
10% Buffered Formalin Phosphate Fisher Scientific SF100-4
Isoflurane, USP Phoenix Pharmaceuticals, Inc. NDC 57319-474-06
TISSUE PATH Macrosette Cassettes Fisher Scientific 15182706
BD 10 ml Syringe BD Biosciences 309604
Ethyl Alcohol Pharmco-AAPER E190 Dilute to 70% with distilled water
20G Straight Feeding Needle VWR international 20068-612
27G1/2 PrecisionGlide Needle BD Biosciences 305109
Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip VWR international 82027-588
Waugh Forceps VWR international 82027-428
Non-absorbable Suture LOOK Surgical SP116
Whatman Blotting Paper VWR international 28298-020 Cut as needed
Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter Cole-Parmer EW-06731-2
Carbon fiber composites digital caliper Fisher Scientific 15-007-958

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98, (3), 694-702 (1990).
  2. Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis. Gastroenterology. 131, (2), 579-588 (2006).
  3. Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Lab Anim. 15, (1), 57-59 (1981).
  4. Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).
  5. Aharoni, R. Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease. J Pharmacol Exp Ther. 318, (1), 68-78 (2006).
  6. Hahm, K. B. Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease. Gut. 49, (2), 190-198 (2001).
  7. Green, B. T. Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287, (6), G1238-1246 (2004).
  8. Dieleman, L. A. Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines. Clin Exp Immunol. 114, (3), 385-391 (1998).

Comments

55 Comments

  1. what kind of mice you used in the experiment? hao ole of the mice when you treatment with DSS

    Reply
    Posted by: echo r.
    March 18, 2010 - 8:43 PM
  2. We use both 1²9 and C57BL6 mice in this experiment but the protocol can be used in any background. The mice are at least 6 weeks old before we begin treatment with DSS.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    March 19, 2010 - 10:27 AM
  3. what kind of mice you used in the experiment? hao ole of the mice when you treatment with DSS

    Reply
    Posted by: echo r.
    March 18, 2010 - 9:36 PM
  4. what happens if we keep the colon more than ²4 hours in 10%formalin ?

    Reply
    Posted by: peyman m.
    May 23, 2010 - 6:17 AM
  5. Leaving them in the 10% formalin shouldn't be a problem. We have left them over the weekend. For counts, longer fixation shouldn't be problematic, but I would put them in 70% ethanol before the end of 3 days.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 23, 2010 - 6:38 PM
  6. should DSS be prepared daily? and why it need be filtered?&#²9²59;Is the coulor of the solution&#²9²59;(DSS solute in filter water ) yellow

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 15, 2010 - 8:50 AM
  7. The DSS dŒs not need to be prepared daily. You can fill a water bottle enough for the four days on DSS. It needs to be filtered because you will be handling it before filtering and it can harbor bacteria, etc. that you don't want to feed to your mice. Yes, the color of the solution is slightly yellow.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 15, 2010 - 11:52 AM
  8. should I store the solution in routine temperature or in the fridge?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2010 - 2:50 AM
  9. It is stored at room temperature.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 16, 2010 - 12:54 PM
  10. should I change the solution containing dss daily ? dŒs it influence the result if i do not change the solution daily?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2010 - 9:48 PM
  11. There is no need to change the solution daily. Just put enough DSS solution in the water bottle on day one to last for the duration of the first cycle of DSS.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:02 PM
  12. In our animal facility ,autoclaved tap water is used for all the mice. can I prepare DSS solution in tap water and then filter , or only distilled water shuld be used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:57 AM
  13. You can prepare the solution in tap water and then filter.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2010 - 12:03 PM
  14. Dear Drs Whittem, Williams and Williams:

    Hello, I am writing a protocol to my University's IACUC to perform DSS induction of colitis, and was hoping that you may be willing to answer some of my questions regarding the animals subjected to DSS. I will be using the acute injury and injury repair models mentioned in your article. Could you please provide additional details of the stress that the mice might experience throughout the course of the experiment? The signs stated on the tutorial included weight loss, bloody stools, and diarrhea. Do these mice have additional issues such as an inability to retrieve food from an overhead feeding dish/water bottle, anorexia, inability to groom, contractures (i.e. 'hunching' in response to pain) or additional signs that may be useful to note when submitting my protocol? Also, should I expect mortality during treatment? As recommended, I will use mice older than six weeks, but likely not several weeks older as I want to avoid age-related issues. Finally, would you recommend the use of any type of analgesic drug during the course of DSS-colitis experiments to minimize discomfort in these animals? If so, would you happen to know the effect the analgesic has on factors such as barrier function, healing, infection rate, overall survival etc.? As I do not yet have any personal experience with this model, any insight will be greatly appreciated. Thank you.

    Reply
    Posted by: Elle F.
    June 28, 2010 - 8:03 AM
  15. For the acute injury and injury repair models you should only see the stresses mentioned in the article, weight loss, bloody stool, and diarrhea. There are no additional issues and you should not expect mortality during treatment. I would not recommend the use of an analgesic drug because, for example, NSAIDs will injure the gut and they should not be needed. Good luck!

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 28, 2010 - 10:52 AM
  16. How do you utilize the sausages? I assume you slit them lengthwise after fixation and then stain (with what?) and examine them enface in a dissecting scope. What can you learn from this type of examination? Do you have a preferred method for quantitation of the resultand data?

    Reply
    Posted by: John W.
    July 30, 2010 - 3:05 PM
  17. You are correct, the sausages are cut lengthwise and stained with methylene blue and analyzed for aberrant crypt foci and polyp burden. The data is collected as and quantified as numbers of ACF/colon or number or size of polyps per colon.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    July 30, 2010 - 3:19 PM
  18. Read the abstract,
    "Mice are euthanized at the conclusion ... and at necropsy ... and can be 'Swiss rolled" 3 to allow microscopic analysis of the entire colon or infused with formalin as "sausages" to allow macroscopic analysis. Tissue is then embedded in paraffin, sectioned, and stained for histologic review."

    "Swiss roll" is for histological analysis, while "sausage" is for macroscopic analysis of the ENTIRE colon.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 6, 2010 - 11:21 AM
  19. is dextran a reliable model for colitis...?do i use the drug for treatment before or after colitis using dextran?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 12, 2011 - 7:20 AM
  20. DSS is one of the better models for colitis. The papers found at the following sites as well as those that we cite in our paper give good information on the topic. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9844047?dopt=Citation http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8881816?dopt=Citation http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14611673?dopt=Citation We have not performed treatments on mice on DSS. We mainly use it to analyze the response of knockout models to experimental colitis. Treatment times would depend on whether you would like to prevent or treat colitis.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    June 15, 2011 - 6:24 PM
  21. I'm working with this model, but using ²% DSS as described. We bought our chemicals from another company, but the molecular weight is the same. Can you tell me more about the bloody diarrhea. I have finished the DSS water, but did not notice any blood. There was a bit of an excessive amount of feces, but I did not see the mice hair (white) or bedding stained with dried blood. I've read in other papers that not all the mice have it, but dŒs the fact that I did not see any mean that something went wrong?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 17, 2011 - 1:21 PM
  22. There can be considerable variability in the severity of colitis induced by DSS. This depends on manufacturer, lot #, environment, differences in enteric flora. We typically track weights, DAI which includes stool consistency, blood, etc, measure colon length and weight at necropsy and for us, we consider the histology observed from reviewing the H+E's as the gold standard for injury. I would recommend reviewing the histology with a GI pathologist.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 20, 2011 - 3:00 PM
  23. I am submitting a protocol for DSS to the IACUC. They want to know how I "will deal with the diarrhea with occult blood". Is there anything that we can administer to the mice to make the IACUC happy? They want to know how long I will let these symptoms go on before removing the mouse from the study. Unfortunately, all of these things are facets of the disease.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2011 - 10:09 AM
  24. Hello Jesse,
    We insure that IACUC knows that mice that drop below ²0% weight loss are sac'd. The amount of time that mice are on DSS results in diarrhea and blood for only 4-6 days and mice recover well. You should not have to worry about mice having symptoms for more than a week.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 18, 2011 - 12:00 PM
  25. Thank you for your response. Another question...if the mice are in distress(eg. bloody diarrhea) but we don't give them any analgesic, then the IACUC will make them go down as Category E by USDA standards. DŒs anyone else have experience with this? DŒs anyone else list them as Category E?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2011 - 2:00 PM
  26. Ours are Category E

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 18, 2011 - 6:19 PM
  27. The water to be used with the DSS should be autoclaved water?

    Reply
    Posted by: Lilian N.
    August 18, 2011 - 10:50 PM
  28. DŒs anybody do anything to combat dehydration in these mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 19, 2011 - 10:56 AM
  29. Sucrose 6%.
    http://farncombe.mcmaster.ca/documents/Ghiaetal.GastrŒnterology²0091367²²80-²²88.pdf

    Reply
    Posted by: Lilian N.
    August 19, 2011 - 12:57 PM
  30. The water used with DSS dŒs not need to be autoclaved. You should filter it after making the DSS solution. We do IP saline injections.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    August 19, 2011 - 1:39 PM
  31. DSS will be degrade or not in water. How DSS solution will be filtered what is procedure for that.can u elaborate thanks

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2011 - 3:11 AM
  32. We have not officially tested whether DSS degrades in water over extended periods of time. We make fresh DSS solutions for each cycle of DSS that is administered and do not reuse the DSS that is remaining in the water bottles after each cycle. As mentioned in the protocol, we make a 3% (w/v) Dextran Sulfate Sodium Salt solution in water and filter with a 0.45 μm cellulose acetate filter (Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter, Cole-Parmer, catalog number: EW-06731-²). The directions for this filter come with it but it is simply a vacuum filtration system as pictured in the video (seen at 0:5², "Injury-Repair Colitis Model").

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    September 25, 2011 - 3:50 PM
  33. Has anyone used buprenorphine in the DSS model?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 27, 2011 - 1:29 PM
  34. Question: In this mouse model of DSS colitis, do we have to to remove the colon contents (stools) before histological analysis? How is this done? Thank you!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 14, 2011 - 10:49 AM
  35. At 3:17 in the video the removal of stools is shown. The colon is flushed with PBS using a ²0G straight feeding needle.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    October 17, 2011 - 4:38 PM
  36. In some protocols, people sacrifice the mice 3 or 5 days after DSS treatment. What is the purpose of this? How is this different from killing the mice after 4 days of DSS treatment.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 16, 2012 - 4:52 PM
  37. The number of days that you sac after DSS treatment will determine the amount of time the mice have to heal. we generally use 4 days because, in wild type mice, this is usually the best amount of time to see the beginnings of recovery while still noting damage in the mice of interest used in our lab. Basically, this is the point at which we see the most difference between the two groups. If you have a mouse that you expect to heal more quickly, 3 days may be suitable, and vice versa.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    January 18, 2012 - 1:21 PM
  38. Regarding the step 7 of part 4 in the protocol mentioned above, how do you remove a needle from a swiss-rolled tissue before going forward to paraffin-embedding? Just pull out? Do you have a specific way to do that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 17, 2012 - 6:05 PM
  39. Once the tissue is formalin fixed, the tissue will be stiff enough that you can either unbend or clip the needle and slide it out of the roll without altering the shape of the Swiss roll. Our tissue processing core knows how to handle our tissue, but if you need to do it yourself, insure that the tissue has been in 70% ethanol at least overnight and then use gloves and forceps to remove the needle from the roll.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    January 18, 2012 - 1:24 PM
  40. What are the strains of mice used for this model? And what is the health status of the animals?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 10, 2012 - 11:16 AM
  41. We use C57Bl6 mice for our experiments. Our mice are healthy before treatment with DSS.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    December 13, 2012 - 1:04 PM
  42. Hello, I am writing a protocol to my University's IACUC to perform DSS induction of colitis.Should I put DSS in Hazardous material form?Is there any method to detect the DSS excretion in feces and urine?How can we deal with the waste from DSS (unused solution)?

    Thanks,

    Reply
    Posted by: Jinggang L.
    December 13, 2012 - 11:22 AM
  43. Our IACUC protocol dŒs not include DSS as a hazardous material and we pour waste DSS down the drain. As far as I know, there is not a method to detect DSS excretion in feces and urine.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    December 13, 2012 - 1:06 PM
  44. Hi
    In the materials you list Dextran Sulfate Sodium Salt USB Corp., Affymetrix 9011-18-1 mol wt 40,000-50,000.
    However when I check Affymetrix website, this catalog number belongs to a MW: 500,000 product (http://www.affymetrix.com/esearch/search.jsp?pd=131111&N=4²94967²93) . is this what you used or otherwise what is the correct catalog number. thanks!

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 6, 2013 - 10:50 AM
  45. I am so sorry for the confusion. The number listed in the protocol is the CAS# which is similar between the 500,000 and 50,000 M.W. DSS. The actual catalog number is 14489. This number should get you what you need (http://www.affymetrix.com/estore/browse/brand/usb/product.jsp?productId=130²61#1_1).

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 6, 2013 - 12:00 PM
  46. Thanks a lot for the catalog number!
    Could you please explain the injection of saline to prevent dehydration? How often and how much should it be injected? I guess all mice should get the same amount at the same time, right?
    And when the mice get sick, should we put some food on the bottom of the cage, or are they usually capable of getting the food themselves? thanks again.

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 13, 2013 - 3:44 PM
  47. We usually only inject mice that are not looking healthy and we generally do this as needed. I will only inject a 1ml bolus on a single day. You can repeat this the next day, but this is really just a last resort. We sacrifice them once they reach ²0% weight loss so they don't have undue stress. When the mice get sick, I do tend to try and put food in the bottom of the cage in case the mice aren't able to reach up into the food distributor. If the mice are getting so sick that you need to inject with PBS or move the food down, you may want to try a smaller concentration of DSS (²% or 1%) or perform the treatment for a shorter time. We have had several genotypes that don't handle the DSS as well and decreasing the concentration or treatment time really helps them. There is also facility to facility variability dependent on mouse microbiomes so my mice may be less sensitive than your mice to DSS and even your WTs might have different responses than mine. In short, we often need to tweak the protocol so that we can get injury while insuring survival for the extent of the protocol that we need to perform.

    Reply
    Posted by: Caitlyn W.
    May 13, 2013 - 4:29 PM
  48. thanks a lot, Caityln, you are really helping a lot because we have no experience in that.

    Reply
    Posted by: selcen o.
    May 14, 2013 - 4:56 AM
  49. Inducing colorectal cancer in rats: I am in a predicament; instead of the DSS Mw 40,000, I have ordered DSS (Mr 5,000) by accident. Unfortunately I noticed this too late and have a very limited time. I have read that the Mw of DSS does play a role in inducing colitis, whereby 5 kDa could induce milder form of colitis. I plan to inject my rats with AOM (12 mg/Kg), expose the rats to 2 cycles of 1 week of 2% DSS following 2 weeks of water. These rats are quite old, 12 weeks to be exact. They are also Wistar rats so at this time they are prone to develop cancer easily. However, I would like to know is using 5 kDa DSS worth it? Could you please provide me with some advice?

    Reply
    Posted by: Lynn C.
    February 16, 2014 - 6:30 AM
  50. Unfortunately, I do not think that Mr 5,000 will work.

    Reply
    Posted by: Christopher W.
    February 19, 2014 - 9:21 AM
  51. can we use dss with m.w 500.000 for induce colitis?

    Reply
    Posted by: flora s.
    January 29, 2015 - 9:41 PM
  52. Is there a difference between female and male mice? Which would should i choose?

    Reply
    Posted by: stu a.
    February 17, 2015 - 11:42 AM
  53. We have not noticed a difference with gender; however, as the environment is a strong contributor to the severity of colitis, I would recommend test experiments with male and female WT mice in your facility.

    Reply
    Posted by: Christopher W.
    February 17, 2015 - 12:24 PM
  54. Would you also have an advice on how to minimize the variability between the cages? I was considering to mix treated and not treated animals in the same cage (our treatment is injected). However I am afraid that the groups will have cross effects on each other.
    Thank you

    Reply
    Posted by: stu a.
    February 17, 2015 - 2:25 PM
  55. Is it plausible to use 500,000 mw DSS? 1-2% for induction oftumours with AOM, I thank all advice.

    Reply
    Posted by: VERONICA M.
    May 14, 2015 - 5:04 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics