تخصيب خلايا NK من دم الانسان مع مجموعة من تقنيات RosetteSep StemCell

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

الخلايا القاتلة الطبيعية هي مجموعة صغيرة من الخلايا الليمفاوية. هنا نبين كيفية عزل هذه الخلايا من الدم البشري عن طريق الانتقاء السلبي ، وذلك باستخدام مجموعة من تقنيات StemCell. ويتم الحصول على الخلايا قادرة على البقاء وبمنأى عن الأجسام المضادة ، وبالتالي على استعداد لاستخدامها في عدد من الإجراءات.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

الطبيعية القاتلة (ناغورني كاراباخ) الخلايا الليمفاوية كبيرة السامة للخلايا الحبيبية التي تنتمي إلى نظام المناعة الفطرية وتلعب أدوارا رئيسية في القتال ضد السرطان والالتهابات ، ولكن هي أيضا متورطة في المراحل الأولى من الحمل ورفض الزرع. هذه الخلايا موجودة في الدم المحيطي ، والتي يمكن عزلها. يمكن عزل الخلايا باستخدام اختيار إما إيجابية أو سلبية. لاختيار إيجابي نستخدم الأضداد الموجهة إلى علامة السطحية موجودة فقط على الخلايا التي تهم لاختيار سلبية في حين نستخدم خليط من الأجسام المضادة التي تستهدف علامات موجودة على سطح الخلايا ولكن كل الخلايا ذات الاهتمام. يقدم هذا الأسلوب الأخير في الاستفادة من ترك خلايا مصلحة خالية من الأجسام المضادة ، مما يقلل من خطر تنشيط الخلايا غير المرغوب فيها أو differenciation. في هذا البروتوكول عن طريق الفيديو نظهر كيفية فصل الخلايا القاتلة الطبيعية من الدم البشري عن طريق الانتقاء السلبي ، وذلك باستخدام مجموعة من التقنيات RosetteSep StemCell. الإجراء ينطوي على الحصول على الدم المحيطي الإنسان (تحت المراجعة المؤسسية التي أقرها المجلس التنفيذي لبروتوكول حماية الموضوعات البشرية) وخلطها مع مزيج من الأجسام المضادة التي من شأنها ربط علامات غائبا عن الخلايا القاتلة الطبيعية ، ولكنها موجودة على كل الخلايا وحيدة النواة الأخرى الموجودة في الطرفية الدم (مثل الخلايا اللمفية تي ، وحيدات...). الأجسام المضادة الموجودة في الكوكتيل هي مترافق إلى الأجسام المضادة الموجهة إلى glycophorin وكريات الدم الحمراء في. وبالتالي فإن جميع الخلايا غير المرغوب فيها وتكون خلايا الدم الحمراء محاصرين في المجمعات. ثم يتم تخفيف المزيج من الكوكتيل الدم والأجسام المضادة ، overlayed على التدرج Histopaque ، وطرد. ويمكن جمع الخلايا القاتلة الطبيعية (> 80 ٪ نقية) في واجهة بين Histopaque والبلازما المخفف. زجاجات مماثلة متوفرة للتخصيب السكان خلية أخرى ، مثل الخلايا اللمفية تي الإنسان.

Protocol

يتم تضمين بروتوكول مفصلة مع كل العزلة روزيت كوكتيل سبتمبر ومتاحة على الانترنت على موقع التكنولوجيات StemCell 1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ويمكن عزل الخلايا باستخدام هذه التقنية فصل السكان الى مزيد من مجموعات أخرى مختلفة باستخدام العازل الخلية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics