Enrichissement des cellules NK du sang humain avec le Kit de RosetteSep StemCell Technologies

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Les cellules tueuses naturelles sont une petite population de lymphocytes. Ici, nous montrons comment isoler ces cellules du sang humain par une sélection négative, en utilisant un kit de StemCell Technologies. Les cellules obtenues sont viables et épargnée par les anticorps, et donc prêt à être utilisé pour un certain nombre de procédures.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Natural killer (NK) sont de grands lymphocytes cytotoxiques granulaires qui appartiennent au système immunitaire inné et jouent un rôle majeur dans la lutte contre le cancer et les infections, mais sont également impliqués dans les premiers stades de la grossesse et le rejet de greffe. Ces cellules sont présentes dans le sang périphérique, d'où ils peuvent être isolés. Les cellules peuvent être isolées en utilisant la sélection positive ou négative. Pour la sélection positive, nous utilisons des anticorps dirigés contre un marqueur de surface présents uniquement sur les cellules d'intérêt alors que pour la sélection négative, nous utilisons des cocktails d'anticorps ciblés pour des marqueurs de surface présents sur toutes les cellules, mais les cellules d'intérêt. Cette dernière technique présente l'avantage de laisser les cellules d'intérêt exempt d'anticorps, réduisant ainsi le risque d'activation des cellules indésirables ou de différenciation. Dans cette vidéo-protocole, nous démontrons comment séparer les cellules NK du sang humain par une sélection négative, en utilisant le kit de RosetteSep StemCell Technologies. La procédure consiste à obtenir du sang périphérique humain (sous une revue institutionnelle approuvée par le conseil protocole pour protéger les sujets humains) et le mélanger avec un cocktail d'anticorps qui se lient à des marqueurs absents sur les cellules NK, mais présent sur toutes les autres cellules mononucléaires périphériques présents dans le sang (par exemple, les lymphocytes T, les monocytes ...). Les anticorps présents dans le cocktail sont conjugués à des anticorps dirigés contre la glycophorine A érythrocytes de suite. Toutes les cellules non désirées et les globules rouges seront donc pris au piège dans les complexes. Le mélange de sang et un cocktail d'anticorps est ensuite diluée, superposé sur un gradient Histopaque, et centrifugé. Les cellules NK (> 80% pur) peuvent être collectées à l'interface entre les Histopaque et le plasma dilué. Cocktails similaires sont disponibles pour l'enrichissement des autres populations cellulaires, telles que les lymphocytes T humains.

Protocol

Un protocole détaillé est inclus avec chaque cocktail Rosette isolement Sep et est disponible en ligne sur le site StemCell technologies 1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Les cellules isolées en utilisant cette technique peut encore être séparées en différentes populations en utilisant d'autres kits de séparation des cellules.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics