التصور والتلاعب الجيني من التشعبات والاعمده الفقريه في قشرة الدماغ والحصين ماوس باستخدام

Published 7/26/2012
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Neuroscience
 

Summary

توضح هذه المقالة بالتفصيل بروتوكول لelectroporate في الرحم قشرة الدماغ والحصين في E14.5 في الفئران. علينا أن نبين أن هذا هو وسيلة قيمة لدراسة التشعبات والعمود الفقري في هاتين المنطقتين الدماغي.

Cite this Article

Copy Citation

Pacary, E., Haas, M. A., Wildner, H., Azzarelli, R., Bell, D. M., Abrous, D. N., et al. Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation. J. Vis. Exp. (65), e4163, doi:10.3791/4163 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

في electroporation الرحم (IUE) أصبحت تقنية قوية لدراسة تطوير مناطق مختلفة من الجهاز العصبي الجنيني 1-5. ولم يتم حتى الآن هذه الأداة المستخدمة على نطاق واسع لدراسة تنظيم الانتشار الخلوي، والتمايز وهجرة الخلايا العصبية وخصوصا في القشرة الدماغية النامية 6-8. هنا نحن لدينا تفاصيل بروتوكول لelectroporate في الرحم قشرة الدماغ والحصين، وتقديم الأدلة التي يمكن أن تستخدم هذه الطريقة لدراسة التشعبات والعمود الفقري في هاتين المنطقتين الدماغي.

وقد ساهمت التصور والتلاعب في الخلايا العصبية في الثقافات الأولية إلى فهم أفضل للعمليات المشتركة في التغصنات، العمود الفقري والتنمية المشبك. ومع ذلك لا تتعرض الخلايا العصبية المتزايدة في المختبر إلى العظة جميع الفسيولوجية التي يمكن أن تؤثر التغصنات و / أو تشكيل العمود الفقري والصيانة خلال التطور الطبيعي. معرفتنا للهياكل التغصنات والعمود الفقري 9. ومع ذلك، يعتبر جولجي تلطيخ لتكون غير متوقعة. في الواقع، وصفت مجموعة من الخلايا العصبية ومساحات الألياف عشوائيا، مع مناطق معينة تظهر في كثير من الأحيان الملون تماما بينما المناطق المتاخمة خالية من تلطيخ. وقد أظهرت الدراسات الحديثة أن IUE من بنيات فلوري يمثل طريقة جذابة بديل لدراسة التشعبات، العمود الفقري، فضلا عن نقاط الاشتباك العصبي في فئرانا معدلة وراثيا / البرية من نوع 10-11 (الشكل 1A). وعلاوة على ذلك بالمقارنة مع جيل من الماوس بالضربة القاضية، IUE يمثل نهجا السريع لأداء الربح والخسارة من وظيفة في دراسات سكانية محددة من الخلايا خلال نافذة زمنية محددة. وبالإضافة إلى ذلك، تم IUE استخدمت بنجاح مع التعبير الجيني محرض أو محرض رني تقترب لتحسين السيطرة الزمنية على التعبير عن الجينات أو shRNA 12. هذه المزايا من IUE وبالتالي openeد أبعادا جديدة لدراسة تأثير في التعبير الجيني / قمع في التشعبات والعمود الفقري، ليس فقط في هياكل محددة الدماغي (1B الشكل)، ولكن أيضا في نقطة زمنية محددة للتنمية (الشكل 1C).

أخيرا، IUE يوفر أداة مفيدة لتحديد تفاعلات وظيفية بين الجينات المسؤولة عن التغصنات، العمود الفقري و / أو تطوير المشبك. في الواقع، خلافا لغيرها من وسائل نقل الجينات مثل الفيروس، وذلك واضح ومباشر على الجمع بين رني متعددة أو الجينات المحورة في نفس السكان من الخلايا.

وخلاصة القول، IUE هو وسيلة قوية التي سبق أن ساهمت في توصيف الآليات الجزيئية الكامنة وراء وظيفة الدماغ والمرض، وأنه ينبغي أن يكون مفيدا أيضا في دراسة التشعبات والعمود الفقري.

Protocol

في المملكة المتحدة، ويعيش الفئران، ولدت، وتعامل وفقا للمبادئ التوجيهية التي وافقت عليها وزارة الداخلية تحت الحيوان (إجراءات علمية) لعام 1986.

1. إعداد: الحل الحمض النووي وإبر

  1. تنقية البلازميد مع عدة الذيفان الداخلي ماكسي الإعدادية الحرة. إعداد البلازميد حل للحقن الحمض النووي المطلوب لتركيزات في الماء وإضافة الأخضر السريع (تركيز النهائي من 0.05٪) لتصور عن طريق الحقن. كفاءة electroporation تعتمد بشكل كبير على تركيز الحمض النووي. يستخدم عادة للتركيز من 1 ميكروغرام / ميكروليتر. هذا التركيز غير كاف لتصور الخلايا العصبية electroporated دون التأثير على تنميتها. ومع ذلك، وفقا لالمروج المستخدمة في ناقلات البلازميد (الأقل مستوى التعبير مع المروج المضخم للخلايا / محسن، قوي مستوى التعبير مع محسن المضخم للخلايا في وقت مبكر فوري والدجاج الانصهار المروج β-الأكتين (CAG) المروج)، فضلا عن حجم و استقرار من البروتين وأعرب، ويمكن تعديل هذا التركيز (0.25 ميكروغرام / ميكروليتر إلى 5 ميكروغرام / ميكرولتر).
  2. سحب الإبر الزجاج باستخدام مجتذب micropipette.

2. التحضير للجراحة

  1. الأوتوكلاف الأدوات الجراحية والفوسفات المالحة العازلة (PBS).
  2. يعد حل مسكن في برنامج تلفزيوني (البوبرينورفين، Vetergesic، تركيز النهائي 30 ميكروغرام / مل). وزن الماوس الحوامل وحقن تحت الجلد 0.1 ملغ / كلغ من Vetergesic 30 دقيقة على الأقل قبل الجراحة. خلال هذا الوقت، واعداد منطقة الجراحية. بدوره على منصات التدفئة وغرفة الإنعاش. وضع برنامج تلفزيوني العقيمة في حمام ماء دافئ وجميع الأدوات والمواد المعقمة على الستائر العقيمة. وضع أقطاب البلاتين في كأس مملوءة PBS والاتصال electroporator شغل الإبرة مع الحل القائم على الحمض النووي باستخدام طرف microloader، ربط الإبرة لصاحب الشعرية وقرصة قبالة رأس الإبرة مع الملقط.
e_title "> 3. جراحة قبل حقن الحمض النووي وElectroporation

  1. تخدير ماوس الحوامل (E14.5-E15.5) مع isoflurane في الناقل الأكسجين (الأوكسجين 2 لتر / دقيقة) باستخدام غرفة الاستقراء مخدر. الانتظار حتى يفقد الحيوان والمنعكس التقويمي.
  2. نقل الحيوان إلى قناع "ما قبل عملية جراحية". ضع قطرة من هلام العين على كل عين لمنع تقرح القرنية في العين في حين كانت الأم تحت التخدير العام. استخدام الحلاقة الكهربائية لحلاقة الشعر من البطن. تنظيف المنطقة حليق مرة واحدة مع clorhexidine لجمع شعر الطيران.
  3. نقل الحيوان إلى قناع الثاني في مجال الجراحة. ضع الماوس مع ظهرها للسادة التدفئة. بدء عملية جراحية عندما تم فقدان المنعكس دواسة.
  4. وضع على قناع وقفازات معقمة. تغطية حيوان مع ثنى معقم (مع وجود ثقب صغير فوق البطن) لمنع الأنسجة والأدوات من التلوث من المناطق من الجلد التي لم يتم حلق وتطهيرها. تنظيف المنطقة حليق 1تي لا يقل عن 3 مرات مع clorhexidine. استخدام مختلف مسحة القطن المعقم في كل مرة. استخدام مشرط لجعل شق عمودي على طول خط الوسط (~ 1 بوصة طويلة) من خلال الجلد. باستخدام مقص، وجعل شق مماثل للعضلات البطن على طول الخط ألبا (الخط الأبيض تتألف في معظمها من النسيج الضام الكولاجين).
  5. اختيار الأجنة التي يمكن الوصول إليها ووضع ملقط خاتم بين اثنين من الأجنة وسحب بعناية سلسلة الجنينية من تجويف البطن. من هذه النقطة، والحفاظ على الأجنة رطب مع برنامج تلفزيوني قبل حرارة العقيمة.

لم يكن يحتاج إلى مجهر لتصور.

4. حقن الحمض النووي وElectroporation

  1. تبدأ مع واحدة من أجنة معظم الأطراف، مما يجعل من الاسهل لتتبع التي تم electroporated الأجنة. لا تسحب أكثر من اللازم على الأجنة حيث سيؤدي ذلك إلى زيادة خطر النزف. التلاعب في موقف للجنين داخل الكيس الذي يحيط بالجنين باستخدام ملقط وخاتماستقرار رئيس الأجنة بين الحلقات. الضغط بلطف لدفع ما يصل الجنين أقرب إلى جدار الرحم.
  2. مع من ناحية أخرى، أخذ صاحب الشعرية ويدخل الإبرة بعناية في وسط الكرة الأرضية لاستهداف بطين الوحشي. اضغط على دواسة لحقن ما يقرب من 1 ميكرولتر من الحمض النووي حل سريع مختلطة مع الأخضر (ميكرولتر أقل من 1 في دراسة التشعبات). يجب الانتباه الصبغة الخضراء ملء البطين الجانبي. الخطوات الحاسمة: - وحدة من الإبرة أمر بالغ الأهمية لاختراق جدار الرحم بشكل صحيح. من المهم للحد من حركة إبرة على سطح جدار الرحم وبعد الإدراج إلى البطين لأن توسيع الثقب سيؤدي إلى تسرب السائل الذي يحيط بالجنين وفاة الجنين. تجنب الأوعية الدموية ثقب في جدار الرحم، وهذا سوف يؤدي إلى النزيف والموت جنين.
    - من المهم عدم ضخ كمية كبيرة جدا من الحمض النووي إلى البطين الجانبي لأنها من شأنها أن تحفزموه الرأس (لا تتجاوز 2 في E14.5 ميكرولتر). يتم ضبط حجم من الحمض النووي وفقا للغرض من هذه التجربة. إذا تم استخدام 1μl عموما بالنسبة لمعظم التجارب، لا بد من أصغر حجم من الحمض النووي (حوالي 0.5 ميكرو لتر) لالتغصنات وتحليل العمود الفقري. في الواقع بضع خلايا معزولة بحاجة إلى أن توجه من أجل تصور وقياس شجرة الجذعية من الخلايا العصبية electroporated.
  3. وضع أقطاب كهربائية على جانبي الرأس الجنين مع مجداف (+) ايجابية على الجانب نفس البطين حقن لelectroporation قشرة أو على الجانب الآخر من البطين حقن لelectroporation الحصين (الشكل 2). ثم تطبيق 5 النبضات الكهربائية 30V (50 ميللي ثانية مدتها) على فترات ثانية 1. خطوة حاسمة: تجنب تطبيق الحالي عبر المشيمة وهذا سوف يؤدي إلى وفاة الجنين.
    ويمكن electroporated جميع الأجنة في ماوس الحوامل، وعادة مع نفس الحمض النووي بناء على تجنب أي التباس. ومع ذلك، فإن انخفاض عملية جراحية طويلة ق معدل البقاء على قيد الحياة من الأجنة. لا ينبغي أن تجويف البطن يمكن فتح أكثر من 30 دقيقة.

5. عملية جراحية في مرحلة ما بعد electroporation

  1. بعد electroporating الأجنة، إضافة إلى برنامج تلفزيوني تجويف البطن واستخدام الملقط حلقة ليحل محل قرن الرحم في موقعه الأصلي. خياطة جدار البطن والجلد مع الخيوط الجراحية القابلة للامتصاص Vicryl.
  2. وضع الحيوان في غرفة الإنعاش حتى يستيقظ (5-10 دقيقة عادة)، ثم نقل في قفص وضعها على وسادة التدفئة.

6. بعد الجراحة

تحقق سلوك الفئران لتقييم الألم والمعاناة أو الشدة وتزن هذه الحيوانات 24 ساعة و 48 ساعة بعد الجراحة. إذا لزم الأمر، يمكن أن تدار المسكنات للتقليل من الألم والانزعاج.

7. معالجة الأنسجة

جمع الأجنة electroporated أو الصغار في المراحل الجنينية أو بعد الولادة المطلوبة للتجربة.

ove_content "> - بالنسبة للتحليل في المراحل الجنينية (على سبيل المثال لدراسة تكاثر الخلايا أو هجرة):
أم الموت ببطء عبر التفكك عنق الرحم وجمع الأجنة. بعد قطع الرأس، وحدد العقول التي تم electroporated بشكل صحيح، وتصور كما يدل على ذلك حجم وموقع للإشارة فلوري، عبر الجمجمة باستخدام مجهر نيون. تشريح الدماغ من الجمجمة وإصلاح بين عشية وضحاها في PFA 4٪ وبعد ذلك في مكان السكروز 20٪ / في برنامج تلفزيوني بين عشية وضحاها. تغرس في مجمع أكتوبر، وتجميد في -80 درجة مئوية، والباب باستخدام ناظم البرد.

- بالنسبة للتحليل في مراحل ما بعد الولادة (على سبيل المثال لدراسة التشعبات والعمود الفقري):
الجراء أو تخدير الفئران مع حقن داخل الصفاق من بنتوباربيتون (40-60 ملغ / كلغ)، وتأدية نضح transcardial مع برنامج تلفزيوني، تليها PFA 4٪ في برنامج تلفزيوني. تشريح أدمغة من الجمجمة وآخر في الإصلاح بين عشية وضحاها PFA 4٪. بعد الغسيل في برنامج تلفزيوني، قسم أدمغة باستخدام vibratome (100 ميكرون للقطاعات دendrite تحليل). تحميل المقاطع في بولي أكوا / جبل باستخدام coverslips مم 0،16-0،19 سميكة إلى التشعبات صورة والعمود الفقري.

8. ممثل النتائج

ويبين الشكل 3 أمثلة على الخلايا electroporated في قشرة الدماغ (أرقام 3A، B)، في CA1 (أرقام 3C، D) وكذلك في التلفيف المسنن لقرن آمون (أرقام 3E، F). وelectroporated البرية من نوع الفئران في E14.5 مع تأنشا GFP (PCA-B-EGFPm5 كاتم الصوت 3) والعقول كانت تحصد في يوم ما بعد الولادة (P) 14. عن طريق حقن كمية صغيرة من محلول الحمض النووي (0.5 ميكرو لتر أو أقل من التوصل إلى حل في 1 ميكروغرام / ميكرولتر)، وصفت بضع خلايا، والذي يسمح التصور من تشجر شجيري من عزل خلايا + GFP (الشكل 3) وكذلك العمود الفقري لها في أعلى التكبير (الشكل 4).

الشكل 1
<قوي> الشكل 1. تمثيل تخطيطي من البروتوكولات electroporation التي يمكن استخدامها لدراسة التشعبات والعمود الفقري. (A) Electroporation من GFP بناء على مقارنة التشعبات والعمود الفقري في الفئران البرية من نوع ومتحولة. (ب) من Electroporation GFP-shRNA (يتم التعبير عن GFP من التصور نفسه) لمقارنة التشعبات والعمود الفقري في الفئران electroporated مع shRNA بناء محددة لجينة من مصلحة (X) أو shRNA السيطرة. (ج) يمكن أن تستخدم IUE جنبا إلى جنب مع نظام محرض لجنة المساواة العرقية من أجل تقييد التعبير عن shRNA إلى الفترة الزمنية مرغوب فيه. في هذه التجربة، ناقل تعبر عن شكل من recombinase لجنة المساواة العرقية التي يمكن تفعيلها من خلال hydroxytamoxifen-4 (CAG ER-T2 CreER T2؛ 1 ميكروغرام / ميكرولتر) وelectroporated 10، جنبا إلى جنب مع ناقلات تعبر عن shRNA معين في لجنة المساواة العرقية التي تعتمد الطريقة (1 ميكروغرام / ميكروليتر، مع وجود مؤشر إعادة التركيب (CALNL-GFP بناء، GFP محرض التعبير بواسطة لجنة المساواة العرقية؛. 1 ميكروغرام / ميكرولتر) 10 وكفاءهويمكن تحسين قبرصي لضربة قاضية من خلال زيادة تركيز shRNA فضلا عن زيادة المساعدة النقدية-ER T2 تركيز T2 CreER.

الشكل 2
الشكل 2. السيطرة المكانية من electroporation. هذا الرقم يظهر فيها لوضع أقطاب كهربائية مجداف وفقا لموقع حقن الحمض النووي من أجل استهداف قشرة الدماغ أو في قرن آمون.

الشكل (3)
الشكل 3. electroporated التصور من شجرة شجيري من داخل الرحم الخلايا في قشرة الدماغ والحصين. (A، B) أقسام الاكليل تظهر GFP + الخلايا الهرمية في قشرة الدماغ، (CD) في الخلايا الهرمية CA1 من الحصين و(E، F)، الخلايا الحبيبية في التلفيف المسنن في P14. وكان electroporated تأنشا GFP (PCA-B-EGFPm5 كاتم الصوت 3) في E14.5. صور تضخم أعلى (B، D، F) تبين أن IUE وسيلة فعالة لتصور التشعبات. الحانات النطاق تمثل 50 ميكرومتر (B، D و F)، و 150 ميكرون (A، C، E).

الشكل 4
الشكل 4. التصور من العمود الفقري شجيري الخلايا العصبية في P14 التي تم electroporated في الرحم في E14.5 مع GFP معربا عن بناء. (A، B) وصور عالية التكبير من العمود الفقري من التشعبات القاعدية من الخلايا العصبية الهرمية قرن آمون. الحانات النطاق تمثل 5 ميكرون (أ) و 2 ميكرومتر (B).

Discussion

IUE هو أداة قوية لمعالجة الجينات، ليس فقط في الفضاء ولكن أيضا في الوقت المناسب. نعرض هنا يمكن أن تستخدم هذه التقنية لتصور والتلاعب وراثيا التشعبات والعمود الفقري في قشرة الدماغ والحصين من الفئران. بالإضافة إلى المزايا المذكورة سابقا، ومن الجدير بالذكر أن IUE، على النقيض من غولجي الأسلوب، يمكن دمجها مع المناعية أو في التهجين في الموقع، والذي يسمح على سبيل المثال إلى النمط الظاهري للخلايا electroporated. من المهم أيضا أن نذكر أن هذا الإجراء لا يسبب تشوهات في المخ واضح على الرغم من الغازية النسبي. وبالإضافة إلى ذلك، على المستوى الخلوي، IUE لا تعديل خصائص الكهربية للخلايا العصبية electroporated 13. في حين يركز على مظاهرة لدينا تصور morphologies التغصنات والعمود الفقري، يمكن أيضا IUE من العصبونات القشرية أو قرن آمون في E14.5 أن تستخدم لدراسة أحداث التنموية الأخرى مثل تشكيل محور عصبي والتوجيه. في إضافةويمكن تنفيذ ition، نفس النوع من بروتوكول في مراحل أخرى من التطور الجنيني لاستهداف مجموعات سكانية مختلفة. على سبيل المثال، يمكن تنفيذ نموذجا تنمويا electroporation جدا القشرية في وقت متأخر من E18.5 لدفع التعبير في الأسلاف نجمي 1. وبالمثل، في حين أن electroporation من قرن آمون في E14.5 يسمح لاستهداف CA1-CA3 أسلاف الخلايا العصبية الهرمية والمسنن السلف الخلية الحبيبية في الوقت نفسه، فإن electroporation أواخر قرن آمون (E18.5 أو بعد الولادة في وقت مبكر) تسمح لاستهداف حبيبة المسنن مختلفة الأسلاف 14. في هذه الحالة، يمكن زيادة حجم حقن الحمض النووي، فضلا عن شدة التيار.

الجينات المحورة التي أدخلها IUE يبدو أن تظل episomal وخسر بالتالي من الخلايا بعد الانقسامات الخلوية المتتالية. في الخلايا تالية للتفتل مثل الخلايا العصبية، ومع ذلك، فإن الجينات المحورة episomal تبقى نشطة لعدة اشهر بعد electroporation السماح للدراسات طويلة الأجل 13، 15. في دراستنا، لاحظنا GFP مشرق + الخلايا تصل إلى 7 أسابيع بعد الولادة (نقطة آخر مرة قمنا بتحليل) تشير إلى أن الجنينية استهداف السلائف العصبية القشرية أو قرن آمون استخدام نتائج IUE في التعبير المستمر للالتحوير في وقت مبكر من نقاط حتى وقت التنموية إلى سن البلوغ.

وجود قيود الحالي للتقنية هو أنه من الصعب ممارسة دفع غرامة السيطرة على العدد الكلي للخلايا electroporated. ومع ذلك، من خلال خفض حجم حقن محلول الحمض النووي، وأظهرنا أنه من الممكن ان تصف خلايا قليلة، وعلى تصور تشجر شجيري من خلايا منعزلة + GFP وكذلك العمود الفقري لها. ويمكن أيضا البعد عن منطقة transfected يمكن تعديلها عن طريق تعديل المعلمات من electroporation مثل شدة التيار وعدد من البقول أو القطر من المجاذيف electroporation.

تماما IUE هو طريقة التي هي سهلة لتنفيذ وسريعة وفعالة لدراسة التشعبات والعمود الفقري في الجسم الحي.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور كاثلين ماذرز، والدكتور Mocho جان فيليب، والدكتور يولاندا توريس سافيدرا لمساعدتهم على أداء electroporation في الرحم في إطار الإجراءات العقيم، وخشب هايلي لمساعدتها في إعداد المخططات.

وأيد البرلمان الأوروبي من قبل الاتحاد على المدى الطويل لجمعيات الكيمياء الحيوية الأوروبية (FEBS) زمالة ومجلس البحوث الطبية والتطوير الوظيفي (MRC) زمالة، MAH بمنحة يلكوم ترست لفيشر وإليزابيث Tybulewicz فيكتور (080174/B/06/Z) ، الأب من قبل زمالة طويلة الأجل EMBO والتهاب المفاصل الروماتويدي عن طريق منحة دراسية لجنة نهر الميكونج. وأيد هذا العمل من خلال منحة المشروع من ويلكوم ترست (086947/Z/08/Z) وقبل FG غرانت في والمعونة من مجلس البحوث الطبية (U117570528) إلى

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Preparation of needles and DNA solution for injection
Endofree Plasmid Maxi Kit Qiagen 12362
Fast Green Sigma F-7258
Borosilicate glass capillaries
1.0 mm O.D. x 0.58 mm I.D.
Harvard Apparatus 30-0016
Microloader tips Eppendorf 5242956003 For Eppendorf pipettes 0.5 μl-10 μl / 2-20 μl
Material for surgery
Extra thin Iris scissors Fine Science Tools 14088-10
Curved Forceps Fine Science Tools 91197-00
Ring forceps Fine Science Tools 11103-09
Needle holder Fine Science Tools 12002-12
Graefe Forceps Fine Science Tools 11050-10
Vicryl absorbable suture Ethicon Inc (Johnson Johnson) W9074
Sterile drapes 30cm x 45 cm Buster 141765
Sterile swabs Shermond HUBY-340
Cotton buds Clean Cross Co., Ltd 1860
Buprenorphine (Vetergesic) Alstoe Animal Health
Clorhexidine Vetasept XHG007
Eye gel Viscotears Novartis
Isoflurane Abbott Laboratories B506
Pentoject, Pentobarbitone Sodium 20% Animalcare
Electroporation
Electroporator BTX ECM830
Platinum Tweezertrode 5mm BTX, Harvard Apparatus 45-0489
Femtojet microinjector Eppendorf 5247000030
Foot Control for Femtojet Microinjector Eppendorf 5247623002
Capillary holder Eppendorf 5176190002
Tissue processing
Paraformaldehyde Sigma P6148
Sucrose VWR (Prolabo) 27480.294
Microscope slides ThermoScientific (Menzel-Gläser) J1800AMNZ
Coverslips Menzel-Gläser 22 x 50 mm #1,5
Aqua Poly/mount Polysciences, Inc 18606

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kolk, S. M., de Mooij-Malsen, A. J., Martens, G. J. Spatiotemporal Molecular Approach of in utero Electroporation to Functionally Decipher Endophenotypes in Neurodevelopmental Disorders. Front Mol. Neurosci. 4, 37 (2011).
  2. Saito, T., Nakatsuji, N. Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation. Dev. Biol. 240, 237-246 (2001).
  3. Shimogori, T., Ogawa, M. Gene application with in utero electroporation in mouse embryonic brain. Dev. Growth Differ. 50, 499-506 (2008).
  4. Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103, 865-872 (2001).
  5. Tabata, H., Nakajima, K. Labeling embryonic mouse central nervous system cells by in utero electroporation. Dev. Growth Differ. 50, 507-511 (2008).
  6. Castro, D. S. A novel function of the proneural factor Ascl1 in progenitor proliferation identified by genome-wide characterization of its targets. Genes Dev. 25, 930-945 (2011).
  7. Pacary, E. Proneural transcription factors regulate different steps of cortical neuron migration through Rnd-mediated inhibition of RhoA signaling. Neuron. 69, 1069-1084 (2011).
  8. Marteau, L. Angiopoietin-2 regulates cortical neurogenesis in the developing telencephalon. Cereb Cortex. 21, 1695-1702 (2011).
  9. Ramon Moliner, E. Comparative Methods in Neuroanatomy. Springer. New york. (1970).
  10. Banks, G. T. Behavioral and other phenotypes in a cytoplasmic Dynein light intermediate chain 1 mutant mouse. J. Neurosci. 31, 5483-5494 (2011).
  11. Elias, G. M., Elias, L. A., Apostolides, P. F., Kriegstein, A. R., Nicoll, R. A. Differential trafficking of AMPA and NMDA receptors by SAP102 and PSD-95 underlies synapse development. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20953-20958 (2008).
  12. Matsuda, T., Cepko, C. L. Controlled expression of transgenes introduced by in vivo electroporation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 1027-1032 (2007).
  13. Navarro-Quiroga, I., Chittajallu, R., Gallo, V., Haydar, T. F. L. ong-term selective gene expression in developing and adult hippocampal pyramidal neurons using focal in utero electroporation. J. Neurosci. 27, 5007-5011 (2007).
  14. Nakahira, E., Yuasa, S. Neuronal generation, migration, and differentiation in the mouse hippocampal primoridium as revealed by enhanced green fluorescent protein gene transfer by means of in utero electroporation. J. Comp. Neurol. 483, 329-340 (2005).
  15. Ramos, R. L., Bai, J., LoTurco, J. J. Heterotopia formation in rat but not mouse neocortex after RNA interference knockdown of DCX. Cereb Cortex. 16, 1323-1331 (2006).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats