Modellering Chemotherapy Resistent Leukemi * These authors contributed equally

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Slone, W. L., Moses, B. S., Evans, R., Piktel, D., Martin, K. H., Petros, W., Craig, M., Gibson, L. F. Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro. J. Vis. Exp. (108), e53645, doi:10.3791/53645 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

1. Advanced Framställning

  1. Framställning av dextran G10 partiklar.
    1. Förbereda G10 uppslamning genom tillsats av 50 ml 1x PBS till 10 g G10 partiklar. Blanda genom att vända och tillåta G10 sedimentera ut ur fosfatbuffrad saltlösning (PBS) vid 4 ° CO / N.
    2. Dagen för G10 kolonnseparation, aspirera PBS från avvecklade G10 partiklar och tillsätt 50 ml färsk PBS. Blanda genom inversion. Upprepa två gånger, tillsätta 50 ml färsk PBS på avvecklade G10 partiklar och förvara vid 4 ° C tills den ska användas.
  2. Odling BMSC och OB.
    1. Bibehålla både BMSC eller OB vid 37 ° C i 6% CO2 och odlades på 10 cm vävnadsodlingsplattor tills 90% konfluens uppnåtts.
    2. Trypsinize BMSC eller OB-celler och split 1: 2 på nya 10 cm plattor. Cellerna odlas till dessa standarder tills det behövs för leukemi co-odling.

2. Upprättande och underhålla Co-kultur

  1. Lägg 5-20 x 10 6 leukemiceller in 10 ml tumörspecifika odlingsmedier på en 80% -90% konfluenta BMSC eller OB platta.
    OBS: Vårt laboratorium bibehåller samkulturer vid 37 ° C i 5% O 2 för att bättre rekapitulera benmärgens mikromiljö som har visat sig variera från 1% till 7% 16-18. Dock är inte kritisk för fastställandet av de tre leukemi subpopulationer upprätthålla co-kulturer vid denna syrespänning och avgörs av labbet.
  2. Var 4: e dag bort alla utom 1 ml media (inklusive leukemiceller i suspension) och ersätt med 9 ml färsk leukemi odlingsmedia. När du tar bort 9 ml av media från plattan, vara noga med att inte störa BMSC eller OB vidhäftande skikt.
    1. Ta bort materialet genom att luta plattan åt sidan och aspirera media i hörnet av plattan. Dessutom, när du lägger till färskt medium, vara noga med att lägga droppvis i hörnet av plattan mot sidoväggen för att säkerställa minimal störning av BMSC eller OB vidhäftande skikt.
  3. Efter 12: e dagen av co-kultur, skölj leukemiceller från BMSC eller OB skiktet genom pipettering odlingsmedier från skålen upp och ner försiktigt över skålen ungefär fem till tio gånger och sedan samlas i 15 ml koniska rör. Reseed på nytt 80% -90% konfluenta BMSC eller OB platta som beskrivs i steg 2,1.
    OBS: Den milda sköljning av co-kultur som beskrivs i steg 2,3 kommer att ta bort S och PB leukemiceller utan att störa BMSC eller OB monolager. Detta gör att endast tumörceller som skall överföras till nästa sam-odlingsplatta. Denna 12 dagars cykel kan upprepas så många gånger som behövs baserat på användarnas behov.

3. Att förbereda G10 Bead Kolumner

OBS: Om steril analys nedströms eller odling krävs efter G10 kolonnseparation följande steg bör utföras med hjälp av steril teknik och G10 kolumner ställas in i en steril biologisk huva.

  1. Pre-warm cellodlingsmedia till 37 ° C i vattenbad (~ 30 ml per kolonn). Med hjälp av en 10 ml engångsspruta, ta bort och kasta kolven. Lägg glasull till sprutan.
  2. Med hjälp av pincett, dra isär glasull i tunna lösa trådar. Lägg till flera skikt av lätt packade glasull till sprutan tills 2/3 av sprutan är fylld med glasull.
    OBS! Glasull är avgörande för att förhindra att lösa G10 partiklar förorenar leukemicellsamling. Kontrollera glasull packad nog att stödja G10-partiklar, men inte alltför tätt packade att blockera medieflödet genom kolonnen.
  3. Bifoga en-vägskranen till spetsen av sprutan i det stängda läget.
  4. Clamp spruta kolumnen ring stå tillräckligt hög så en 50 ml koniskt rör (provrör) kan placeras under kranen. Placera provröret i spruta kolumnen.
  5. Med hjälp av en 10 ml pipett lägga till, droppvis, G10 partiklar återsuspenderades i PBS till kolonnen ovanpåglasullen. Fortsätta att lägga G10 partiklar tills en ~ 2 ml pellet (mätt som graderingar på spruta) av G10 partiklar former ovanpå glasullen.
  6. Balansera G10 kolonn med förvärmda media.
    1. Tillsätt 2 ml av förvärmda media till kolonnen. Öppen avstängningskran ventilen långsamt, så att media strömmar ut ur kolonnen droppvis.
    2. Upprepa steg 3.6.1 tills totalt 10 ml förvärmda media har sprang över kolonnen.
      OBS: Om G10 partiklar syns i flödet genom i provröret, antingen 1) lägga till fler G10-partiklar för att upprätthålla ~ 2 ml pellet gör att inga ytterligare G10 partiklar fly från kolonnen eller 2) ersätta kolonnen med en oanvänd ett och upprepa steg 3.4-3.6.1.
    3. Efter förvärmda media avlopp från kolonnen, stänga kranen och släng uppsamlingsröret med flöde genom. Lägg till ny uppsamlingsrör i kolumnen. Kolumn är redo att laddas med media + cellblandningen.
      OBS: Kolonnerska användas omedelbart och får inte torka.

4. Separera 3 Subpopulationer inom Co-kultur

  1. Insamling av suspension (S) tumör subpopulation.
    1. Aspirera media från co-odlingsplatta med pipett och försiktigt åter tillämpa samma media för att skölja plattan och samla media som innehåller leukemiceller i en 15 ml koniska rör. Leukemiceller uppsamlade är S subpopulation.
  2. Insamling av fas Bright (PB) tumör subpopulation.
    1. Tillsätt 10 ml färskt medium tillbaka på sam-odlingsplatta. Skölj kraftigt genom att pipettera tillagda media upp och ner ungefär 5 gånger för att avlägsna vidhäftande leukemiceller men inte tillräckligt hårt för att få bort vidhäftande BMSC / OB komponent.
    2. Sug med pipett och samla media i en 15 ml koniska rör. De insamlade cellerna är PB subpopulation.
  3. Insamling av fas Dim (PD) tumör subpopulation.
    1. Skölj plattan med 1 ml PBS till remove återstående media. Trypsinize sam-odlingsplatta med 3 ml trypsin och placera in i 37 ° C inkubator under 5 min.
    2. Ta bort plattan från inkubatorn och knacka försiktigt sidorna av plattan för att lösgöra vidhäftande BMSC / OB.
    3. Tillsätt 1 ml fetalt bovint serum (FBS) och pipettera upp och ner 3-5 gånger för att bryta isär stora cellaggregat.
    4. Samla media med celler i ett 15 ml koniskt rör. Dessa celler är den orenade PD subpopulation med BMSC / OB också.
  4. Centrifug tre isolerade subpopulationer vid 400 xg under 7 min. Aspirera och kassera supernatanten sedan individuellt suspendera pellets i 1 ml förvärmda media. Cellerna är redo att lastas på en G10-kolonn.

5. Loading Co-kultur celler på G10 kolonn

OBS: Se till att kranen är helt stängd innan du lägger media innehållande celler till G10-kolonn. Dessutom måste varje subpopulation sprang över en separat G10 kolonn så att inte inföe någon bias mellan populationer i nedströms analys.

  1. Med hjälp av en 1000 l pipett, tillsätt 1 ml i varje cell subpopulation i förvärmda media till en separat G10 kolonn droppvis. Se till att media som innehåller cellerna kvar på toppen eller inom G10 pellet. Låt cellerna att inkubera på G10 pellet i 20 minuter vid RT.
    OBS: Kranen förblir stängd för längden av inkubationstiden.

6. Samla leukemiceller från G10 Column

  1. Lägg 1-3 ml förvärmda media till varje G10-kolonn. Öppna kranen ventilen och låta media att långsamt gå ur kolonnen droppvis.
    OBS: Det är viktigt att upprätthålla en långsam flödeshastighet från kolonnen eller G10 pelleten innehållande BMSC / OB kan tvätta ut ur kolonnen och förorena de isolerade leukemiceller.
  2. Fortsätt att lägga förvärmda media i små steg (1-2 ml) och G10-kolonn tills totalt 15 till 20 ml har gått genom kolonnen och har samlats in. Stäng avstängningskran vaLVE och mössa provrör.
    OBS: Om en G10 partikelpellet syns på botten av uppsamlingsröret, försiktigt bort media från röret lämnar G10 partikelpellet ostört och överföring till nya rör.
  3. Centrifugera uppsamlades media vid 400 xg under 7 min vid rumstemperatur. Avlägsna supernatanten och resuspendera cellpelleten i buffert lämplig för användning nedströms.
  4. Cellerna är nu en ren population av leukemiceller fria från BMSC eller OB förorening och är redo att tillämpas på ansökningar nedströms på användarens diskretion.
    OBS: leukemicelllivsduglighet bör förbli oförändrad vid passage celler genom G10 kolumner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Framgångsrik installation och kultur av detta samarbete kultur modell kommer att resultera i upprättandet av 3 subpopulationer av leukemiceller i förhållande till vidhäftande BMSC eller OB monolager. Figur 1 visar hur ALL-celler sådda i en BMSC monolager visas först som en enda population av suspenderat leukemiceller. Under 4 dagar leukemiceller interagerar med BMSC att bilda 3 rumsliga subpopulationer av leukemiceller (suspenderade (S), fas ljus (PB), och fas dim (PD)). Medan 3 subpopulationer av tumörceller kan vanligen ses efter 24 timmar av co-kultur med BMSC eller OB vi samar odla cellerna under 4 dagar för att låta hela dynamiken och samspelet mellan de leukemiceller och BMSC / OB celler att ske innan någon manipulation eller experiment sker (Figur 1). Observera också att vi hålla co-kulturer vid ett syrgastryck av 5% till rekapitulera benmärgs fysiologi, som har been rapporterade att sträcka sig från 1% -7% 16-18.

En stor majoritet av nedströms analys kräver separationen av de leukemiceller från BMSC eller OB. För att uppnå detta använder vi G10-kolonner för att skörda en ren population av leukemiceller (Figur 2A). Efter trypsinisering av BMSC och PD Reh celler en blandad befolkning ses av två distinkta framåt / sido populationer av flödescytometri (figur 2B, övre panelen). Efter G10 separation en ren population av endast Reh ALL-celler utvinns, vilket bekräftades av fram / ​​sidospridning flödescytometri (figur 2B, nedre panelen).

Användning av detta samarbete kultur modell och möjligheten att isolera leukemiceller från 3 subpopulationer när samodling med BMSC eller OB möjliggör förhör av leukemi cellfenotyp i förhållande till dess rumsliga läge i förhållande till vidhäftande BMSC eller OBmonolager. Av särskilt intresse är att alla celler som återvunnits från PD befolkningen i ett BMSC eller OB co-kultur har liten eller ingen celldöd efter exponering för cytostatika (Figur 3A, B).

Figur 1
Figur 1. Alla celler i samodling med BMSC eller OB bildar tre rumsliga populationer. Vårt labb använder ett in vitro samodlingssystemet att modellera leukemicellsinteraktioner med benmärgsmikro härledda stromaceller (BMSC eller OB). Att etablera co-kultur, leukemiceller (röda) såddes på en 80% -90% sammanflytande monolager av BMSC eller OB (blå), som betecknas som "Time 0". Co-kulturer hålls vid 37 ° C vid 5% syre för att approximera betingelserna för benmärgsmikromiljön. Leukemiceller kommer att börja bilda 3 subpopulationer så tidigt som 24 timmar, men för att möjliggöra fullständig interaktioner form vi tillåta co-kulturer 4 dagar att etablera innan utnyttja leukemiceller för experiment. Vid dag 4 (paneler till höger), kommer tre subpopulationer av leukemiska celler bildas i förhållande till den vidhäftande monolager. Den schematiska (överst till höger) och faskontrastmikroskopi (nere till höger) visar den suspenderade (S) leukemiceller fritt flyter i mediet; fas ljusa (PB) leukemiceller, vilka är vidhäftade till ytan av den BMSC eller OB monoskikt; och fas dim (PD) leukemiceller som har migrerat under BMSC eller OB monolager. Skala stapel representerar 10 mikrometer. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 2
Figur 2. Användning av G10 kolumner möjliggör separation av alla celler från BMSC / OB. (A) Demonstration av processen med användning av en G10 colUMN att separera alla celler från BMSC / OB co-kultur för att uppnå en ren population av tumörceller för efterföljande analys. Från vänster till höger, är en blandning av alla celler och BMSC / OB celler läggs till toppen av G10-kolonn; (Center) cellblandningen kommer att bosätta sig i G10 slam och bör inkuberas vid RT i 20 min (Obs: Kranen är i det stängda läget under första två stegen); (höger) leukemiceller utvinns genom att öppna kranen och sköljning kolonn med förvärmda media. (B) Övre panel visar före G10 separation som det är en blandad population av celler som innehåller BMSC (blå port) och REH ALL-celler (röda porten ) genom utvärdering framåt (FSC) och sidospridning (SSC) analys. Bottenplatta, efter G10 separation bara ren population av REH ALL-celler (röd gate) förblir med föroreningar mindre än 1% stromaceller (blå port). Klicka här för att se en större version av thi s siffra.

Figur 3
Figur 3. PD leukemiceller har ökad resistens mot kemoterapi exponering. SD-1 leukemiceller som återvunnits från PD befolkningen i en BMSC co-kultur (A) visas inte nedsatt livsduglighet efter en fyra dagars exponering för Ara-C [1 iM] , MTX [50 ^ M], eller VCR [25 ^ M], liknande obehandlade kontroller (observera att en andra dos av Ara-C tillsattes vid 48 h till att redogöra för någon drog förlust på grund av stabilitet). Leukemiceller från enbart media, har S, och PB populationer kraftigt minskad lönsamhet som bestäms av trypanblått exclusion.SD-1 leukemiceller samodlade med OB-celler uppvisar liknande trender i lönsamheten (B). Resultaten uttrycks som medelvärde ± SEM. (*) Betecknar p <0,05, oparat t-test i förhållande till obehandlade kontroller.5fig3large.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Minimal kvarvarande sjukdom (MRD) som bidrar till återfall av sjukdomen fortsätter att vara en stor klinisk utmaning vid behandling av aggressivt refraktär ALL, liksom en mängd andra hematologiska maligniteter. Benmärgens mikromiljö är den vanligaste platsen för återfall i ALL 3,8. Som sådan, modeller som modellera benmärgsmikro är viktiga verktyg för att testa hypoteser som rör leukemitumörcellöverlevnad och underhåll av MRD under kemoterapi exponering. Medan musmodeller definierar den gyllene standarden för tester frågor relaterade till läkemedlets effektivitet, fortsätter 2D co-kultur för att vara en kostnadseffektiv metod för att testa hypoteser och narkotikastrategier i samband med ben morgon mikro stöd av leukemi cellöverlevnad. Många grupper har visat att samtidig odling av leukemiceller med BMSC eller OB ger en överlevnadsfördel när de utsattes för kemoterapimedel 9,10,12-14,19-21. Arbete modellering normal omogna CD34 + hemakroppsproduktionen celler i samodling med mesenkymala stamceller (MSC) avslöjade att hematopoietiska celler kommer att interagera med det vidhäftande monolager av MSCs för att bilda tre distinkta spatiala populationer av hematopoetiska celler 22,23. Proliferation och differentiering av CD34 + celler utfördes i förhållande till deras läge i co-kultur 22. Vi har expanderat på denna observation för att testa frågor om benmärgsmikro stromaceller stöd av en resistent population av tumörceller i en 2D co-kultur och dess isolering för efterföljande analys.

Till skillnad från vanliga 2D co-kulturmodeller som typiskt prov leukemiska celler genom avlägsnande av den suspenderade tumör visar vår modell som samodling representerar en mer dynamisk interaktion i vilka leukemiska celler i samodling med BMSC eller OB bildar tre subpopulationer förhållande till BMSC eller OB monolager (Figur 1). Tumör subpopulationer som bildar suspenderas (S) tumör, which är fritt flytande i media; fas ljusa (PB) som är vidhäftad till ytan av den BMSC eller OB; och fas dim (PD) som har begravt under BMSC eller OB monolager (Figur 1). I denna modell, fann vi att en strikt utfodring och återsådd schema är viktigt att uppnå konsekventa resultat i en co-kultur-modellen och därför mata vi co-kulturer vid 4 dagars mellanrum och överföra tumör nya BMSC eller OB monolager var 12 dagar. Detta kan kräva modifiering för alternativa tumörtyper som behövs. Antalet tumörceller som kommer att migrera under BMSC eller OB för att bilda den PD populationen kan variera mellan olika leukemiceller. Detta kan vara en begränsning av modellen, då antalet PD tumörceller är låg vilket gör det svårt att samla tillräckligt med celler för efterföljande analys. I vissa fall kan detta problem kan övervinnas genom att inrätta replikera samodlingar för att möjliggöra poolning av de tre enskilda subpopulationer.

Eftersom denna modell religger på tumör interaktion cell med BMSC eller OB det är viktigt att ha en effektiv metod för att avlägsna stromal cellerna kontamineras för att hantera specifika biologi leukemiceller. För att åstadkomma denna separation av tumörceller från stroma vi använder G10 kolumner. Korrekt installation och användning av dessa kolumner är avgörande för isolering av rena tumörpopulationer för nedströms analys. Som visas i figur 2B, korrekt genomförande av G10-kolonn separation resulterar i återvinning av tumörceller på mer än 99% renhet. Detta gör det möjligt för nedströms analys av leukemiceller utan komplikation av tolkningen av resultaten som skulle bli följden av föroreningar stromal cell. Det är viktigt att notera att alla leukemicelltyper huruvida cellinjer eller primära patientprover kommer att variera något i deras förmåga att passera genom G10 kolumner. Före användning i storskaliga experiment användare bör bestämma antalet leukemiceller måste ingång för att återvinna den önskade mängden behövs feller deras specifika behov nedströms. Dessutom mängden tvättmedier körde över G10-kolonn efter inkubation kan ökas för att försöka öka antalet celler återvunna. Försiktighet bör vidtas för att försäkra att de ytterligare tvättar inte orsakar stromal kontamination cell som kan bestämmas eftertvättlösningen genom cellräkning eller flödescytometrianalys av flödet genom.

I upprättandet denna modell, observerade vi att leukemiceller som återvunnits från PD populationen har ökat viabilitet jämfört med leukemiceller som odlas i media ensamt, såväl som till de som återhämtat sig från S- eller PB populationer i samma samodling när exponerade för cytostatika (Figur 3 AB). Detta är betydelsefullt eftersom det representerar en population av leukemiceller in vitro som härrör uttalad skydd mot kemoterapi. Detta ger ett användbart verktyg för att testa behandlingsstrategier som syftar till att rikta de mest motståndskraftiga tumör befolkning, som stöds avmikroomgivningen i benmärgen. Dessutom beror det på att dessa leukemiceller är så väl skyddade av BMSC eller OB co-kultur mottaglig för in vitro kombination behandlingsstrategier, som i media ensamt eller vanliga co-kultur modeller förefaller eller helt skulle döda tumören som inte alltid representativa för effekter i resistenta mikro stöds leukemipopulationer.

Slutligen anser vi att användningen av denna modell kan ge värdefull insikt i samspelet mellan BMSC / OB, och leukemiceller som är ansvariga för resistens mot cytostatikabehandling, leda till MRD, och därefter återfall. Denna modell ger en in vitro plattform för att utforma experiment som bättre informerar nedströms prekliniska modeller. Även om vi visar användning av denna modell för att testa samspelet mellan benmärgsstromaceller och alla härledda leukemiceller, vi är hoppfulla att framtida riktningar och tillämpningar av denna modell kommer att bli osseful i en mängd olika maligniteter där benmärgen mikro ger ett område av fristad för tumörer under kemoterapeutisk intervention.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
G10 sephadex beads Sigma G10120 Referred to in manuscript as gel type 10 cross-linked dextran particles
10 ml sterile syringe BD 309604
Glass wool Pyrex 3950
1-way stopcocks World Precision Instruments, Inc. 14054-10
50 ml conical centrifuge tubes World Wide Medical Products 41021039 Used as collection tubes
15 ml conical centrifuge tubes World Wide Medical Products 41021037 Used for cell collection
Fetal Bovine Serum Sigma F6178
0.05% Trypsin  Mediatech, Inc. 25-053-CI
100 x 20 mm Cell Culture Dishes Greiner Bio-One 664160
Culture media
Osteoblast culture media  PromoCell C-27001 For human osteoblast media 
RPMI 1640 media Mediatech, Inc. 15-040 For tumor media prepation 
Cell lines
Adherent Cells:
Human Osteoblasts PromoCell C-12720 Human osteoblast were cultured according to the supplier’s recommendations. 
Human Bone Morrow Stromal Cells WVU Biospecimen Core De-identified primary human leukemia and bone marrow stromal cells (BMSC) were provided by the Mary Babb Randolph Cancer Center (MBRCC) Biospecimen Processing Core and the West Virginia University Department of Pathology Tissue Bank. BMSC cultures were established as previously described (*)
Leukemic Cells:
REH ATCC ATCC-CRL-8286 REH cells were cultured according to the supplier’s recommendations and recommended media. 
SD-1 DSMZ ACC 366 SD-1 were cultured according to the supplier’s recommendations and recommended media. 
(*) Gibson LF, Fortney J, Landreth KS, Piktel D, Ericson SG, Lynch JP. Disruption of bone marrow stromal cell function by etoposide. Biol Blood Marrow Transplant J Am Soc Blood Marrow Transplant. 1997 Aug;3(3):122–32.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ayala, F., Dewar, R., Kieran, M., Kalluri, R. Contribution of bone microenvironment to leukemogenesis and leukemia progression. Leukemia. 23, (12), 2233-2241 (2009).
  2. Coustan-Smith, E., Sancho, J., et al. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 96, (8), 2691-2696 (2000).
  3. Gaynon, P. S., Qu, R. P., et al. Survival after relapse in childhood acute lymphoblastic leukemia. Cancer. 82, (7), 1387-1395 (1998).
  4. Kikuchi, M., Tanaka, J., et al. Clinical significance of minimal residual disease in adult acute lymphoblastic leukemia. Int. J. Hematol. 92, (3), 481-489 (2010).
  5. Krause, D. S., Scadden, D. T., Preffer, F. I. The hematopoietic stem cell niche-home for friend and foe? Cytometry B Clin. Cytom. 84, (1), 7-20 (2013).
  6. Meads, M. B., Hazlehurst, L. A., Dalton, W. S. The Bone Marrow Microenvironment as a Tumor Sanctuary and Contributor to Drug Resistance. Clin. Cancer Res. 14, (9), 2519-2526 (2008).
  7. Nguyen, K., Devidas, M., et al. Factors Influencing Survival After Relapse From Acute Lymphoblastic Leukemia: A Children's Oncology Group Study. Leuk. Off. J. Leuk. Soc. Am. Leuk. Res. Fund UK. 22, (12), 2142-2150 (2008).
  8. Szczepanek, J., Styczyński, J., Haus, O., Tretyn, A., Wysocki, M. Relapse of Acute Lymphoblastic Leukemia in Children in the Context of Microarray Analyses. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.). 59, (1), 61-68 (2011).
  9. Boyerinas, B., Zafrir, M., Yesilkanal, A. E., Price, T. T., Hyjek, E. M., Sipkins, D. A. Adhesion to osteopontin in the bone marrow niche regulates lymphoblastic leukemia cell dormancy. Blood. 121, (24), 4821-4831 (2013).
  10. Bradstock, K., Bianchi, A., Makrynikola, V., Filshie, R., Gottlieb, D. Long-term survival and proliferation of precursor-B acute lymphoblastic leukemia cells on human bone marrow stroma. Leukemia. 10, (5), 813-820 (1996).
  11. Clutter, S. D., Fortney, J., Gibson, L. F. MMP-2 is required for bone marrow stromal cell support of pro-B-cell chemotaxis. Exp. Hematol. 33, (10), 1192-1200 (2005).
  12. Manabe, A., Murti, K. G., et al. Adhesion-dependent survival of normal and leukemic human B lymphoblasts on bone marrow stromal cells. Blood. 83, (3), 758-766 (1994).
  13. Mudry, R. E., Fortney, J. E., York, T., Hall, B. M., Gibson, L. F. Stromal cells regulate survival of B-lineage leukemic cells during chemotherapy. Blood. 96, (5), 1926-1932 (2000).
  14. Tesfai, Y., Ford, J., et al. Interactions between acute lymphoblastic leukemia and bone marrow stromal cells influence response to therapy. Leuk. Res. 36, (3), 299-306 (2012).
  15. Hathcock, K. S. Depletion of Accessory Cells by Adherence to Sephadex G-10. Curr. Protoc. (2001).
  16. Berniakovich, I., Giorgio, M. Low oxygen tension maintains multipotency, whereas normoxia increases differentiation of mouse bone marrow stromal cells. Int. J. Mol. Sci. 14, (1), 2119-2134 (2013).
  17. Chow, D. C., Wenning, L. A., Miller, W. M., Papoutsakis, E. T. Modeling pO(2) distributions in the bone marrow hematopoietic compartment. II. Modified Kroghian models. Biophys. J. 81, (2), 685-696 (2001).
  18. Holzwarth, C., Vaegler, M., et al. Low physiologic oxygen tensions reduce proliferation and differentiation of human multipotent mesenchymal stromal cells. BMC Cell Biol. 11, (2010).
  19. O'Leary, H., Akers, S. M., et al. VE-cadherin Regulates Philadelphia Chromosome Positive Acute Lymphoblastic Leukemia Sensitivity to Apoptosis. Cancer Microenviron. Off. J. Int. Cancer Microenviron. Soc. 3, (1), 67-81 (2010).
  20. Wang, L., Chen, L., Benincosa, J., Fortney, J., Gibson, L. F. VEGF-induced phosphorylation of Bcl-2 influences B lineage leukemic cell response to apoptotic stimuli. Leukemia. 19, (3), 344-353 (2005).
  21. Wang, L., Coad, J. E., Fortney, J. M., Gibson, L. F. VEGF-induced survival of chronic lymphocytic leukemia is independent of Bcl-2 phosphorylation. Leukemia. 19, (8), 1486-1487 (2005).
  22. Jing, D., Fonseca, A. V., et al. Hematopoietic stem cells in co-culture with mesenchymal stromal cells--modeling the niche compartments in vitro. Haematologica. 95, (4), 542-550 (2010).
  23. Jing, D., Wobus, M., Poitz, D. M., Bornhäuser, M., Ehninger, G., Ordemann, R. Oxygen tension plays a critical role in the hematopoietic microenvironment in vitro. Haematologica. 97, (3), 331-339 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics