पुनर्निर्माण माइक्रोसर्जरी में इस्केमिया-रिपेरेपमेंट इंजरी के अध्ययन के लिए एक प्री-क्लीनिकल चूहा मॉडल

Medicine

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Summary

यहां, हम पुनर्निर्माण माइक्रोसर्जरी में इस्केमिया-रिपरफ्यूजन चोट के रोगविज्ञान का अध्ययन करने के लिए एक पूर्व नैदानिक पशु मॉडल का वर्णन करते हैं। चूहे में सतही कौडल एपिगास्ट्रिक जहाजों पर आधारित यह मुफ्त त्वचा फ्लैप मॉडल इस्केमिया-रिपेरेशन चोट से संबंधित क्षति का प्रतिकार करने के लिए विभिन्न उपचारों और यौगिकों के मूल्यांकन के लिए भी अनुमति दे सकता है।

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Ballestín, A., Casado, J. G., Abellán, E., Vela, F. J., Campos, J. L., Martínez-Chacón, G., Bote, J., Blázquez, R., Sánchez-Margallo, F. M. A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery. J. Vis. Exp. (153), e60292, doi:10.3791/60292 (2019).

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Abstract

इस्केमिया-रिपरफ्यूजन इंजरी पुनर्निर्माण माइक्रोसर्जरी में फ्लैप विफलता का मुख्य कारण है। चूहा अपनी लागत प्रभावशीलता और मनुष्यों के लिए इसके अनुवाद के कारण जैव चिकित्सा अनुसंधान के कई क्षेत्रों में पसंदीदा प्रीक्लिनिकल पशु मॉडल है। यह प्रोटोकॉल इस्केमिया-रिपेरेशन इंजरी वाले चूहों में प्रीक्लीनिकल फ्री स्किन फ्लैप मॉडल बनाने की विधि का वर्णन करता है। वर्णित 3 सेमी x 6 सेमी चूहा मुक्त त्वचा फ्लैप मॉडल कई संवहनी लिगेचर और संवहनी पेडिकल के खंड के प्लेसमेंट के बाद आसानी से प्राप्त किया जाता है। फिर, इस्कीमिक अपमान और माइक्रोसर्जिकल एनास्टोमोसिस के पूरा होने के बाद 8 घंटे, मुफ्त त्वचा फ्लैप ऊतक क्षति विकसित करता है। इन इस्केमिया-रिपेरेव चोट से संबंधित नुकसान का अध्ययन इस मॉडल में किया जा सकता है, जिससे यह इस रोगोविज्ञान प्रक्रिया को संबोधित करने के लिए चिकित्सीय एजेंटों का मूल्यांकन करने के लिए एक उपयुक्त मॉडल बन गया है। इसके अलावा, इस पशु मॉडल के मूल्यांकन के लिए प्रोटोकॉल में दो मुख्य निगरानी तकनीकों का वर्णन किया गया है: ट्रांजिट-टाइम अल्ट्रासाउंड तकनीक और लेजर स्पेक्टल कंट्रास्ट विश्लेषण।

Introduction

माइक्रोसर्जरी पुनर्निर्माण के लिए एक आम शल्य चिकित्सा तकनीक बन गई है जो जटिल ऊतक दोषों को बहाल करने के लिए हस्तक्षेप (उदाहरण के लिए, मुफ्त ऊतक हस्तांतरण) की अनुमति देती है, विच्छेदित अंगों का पुनर्रोपण, और यहां तक कि समग्र ऊतक एलोट्रांसप्लांटेशन भी।

माइक्रोसर्जिकल पुनर्निर्माण दर्दनाक चोटों, जलने या ऑन्कोलॉजिकल रिसेक्शन के कारण होने वाले दोषों की एक विस्तृत विविधता के लिए आदर्श हैं। हालांकि, फ्री फ्लैप फेलियर का कम प्रतिशत है, जिसमें से इस्केमिया-रिपरफ्यूजन (आई/आर) चोट मुख्य जिम्मेदार कारकों में से एक है । सभी माइक्रोसर्जिकल रूप से स्थानांतरित ऊतक इस्केमिया की एक अनिवार्य अवधि सहन करते हैं जिसके बाद रिपरफ्यूजन होता है। प्राथमिक इस्केमिया की यह अवधि आमतौर पर अच्छी तरह से सहन की जाती है; इस प्रकार, माइक्रोसर्जिकल प्रक्रियाओं की सफलता दर 90%1,2से अधिक है . हालांकि, शल्य चिकित्सा संशोधन की आवश्यकता वाले फ्लैप का केवल 63.7% पूरी तरह से बचाया जा सकता है3। इसके अलावा, उंगली में आक्षेप चोटों के पुनर्रोपण के मामलों में, सफलता दर 66%4है; और समग्र ऊतक एलोट्रांसप्लांटेशन पीड़ित I/R चोट के मामलों में, अस्वीकृति प्रतिशत बढ़ जाता है क्योंकि आई/आर चोट जन्मजात प्रतिरक्षा5,6को सक्रिय करती है ।

इसलिए, इस रोगविज्ञानी घटना का अध्ययन रुचि का है। पशु मॉडल शारीरिक तंत्र की जांच और उपन्यास चिकित्सा का आकलन करने से पहले यह मनुष्यों के लिए लागू किया जा सकता है7के लिए आवश्यक हैं । पोत शरीर रचना विज्ञान और चूहों और मनुष्यों के बीच शारीरिक समानताएं चूहों को आई/आर चोट जैसी जैविक प्रक्रियाओं की जांच के लिए एक आदर्श मॉडल बनाती हैं ।

यहां, हम I/R चोट के साथ एक चूहा मुक्त त्वचा फ्लैप मॉडल के निर्माण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल पेश करते हैं, साथ ही अंतर और पश्चात आकलन के लिए विभिन्न संभावनाएं हैं । इस विधि का समग्र लक्ष्य I/R चोट और संभावित उपचार का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी पूर्वनैदानिक मॉडल का वर्णन करने के लिए अपनी संबंधित क्षति को कम करने के लिए है ।

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Protocol

सभी प्रक्रियाओं जेसुस Usón Minimally इनवेसिव सर्जरी केंद्र और क्षेत्रीय सरकार है कि यूरोपीय कानून पर आधारित है के कल्याण के दिशा निर्देशों की नैतिक समिति के अनुसार आयोजित किया गया ।

1. प्रीसर्जिकल और सर्जिकल तैयारी

  1. हाउस विस्टार चूहों का वजन 22-25 डिग्री सेल्सियस पर पिंजरों में 290-350 ग्राम होता है जिसमें भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच होती है। तनाव से प्रेरित समस्याओं को रोकने के लिए सर्जरी से पहले 1 सप्ताह के लिए Acclimate ।
  2. एक एनेस्थेटिक इंडक्शन कक्ष में चूहा रखें, ऑक्सीजन के 5 मिन (0.5-1 एल/मिन) वितरित करें, और संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए 5% सेवोफ्लोरीन देने के लिए वाष्पीकरण का उपयोग करें।
  3. संज्ञाहरण प्रेरित होने के बाद चूहे को कक्ष से बाहर ले जाएं। चूहे पर साँस लेना फेसमास्क रखें और संज्ञाहरण को बनाए रखने के लिए 2% सेवोफ्लुरेन की प्रवाह दर प्रदान करें। एक अंगूठे चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी के लिए जांच करें ।
  4. कॉर्नियल सुखाने और नुकसान को रोकने के लिए आंखों की सुरक्षा मलहम का इस्तेमाल करें।
  5. सामान्य संज्ञाहरण के तहत जानवर की निगरानी इस प्रकार है: एक गुदा थर्मामीटर (35.9-37.5 डिग्री सेल्सियस) रखें, म्यूकस झिल्ली रंग की जांच करें, और ओ2 संतृप्ति (>95%) की जांच करने के लिए एक कृंतक पल्स ऑक्सीमीटर की स्थिति और हृदय गति (250-450 बीपीएम)।
  6. हाइपोथर्मिया से बचने और प्रक्रियात्मक संज्ञाहरण वसूली में सुधार करने के लिए गर्मी समर्थन (इलेक्ट्रिक हीटिंग पैड या परिसंचारी पानी कंबल) का उपयोग करें।
  7. उचित जलयोजन बनाए रखने के लिए गर्म चमड़े के नीचे शारीरिक खारा समाधान के 5 mL इंजेक्ट करें।
  8. एनाल्जेसिक और एंटी-भड़काऊ दवाएं (मेमोक्सीकैम 1 मिलीग्राम/किलो/दिन) और रोगनिरोधी एंटीबायोटिक्स (एनरोफ्लोक्सेसिन 7.5 मिलीग्राम/किलो/दिन) प्रक्रिया से पहले और 5 दिनों के लिए पोस्टऑपरेटिव रूप से प्रदान करें।
  9. जानवर के पेट और इंगिनल क्षेत्रों दाढ़ी।
  10. सामयिक पोविडोन-आयोडीन लागू करें, इसके बाद 70% इथेनॉल। जानवर को बाँझ पर्दे से ढक दें।

2. मुफ्त त्वचा फ्लैप मॉडल सर्जरी

  1. एक सर्जिकल मार्कर का उपयोग करके, पेट के मिडलाइन के साथ 6 सेमी पक्षों में से एक मिलान 3 सेमी x 6 सेमी फ्लैप करें। इसके बाद, पेट के मिडलाइन पर 6 सेमी त्वचा चीरा और 6 सेमी मिडलाइन चीरा के ऊपरी और निचले हिस्से में दो लंबवत 3 सेमी चीरों बनाएं।
  2. डिजाइन किए गए 3 सेमी x 6 सेमी त्वचा फ्लैप को विच्छेदन शुरू करने के लिए, त्वचा की गतिशीलता के कारण फ्लैप (स्केलपेल के बजाय) बढ़ाने के लिए कैंची और एसन संदंश का उपयोग करें।
  3. धीरे-धीरे कपाल क्षेत्र से फ्लैप को विच्छेदन के साथ मदद करने और प्रचुर मात्रा में ढीले संयोजी ऊतक से घिरे एपिगास्ट्रिक पेडिकल की पहचान करने के लिए कौडल क्षेत्र की ओर खींचें।
  4. इसे छूने के बिना या जहाज की दीवार को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए एडवेंटिया को कम से कम लोभी करके फ्लैप पेडिकल को विच्छेदन करें।
  5. 8/0 नायलॉन टांके का उपयोग करने के लिए प्रॉक्सिमल कौडल फेमोरल जहाजों, पार्श्व परिफ्लेक्स फेमोरल जहाजों, और saphenous जहाजों लिगेचर द्वारा occlude । इस तरह, फ्लैप का परफ्यूजन ऊर्ध्वाधर धमनी द्वारा प्रदान किया जाता है और सीधे सतही कौडल एपिगास्ट्रिक धमनी के माध्यम से जारी रहता है, जबकि वेनस जल निकासी ऊर्ध्वाधर नस की ओर सतही कौडल एपिगास्ट्रिक नस द्वारा किया जाता है।
  6. संवहनी पेडिकल को क्लैंप करें और फिर 8 एच इस्केमिया अवधि शुरू करने के लिए इसे काट लें। प्रक्रिया के दौरान तापमान बनाए रखने के लिए बिजली के कंबल का उपयोग करें। गर्म (25 डिग्री सेल्सियस) 0.9% खारा समाधान के दो 5 मिलीलीटर इंजेक्शन को चमड़े से प्रशासित किया जाता है। प्रक्रिया की शुरुआत के बाद पहले प्रशासन को 2 घंटे किया जाता है; और जानवर की उचित वसूली प्राप्त करने के लिए प्रक्रिया के अंत में दूसरा।
  7. फ्लैप को परफ्यूज करने और माइक्रोसर्कुलेशन से स्थिर रक्त को हटाने के लिए हेपरिनाइज्ड लवलाइन सॉल्यूशन (100 यू/एमएल) का उपयोग करें।
  8. माइक्रोसर्जिकल एनास्टोमूसा को करने के लिए 10/0 नायलॉन टांके का इस्तेमाल करें।
  9. इस्केमिया के 8 घंटे के बाद, माइक्रोवैस्कुलर क्लैंप को हटाकर फ्लैप को हटा दें और नीचे वर्णित संवहनी पेटेंसी की जांच करें।

3. इंट्राऑपरेटिव असेसमेंट

  1. नस और धमनी के लिए मैनुअल पैशन टेस्ट (खाली और रिफिल टेस्ट) करें। ऐसा करने के लिए, दो माइक्रोसर्जिकल संदंश का उपयोग करें, उन्हें एनास्टोमोसिस तक डिस्टर्ब करें और दूध देने का प्रदर्शन करें। सबसे पहले एनास्टोमोसिस साइट के निकटतम संदंश जारी करें। यदि संवहनी अनुभाग खाली होने के बाद रक्त प्रवाह जारी रहता है, तो एनास्टोमोसिस पेटेंट है।
  2. ट्रांजिट-टाइम अल्ट्रासाउंड फ्लोमीटर और माइक्रोसर्जिकल जांच का उपयोग करके रक्त प्रवाह का आकलन करें।
    1. प्रवाह जांच के लिए उचित आकार चुनने के लिए पेडिकल जहाजों के व्यास को मापें।
      नोट: 0.7 मिमी प्रवाह जांच 0.4 मिमी से 0.7 मिमी तक के जहाजों को माप सकती है; 1.0 मिमी प्रवाह जांच 0.7 मिमी से 1.0 मिमी तक के जहाजों को माप सकती है; 1.5 मिमी प्रवाह जांच 1.0 मिमी से लेकर 1.5 मिमी तक के जहाजों को माप सकती है।
    2. प्रवाह की मात्रा निर्धारित करने के लिए प्रवाह जांच के अल्ट्रासोनिक सेंसिंग विंडो (रिफ्लेक्टर और ट्रांसड्यूसर के बीच) में लक्ष्य पोत रखें।
      नोट: किसी भी तनाव या खींचने से बचने के लिए, पोत के विमान के लिए जांच तटस्थ पकड़ो।
    3. यह देखकर ध्वनिक युग्मन की गुणवत्ता की जांच करें कि प्रदर्शन पर सभी बार हरे रंग के हैं।
      नोट: यदि अच्छा ध्वनिक युग्मन प्राप्त करना मुश्किल है, तो अल्ट्रासोनिक जेल या शारीरिक खारा समाधान का उपयोग सामयिक रूप से करें।
    4. जब अच्छा युग्मन प्राप्त हो जाता है और पोत को बिना किसी तनाव के ध्वनिक खिड़की में रखा जाता है, तो डेटा को स्टोर करने के लिए डिस्प्ले पर रिकॉर्ड बटन पर क्लिक करें।
      नोट: एक विश्वसनीय और सही माप प्राप्त करने के लिए, सुनिश्चित करें कि तरंग पैटर्न लगातार दोहराने योग्य है।
  3. एक बार किया जाता है, त्वचा को बंद करने के लिए पॉलीग्लाइकोलिक एसिड (पीजीए) 4-0 अवशोषित टट टांके (16mm 3/8 त्रिकोणीय सुई) का उपयोग करें। यदि सीवन का हिस्सा चूहे द्वारा पश्चात द्वारा काटा जाता है तो शक्ति और ऊतक की स्थिति को बनाए रखने के लिए एक सरल बाधित पैटर्न का उपयोग करें।
  4. लेजर स्पेक्टल कंट्रास्ट एनालिसिस (एलसीए) का उपयोग करके फ्लैप के माइक्रोसर्कुलेशन का आकलन करें।
    1. प्रत्येक जानवर के लिए और अध्ययन के प्रत्येक अनुवर्ती के लिए एक नई रिकॉर्डिंग करें। इसके लिए फाइल/न्यू रिकॉर्डिंगपर क्लिक करें । एक नई विंडो खुलती है, और सेटअप पैनल प्रदर्शित होता है। इसके बाद प्रोजेक्ट का नाम, विषय, संचालक और रिकॉर्डिंग नाम की जानकारी संपादित करें।
    2. अधिकतम प्रजनन क्षमता के लिए, निम्नलिखित मापदंडों को मानकीकृत करें: कार्य दूरी, माप क्षेत्र, बिंदु घनत्व, फ्रेम दर, और परिवेश प्रकाश स्थितियां।
      1. ऊतक के संबंध में लेजर ले जाकर काम दूरी समायोजित करें। ब्याज के ऊतकों की ओर लेजर सिर में या बाहर ज़ूम करें। मापा मूल्य के लिए जांच करने के लिए, छवि सेटअपपर क्लिक करें । यहां, 12.0 सेमी पर सेट करें।
      2. इमेज सेटअपपर वांछित चौड़ाई और ऊंचाई दर्ज करके माप क्षेत्र को मानकीकृत करें। डिजाइन फ्लैप 3 सेमी x 6 सेमी के उपाय करता है। इस माप के लिए, कुछ अतिरिक्त स्थान के लिए 4.0 सेमी की चौड़ाई और 7.0 सेमी की ऊंचाई का चयन करें।
      3. प्वाइंट डेंसिटी को इमेज सेटअपमें उच्च के रूप में सेट करें। उच्च, मध्यम और निम्न तीन विकल्प हैं।
    3. इमेज कैप्चर सेटअप पर, रिकॉर्डिंग के लिए फ्रेम रेट (10 इमेज/एस) और रिकॉर्डिंग की अवधि (1 मिनट) का चयन करें।
      नोट: सर्जरी कक्ष में एक ही परिवेश प्रकाश की स्थिति है, जबकि संचालन या मूल्यांकन प्रदर्शन ।
    4. रिकॉर्डिंग शुरू करने के लिए रिकॉर्ड बटन पर क्लिक करें। सेटअप पैनल को रिकॉर्डिंग पैनल द्वारा प्रतिस्थापित किया गया है। डेटा स्वचालित रूप से सहेजा जाता है। आगे की तुलना को सक्षम करने के लिए प्रक्रिया के दौरान स्नैपशॉट लें।
      नोट: दृश्य में सुधार के लिए परफ्यूजन स्केल को बदला जा सकता है (क्लिक टूल्स । फिल्टर और रंग तराजू । परफ्यूजन स्केल । मैनुअल 0 - 150),लेकिन मापा परफ्यूजन मूल्य अप्रभावित होंगे। रिकॉर्डिंग से पहले और बाद में, उनके भीतर परफ्यूजन को मापने के लिए ब्याज के विभिन्न क्षेत्र (आरओआई) बनाए जा सकते हैं। यहां, हमने अभ्यास फ्लैप (3 सेमी x 6 सेमी) के क्षेत्र का मूल्यांकन किया।
  5. अस्तित्व और परिगलन क्षेत्रों को मापने के लिए इमेजजे सॉफ्टवेयर का उपयोग करें।
    1. फ्लैप के किनारे एक शासक का पता लगाएं और फिर फ्लैप अस्तित्व क्षेत्र के स्थूल माप के लिए नियंत्रण चित्र लें।
    2. चित्रों का मूल्यांकन करने के लिए, इमेजजे यूजर इंटरफेस खोलें। फ़ाइल पर क्लिक करें और मापा जा करने के लिए छवि खोलें।
    3. टूलबॉक्स पर सीधी रेखा का चयन करें और शासक के 1 सेमी से अधिक एक सीधी रेखा खींचें। विश्लेषण पर क्लिक करें । स्केल सेट करें और ज्ञात दूरी के लिए टेक्स्ट बॉक्स में 1 सेमी के मूल्य को पेश करें।
    4. बहुभुज चयन उपकरण पर क्लिक करें और व्यवहार्य क्षेत्र की गणना करने के लिए फ्लैप पर बहुभुज लाइनों को आकर्षित करें। अंततः, विश्लेषण पर क्लिक करें क्षेत्र मूल्य प्राप्त करने के लिए उपाय।
  6. सर्जिकल क्षेत्र के आत्म-विकृति को रोकने के लिए आवास से पहले जानवर पर एक पश्चात ड्रेसिंग रखें। प्रक्रियाओं के बाद, जानवरों को व्यक्तिगत रूप से पिंजरों में रखे जाते हैं, तापमान नियंत्रण वाले कमरे में (22 डिग्री सेल्सियस से 25 डिग्री सेल्सियस) ।

4. पश्चात मूल्यांकन और ऊतक नमूना

  1. इस प्रोटोकॉल (चरण 1.2 और 1.3) में वर्णित एक ही चरणों का पालन करके फ्लैप मूल्यांकन और ऊतक नमूने के लिए 7 पश्चात दिनों में चूहे को एनेस्थेटकरेंस करें। अंगूठे चुटकी के जवाब की कमी से संज्ञाहरण की गहराई के लिए जांच करें।
  2. फ्लैप अस्तित्व और परिगलन क्षेत्रों के स्थूल माप को सक्षम करने के लिए सर्जिकल क्षेत्र की तस्वीर। प्रोटोकॉल (चरण 3.5) में पहले बताए गए इंट्राऑपरेटिव मूल्यांकन के समान चरणों के बाद पश्चात स्थूल माप बनाएं।
    नोट: व्यवहार्य क्षेत्र (सेमी2में मापा) परिसीमन फ्लैप पर लाइनों को खींचकर बहुभुज चयन उपकरण का उपयोग करते समय ध्यान दें। व्यवहार्य क्षेत्र के प्रतिशत की गणना (व्यवहार्य क्षेत्र के सेमी2/कुल फ्लैप क्षेत्र के सेमी2) × 100 के रूप में की जा सकती है।
  3. परफ्यूजन मतभेदों की कल्पना और मात्रा निर्धारित करने के लिए एलसीए तकनीक (चरण 3.4) का उपयोग करके फ्लैप के माइक्रोसर्कुलेशन का आकलन करें
  4. स्थूल विश्लेषण के बाद, 4/0 टांके को हटा दें और पारगमन-समय अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके संवहनी पेडिकल रक्त प्रवाह का पुनर्मूल्यांकन करने के लिए फ्लैप को बढ़ाएं।
  5. 1.5 सेमी x 6 सेमी के दो भागों में फ्लैप को विभाजित करके टिश्यू सैंपलिंग करें।
    1. आगे हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के लिए कमरे के तापमान पर 4% पैराफॉर्मलडिहाइड के साथ एक बायोप्सी कंटेनर में एक भाग विसर्जित करें।
    2. ऊतक के दूसरे हिस्से को क्रायोप्रिजर्वेशन ट्यूब में पेश करें, इसे तरल नाइट्रोजन में विसर्जित करें और फिर, भविष्य के आणविक विश्लेषणों के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित करके ट्यूब को क्रायोसंरक्षित करें।
  6. नैतिक समिति की सिफारिशों के अनुसार 2 एम केसीएल/किलो के एक तेजी से इंट्राकार्डियक इंजेक्शन का उपयोग कर सामान्य साँस लेना संज्ञाहरण संज्ञाहरण के तहत चूहे को इच्छामृत्यु दें ।

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Representative Results

माइक्रोसर्जिकल एनास्टोमूसा के निर्माण के तुरंत बाद, हमने साहित्य8में अनुशंसित न्यूनतम प्रवाहों की तुलना में उच्च रक्त प्रवाह की मात्रा प्राप्त की । इस प्रकार, सर्जरी(चित्रा 1)के 1 सप्ताह बाद सभी माइक्रोसर्जिकल एनास्टोमूसा पेटेंट थे।

Figure 1
चित्रा 1: ट्रांजिट-टाइम अल्ट्रासाउंड रक्त प्रवाह मूल्यांकन। (क)रक्त प्रवाह का आकलन करने के लिए माइक्रोसर्जिकल प्रवाह जांच की स्थिति। (ख)फ्लैप पेडिकल के एनेस्टोमोस किए गए जहाजों का रक्त प्रवाह पैटर्न और मात्राकरण प्राप्त किया गया है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

इस्कीमिक अपमान के दौरान रक्त प्रवाह के माइक्रोकॉन्ट्रोक्रमिक अभाव का अवलोकन एलसीए तकनीक के साथ संभव था, जिसमें फ्लैप रिपरफ्यूजन के दौरान तत्काल हाइपर परफ्यूजन शामिल था, और, पेरिऑपरेटिव रूप से, कम परफ्यूजन वाले विभिन्न क्षेत्र और पश्चात फ्लैप नेक्रोसिस का एक उच्च जोखिम जो वास्तव में अध्ययन के अंत के 7 दिनों बाद कायाल किया गया था(चित्रा 2)।

Figure 2
चित्रा 2: लेजर स्पेक्टल कंट्रास्ट विश्लेषण प्रौद्योगिकी। (A)शारीरिक स्थिति में माइक्रोएंटिक्टिरी टिश्यू ब्लड परफ्यूजन का दृश्य। (ख)इस्केमिया के दौरान माइक्रोइंपॉर्टरी टिश्यू ब्लड परफ्यूजन का विजुअलाइजेशन (C)रिपरफ्यूजन के तुरंत बाद माइक्रोइंपॉर्टरी टिश्यू ब्लड परफ्यूजन का विजुअलाइजेशन । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

इस्केमिया के 8 एच और उसके बाद रिपरफ्यूजन के बाद फ्लैप सर्वाइवल एरिया 40% के आसपास था। पहले प्रकाशित परिणाम9 सांख्यिकीय महत्वपूर्ण मतभेद दिखाया जब इस मॉडल फ्लैप के साथ तुलना की थी, जहां कोई इस्कीमिक अपमान दिया गया था ।

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Discussion

माइक्रोसर्जिकल मुक्त ऊतक हस्तांतरण बड़े दोषों के पुनर्निर्माण के लिए पसंद की विधि बन गए हैं। इसकेमिया की अवधि ऐसे मुक्त ऊतक स्थानान्तरण के दौरान होती है। जब यह अवधि ऊतक की सहिष्णुता से अधिक होती है, तो I/R चोट अभ्यास मुक्त फ्लैप9की विफलता का कारण बन सकती है । पुनर्निर्माण माइक्रोसर्जरी में I/R चोट का अध्ययन करने के लिए लागत प्रभावी और ट्रांसलेशनल प्रीक्लिनिकल मॉडल विकसित करने की पद्धति का विवरण इस रोगोफिजियोलॉजिकल प्रक्रिया का प्रतिकार करने के लिए विभिन्न यौगिकों के अध्ययन का नेतृत्व करने में मदद कर सकता है ।

वर्णित पशु मॉडल में, संवहनी लिगेचर रखे जाने और मुफ्त फ्लैप उठाए जाने के बाद, कोई हिंदअंग रक्त प्रवाह समझौते नोट नहीं किए गए थे, न ही दर्द या लंगड़ा। जैसा कि कोच्चि एट अल10 ने बताया, हमारे मॉडल ने इंट्रामस्कुलर नेटवर्क के माध्यम से तीन जमानत मार्गों को भी छोड़ दिया।

मुफ्त फ्लैप की निगरानी प्रमुख महत्व11का है, क्योंकि निस्तारण इस्केमिया शुरुआत और इसकी नैदानिक मान्यता के बीच की अवधि से विपरीत संबंधित है। इस उद्देश्य के लिए, मुफ्त फ्लैप का इंट्रा-और पश्चात का अध्ययन किया जाना चाहिए।

इंट्राऑपरेटिव रूप से, व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला खाली और रिफिल परीक्षण या ध्वनिक डॉप्लर पहचान को सक्षम करता है लेकिन एनास्टोमोसिस12के माध्यम से प्रवाह उपस्थिति या अनुपस्थिति की मात्रा निर्धारित नहीं करता है। इस कारण से, हमने ट्रांजिट-टाइम अल्ट्रासाउंड तकनीक का उपयोग किया, एक उपन्यास विधि जो सर्जनों को माइक्रोसर्जिकल एनास्टोमूसा13के रक्त प्रवाह की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति देती है। हमारे अध्ययन में, सभी माइक्रोसर्जिकल एनास्टोमूसा 8 घंटे के इस्कीमिक अपमान के साथ-साथ अध्ययन के अंत में पेटेंट थे। माइक्रोसर्जिकल एनास्टोमूसा के निर्माण के तुरंत बाद, हमने साहित्य8में अनुशंसित न्यूनतम की तुलना में उच्च रक्त प्रवाह की मात्रा को नोट किया। यह अध्ययन के अंत में अच्छा पेडिकल perfusion की भविष्यवाणी की, प्रदर्शन है कि परिणाम microsurgical तकनीक से प्रभावित नहीं थे बल्कि घटनाओं के I/R चोट झरना से । हालांकि, यह तकनीक सीमाओं से मुक्त नहीं है। विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए, माइक्रोसर्जिकल जांच पोत के विमान के लिए तटस्थ आयोजित किया जाना चाहिए, इसे खींच या किसी भी तनाव पैदा नहीं । एक उचित संकेत प्राप्त करने के लिए एक अच्छा ध्वनिक युग्मन की आवश्यकता होती है, जिसे अल्ट्रासोनिक जेल या खारा का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है। उपकरण द्वारा प्रदान किया गया एक उच्च गुणवत्ता वाला युग्मन संकेत, माप के दौरान विचार करने के लिए एक महत्वपूर्ण पैरामीटर है।

हमने LASCA का उपयोग किया है, जिसे लेजर स्पेक्टल कंट्रास्ट इमेजिंग या लेजर स्पेक्टल इमेजिंग, पश्चात14के रूप में भी जाना जाता है। यह तकनीक यहां सत्यापित के रूप में मुक्त फ्लैप के भीतर प्रवाह के अर्ध-मात्रात्मक वास्तविक समय मानचित्रण के लिए एक मूल्यवान तकनीक का प्रतिनिधित्व करती है। सीमाओं में से एक यह है कि परिणाम मनमाने ढंग से इकाइयों में प्रदान किए जाते है और सीधे वास्तविक प्रवाह मूल्यों से संबंधित नहीं है । इस अर्थ में, इस सहसंबंध को मान्य करने के लिए आगे अनुसंधान की आवश्यकता है। लेजर डॉप्लर फ्लोमेट्री का उपयोग आमतौर पर किया जाता है लेकिन इस तथ्य से सीमित होता है कि यह केवल फ्लैप में एक बिंदु में परफ्यूजन का उपाय करता है, जबकि लाससीए फ्लैप15के भीतर त्वचा परफ्यूजन में क्षेत्रीय परिवर्तनों का पता लगाने की अनुमति देता है। इसके अलावा, हाल ही में एक अध्ययन16 ने संकेत दिया कि LASCA पश्चात फ्लैप परिगलन के उच्च जोखिम पर क्षेत्रों की भविष्यवाणी कर सकता है । हमारे परिणाम बताते हैं कि एलसीए मुफ्त फ्लैप की पेरी और पश्चात निगरानी के लिए एक आशाजनक तकनीक है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

अनुसंधान परियोजना जेसुस Usón Minimally इनवेसिव सर्जरी सेंटर (CCMIJU), आईसीटी नांबायोसिस का हिस्सा में किया गया था । अध्ययन निम्नलिखित नानबायोसिस इकाइयों से सहायता के साथ किया गया था: U21, प्रयोगात्मक ऑपरेटिंग रूम; U22, पशु आवास; और U14, सेल थेरेपी। इस काम को आईएससीआईआई परियोजना PI16/02164 द्वारा समर्थित किया गया था। अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह और विश्लेषण, प्रकाशित करने के निर्णय, या पांडुलिपि तैयार करने में funder की कोई भूमिका नहीं थी। आंकड़ों को तैयार करने और वैज्ञानिक ग्रंथसूची का समर्थन करने के लिए आंकड़ों को तैयार करने और फर्नांडा कैरिज़ोसा के लिए मारिया पेरेज को विशेष धन्यवाद दिया जाता है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
AureFlo Unit Transonic (Ithaca, USA) N/A Transit-time ultrasound flowmeter equipment
Commbined Basic Hand- and Reconstructive Surgery Set (round handle) S&T AG (Neuhausen, Switzerland) RHR-SET. Art.No.00795 Set of microsurgical instruments
FLOW-i Maquet Critical Care AB (Solna, Sweeden) N/A Anesthesia Delivery System
Micro clamps ABB-1 S&T AG (Neuhausen, Switzerland) 00408V Double microvascular clamp with frame
Micro clamps ABB-11 S&T AG (Neuhausen, Switzerland) 00414V Double microvascular clamp without frame
Micro clamps B-1 S&T AG (Neuhausen, Switzerland) 00396V Sigle microvascular clamp
Nylon suture 10/0 Laboratorio Aragó (Barcelona, Spain) 19921 Microsurgical suture
OPMI Pentero 800 Carl Zeiss AG (Oberkochen, Germany) N/A Surgical microscope
PeriCam PSI System Perimed AB (Järfälla, Sweden) N/A Laser speckle contrast analysis equipment
Philips Intellivue MX450 Philips Medizin Systeme (Böblingen, Germany) N/A Monitoring system
Protector posoperatorio para roedores Fundación Centro de Cirugía de Mínima Invasión Jesús Usón (Cáceres, Spain) P201400272 Postoperative protector for rodents

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References

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