השתלת עור Murine

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

השתלה אלוגנאית העור הוא מודל סטנדרטי לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. זה וידאו המאמר מספק הדרכה ויזואלית של כל צעד מעורב בביצוע BALB/c--> השתלת C57BL / 6 העור.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

בתור אחד המודלים המחמירים ביותר והפחות מאתגר מבחינה טכנית, השתלת עור היא שיטה רגילה לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. מטרת מאמר-video זה היא לספק את הצופה עם הפגנה צעד אחר צעד ויזואלית של השתלת עור באמצעות מודל העכבר. הפרוטוקול מחולק 5 מרכיבים עיקריים: 1) התורם קצירת העור; 2) הכנת הנמען להשתלה; 3) להשתלת עור; 4) הסרת התחבושת דחיית שתל ניטור: 5) עצות מועילות. בקיאים פעם, את ההליך עצמו צריך לקחת <10 דקות לבצע.

Protocol

לפני תחילת הניסוי:

  • לקבל אישור IACUC
  • לעקר כלי ניתוח ו-Q-טיפים

I. רקמות התורם קציר

  1. להרדים עכבר התורם (בהתאם SOP של המוסד)
  2. שיער רטוב חזרה מהבסיס של האוזן עם אלכוהול
  3. התורם קציר העור על ידי חיתוך האוזן את בבסיס
  4. מניחים בצלחת רקמה על הקרח
  5. האוזן פיצול: הצדדים קמצוץ הגחון ועל הגב של רקמת בבסיס של האוזן עם עכברוש שיניים מלקחיים, משוך בעדינות בנפרד רקמות; רקמות לצוף הגב, משטח פנימי למטה, PBS על קרח; להשליך דש הגחון collagenous

השנייה. הכן מקבל עבור להשתלות

  1. עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור
  2. ניהול כאבים להקלה על כאב לאחר הניתוח (כלומר 0.05-0.1 מ"ג / g ip Bupernex)
  3. המקום העכבר במצב לרוחב
  4. בצע קמצוץ הבוהן כדי להבטיח חיים הוא מסומם מספיק
  5. שיער רטוב עם אלכוהול לגלח החזה
  6. נגב אזור נקי עם ספוגית אלכוהול

ג. עור להשתלות

  1. ודא ~ 1 ס"מ חתך: עור אוהל עם עכברוש שיניים מלקחיים ולחתוך ~ 0.25-0.5 ס"מ מתחת מלקחיים
  2. הסרת העור תורם PBS, במקום על גבי המיטה שתל (עם המשטח הפנימי של העור אוזן מול המיטה שתל), ולהסיר PBS עם עודף סטרילי Q-קצה
  3. בזהירות לחתוך עור עודף תורם כל כך השתלת שנמצאת ביובש בתוך המיטה שתל (מוודא קצוות השתל אינם מכורבלת מתחת שתל שאינו הנגאובר על העור גזע של הנמען)
  4. גלישת הנמען תחבושת סטרילית (עם קטע שאינו דבק גזה הניח על שתל העור)
  5. ודא תחבושת כי הוא לא חזק מדי (להעריך נשימה של החיה) והזרועות, כי הם ניידים בחופשיות
  6. תחבושת Secure עם תפר 2-0 יחיד משי
  7. חיה מקום בכלוב נקי (תחת מנורת חימום עד שהחיה התאוששה מספיק מן ההרדמה)
  8. צג הנמען 1-2/day סימנים של מצוקה ולנהל משכך כאבים לפי הצורך להקלה על הכאב

IV. הסרת תחבושת (6-7 ימים לאחר ההשתלה)

  1. עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור
  2. גזור להסיר תפר משי
  3. בעזרת מספריים סוף בוטה, לחתוך בזהירות באמצעות תחבושת (כדי לוודא שלא לשבש את השתל) בעדינות להסיר
  4. חזור העכבר לכלוב נקי
  5. בדוק ~ שתל 8 שעות לאחר הסרת התחבושת סימנים של scabbing או התכווצות. אם כיום, שתל עשוי נכשלו vascularize ואת צריכה להיחשב כשל טכני.
  6. מעקב יומי אחר סימנים של דחייה (בדרך כלל מגדירים נמק ~ 80% של רקמת התורם)
  7. השתלות עור allogeneic בדרך כלל דוחים בין D8-12 מנותחות

ו 'עצות שימושיות

  1. מסיק רקמות התורם קרוב לבסיס של האוזן יהיה: 1) למקסם את גודל השתל, ו 2) לספק הסככה הגחון אחיד שיאפשר פיצול
  2. השתמש תמיד סכין גילוח חדש גילוח הנמען
  3. אם כאבים תינתן ip, לנהל הליך לפני ההשתלה כדי לצמצם מנותחות טיפול (למזער סיכוי לשבש את השתל)
  4. במידת האפשר, להסיר את הכפפות לפני החלת את התחבושת. כפפות נוטים לתקוע את התחבושת לסבך את הבקשה
  5. הנחת תפר בודד בסוף תחבושת יהיה למזער מוקדמת הסרת
  6. לעטוף כמו תחבושת הדוקה כפי שמותר להעריך נשימה לפני הנחת תפר. אם תחבושת הדוקה מדי, בעלי חיים יפסיק לנשום. אם תחבושת רופפת מדי, בעלי חיים תסיר אותו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

כפי שמודגם במאמר-video זה, המודל השתלת עור היא שיטה מהירה וקלה לניטור allogeneic T התגובות התא. השתלה אלוגנאית העור יש מגוון רחב של יישומים נוצל עד assay את היעילות של מגוון רחב של סוכני מדכאות חיסון ואינדוקציה סובלנות פרוטוקולים, וכן כדי לחקור את ההשפעות הביולוגיות של נוגדנים חסימה שונים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

NIH אימונולוגיה הדרכה גרנט T32 AI 60,573 (KRG) ו-NIH מענק GM 41,514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics