Murin Deri nakli

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Allojenik deri nakli ana T hücre yanıtları donör antijenleri MHC-birbirinden farklı tahlil için bir standart model. Bu video-makale BALB/c--> C57BL / 6 deri nakli yapmak dahil her adım görsel bir öğretici sağlar.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Biri olarak en sıkı ve en teknik açıdan zor modelleri, deri nakli ana T hücre yanıtları donör antijenleri MHC-birbirinden farklı tahlil için standart bir yöntem. Bu video makalenin amacı, fare modeli kullanarak deri nakli adım adım görsel gösteri ile izleyici sağlamaktır. 2) nakli için alıcı hazırlanıyor; 3) deri nakli, 4) bandaj kaldırılması ve greft reddi izlenmesi; 5) yararlı ipuçları 1) hasat donör cilt: 5 ana bileşenleri protokol ayrılmıştır. Bir kez usta, prosedür kendisi gerçekleştirmek için <10 dakika sürer.

Protocol

Deney başlamadan önce:

  • IACUC onayını alın
  • Cerrahi aletler ve Q-ipuçları sterilize

I. Hasat Donör Doku

  1. Donör fare Euthanize (kurumun SOP ile uygun)
  2. Islak saç geri alkol ile kulak baz
  3. Hasat bağış deri üssünde kulak keserek
  4. Buz üzerinde plaka koyun doku
  5. Split kulak: sıçan diş forseps ile kulağının dibinde doku tutam ventral ve dorsal taraf; nazikçe doku ayrı çekin; şamandıra dorsal doku, iç yüzeyi aşağı, PBS içinde buz üzerinde; kollajenöz ventral flep atın

II. Alıcı nakli için hazırlayın

  1. Anestezisi fare Onaylanan prosedür kullanarak
  2. Post-op ağrı kesici (yani 0.05-0.1 mg / g Bupernex ip) analjezik Yönetici
  3. Lateral pozisyonda yerleştirin fare
  4. Hayvan yeterli sedasyon sağlamak için ayak tutam yapın
  5. Islak saç ve alkol ile toraks tıraş
  6. Temiz alan alkollü bez ile silin

III. Deri Nakli

  1. Sıçan dişli forseps ile çadır cilt ve forseps aşağıdaki ~ 0.25-0.5 cm kesme: ~ 1 cm'lik kesi olun
  2. PBS bağış deri grefti yatak tepesinde yer (greft yatak karşı karşıya kulak cilt iç yüzeyi ile birlikte) çıkarın ve steril Q-tip aşırı PBS kaldırmak
  3. Bu nakli (altında greft kenarları kıvrılmış ve greft alıcının gövde cilde akşamdan değildir olduğunu emin olun) greft yatak içinde kesin bir dille yalanlar o kadar dikkatlice uzakta fazla bağış deri Döşeme
  4. Steril bandaj sarın alıcı (deri grefti üzerine yerleştirilen yapışkanlı olmayan gazlı segment)
  5. Bu bandaj (hayvan nefes değerlendirmek) çok sıkı değildir sağlanması ve bu silah serbestçe cep
  6. Güvenli bandaj tek bir 2-0 ipek sütür ile
  7. Temiz bir kafes yerleştirin hayvan (hayvan kadar ısıtma lambası altında yeterince anestezi kurtarıldı)
  8. Monitör alıcı sıkıntı belirtileri ve ağrı kesici için gerekli gibi analjezik yönetmek için 1-2/day

IV. Bandaj Kaldırma (6-7 gün transplantasyon sonrası)

  1. Anestezisi fare Onaylanan prosedür kullanarak
  2. Ipek sütür kesin ve kaldırma
  3. Bandaj (greft bozmaya emin) ile dikkatlice kesilerek künt sonunda makas, kullanma ve hafifçe kaldırın
  4. Temiz kafes fare dön
  5. Kabuklanma ya da daralma belirtileri için bandaj çıkarıldıktan sonra greft ~ 8 saat kontrol edin. Varsa, greft vascularize başarısız olmuş ve teknik bir başarısızlık olarak kabul edilmelidir.
  6. Reddedilme işaretleri (genellikle ~% 80 nekroz donör doku olarak tanımlanan) günlük Monitör
  7. Allojenik deri nakli genellikle d8-12 post-op arasında reddedecektir

V. Yardımcı İpuçları

  1. Kulak tabanına yakın donör doku Hasat: 1) greft boyutu en üst düzeye çıkarmak, ve 2) bölme kolaylaştırmak dengesiz bir ventral çıkıntı
  2. Her zaman alıcı tıraş için yeni bir jilet kullanın
  3. Analjezik ip verilecek ise, (greft kesintiye şansını en aza indirmek) post-op kullanımını en aza indirmek için prosedür nakli için önce yönetmek
  4. Mümkünse, bandaj uygulamadan önce eldiven çıkarın. Eldiven bandaj sopa ve komplike uygulama eğilimindedir
  5. Bandaj sonunda tek bir sütür yerleştirilmesi erken kaldırılması en aza indirecektir.
  6. Sıkı izin ve dikiş yerleştirerek ÖNCE nefes değerlendirmek bandaj sarın. Bandaj çok sıkı ise, hayvan solunum durur. Bandaj çok gevşek ise, hayvan kaldıracak.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu video-makale gösterdiği gibi, deri nakli modeli allojenik T hücre yanıtları izlenmesi için hızlı ve kolay bir yöntemdir. Allojenik deri nakli geniş bir uygulama yelpazesine sahiptir ve tahlil için immünosupresif ajanlar ve tolerans protokolleri yanı sıra araştırmak için çeşitli engelleme antikorların biyolojik etkileri çeşitli verimlilik kullanılmıştır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

NIH İmmünoloji Eğitim Hibe T32 AI 60.573 (KBY) ve NIH hibe GM 41.514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics