Murina hudtransplantation

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Allogen hud transplantation är en standardmodell till T-analysen värdcellen svar på MHC-disparata givare antigener. Denna video-artikeln ger en visuell handledning för varje steg involverade i att utföra en BALB/c--> C57BL / 6 hudtransplantation.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Som en av de hårdaste och minst tekniskt utmanande modeller är hud transplantation en standardmetod till T-analysen värdcellen svar på MHC-olika givare antigener. Syftet med denna video-artikel är att ge betraktaren med en steg-för-steg visuell demonstration av hud transplantation med musen modellen. Protokollet är uppdelat i fem delar: 1) skörd givare huden, 2) förbereda mottagaren för transplantation, 3) hudtransplantation, 4) bandage borttagning och övervakning avstötning, 5) tips. När skickliga, bör förfarandet själv ta <10 min att utföra.

Protocol

Före inledandet av experiment:

  • Skaffa IACUC godkännande
  • Sterilisera kirurgiska instrument och Q-tips

I. Harvest Donor Tissue

  1. Euthanize givare mus (i enlighet med institutionens SOP)
  2. Vått hår tillbaka från basen på örat med alkohol
  3. Harvest givare huden genom att skära örat av vid basen
  4. Placera vävnad i platta på is
  5. Split öra: nypa ventrala och dorsala sidor av vävnaden vid basen av örat med rått-tanden tång, dra försiktigt isär vävnaden, flyta rygg vävnad, inre yta ner i PBS på is, släng kollagen ventrala flik

II. Förbered Mottagare för transplantation

  1. Bedöva mus med godkända proceduren
  2. Administrera smärtstillande för postoperativa smärtlindring (dvs. 0,05-0,1 mg / g Bupernex IP)
  3. Placera musen i lateral position
  4. Utför tå nypa för att se djuret är tillräckligt sövd
  5. Blöt håret med alkohol och rakar bröstkorgen
  6. Torka området rent med alkohol kompress

III. Hudtransplantation

  1. Gör ~ 1 cm snitt: tält huden med råtta-tand pincett och skär ~ 0,25-0,5 cm under tång
  2. Ta bort donator hud från PBS, placera ovanpå transplantat sängen (med insidan av örat huden mot graft säng), och ta bort överflödigt PBS med sterila tops
  3. Trimma försiktigt bort överflödigt donatorn huden så att transplantera ligger blankt i transplantat säng (se till att transplantat kanterna inte är böjda under och att transplantat inte baksmälla på mottagarens bål hud)
  4. Wrap mottagaren i sterilt förband (med den icke-vidhäftande kompress segmentet placeras över hudtransplantation)
  5. Se till att bandaget inte sitter för hårt (bedöma djurets andning) och att armarna är fritt rörliga
  6. Säkra bandaget med en 2-0 siden sutur
  7. Placera djur i ren bur (under uppvärmning lampan förrän djuret har tillräckligt återhämtat sig från narkos)
  8. Övervaka mottagaren 1-2/day efter tecken på stress och administrera smärtstillande som behövs för smärtlindring

IV. Bandage borttagning (6-7 dagar efter transplantationen)

  1. Bedöva mus med godkända proceduren
  2. Klipp ut och ta bort silke sutur
  3. Använda trubbiga änden sax, försiktigt skära genom bandage (se till att inte störa graft) och ta försiktigt bort
  4. Återgå musen för att rengöra buren
  5. Kontrollera graft ~ 8 timmar efter bandage bort efter tecken på krustor eller kontraktion. Om det finns kan transplantat har misslyckats med att vascularize och bör betraktas som ett tekniskt fel.
  6. Övervaka dagligen för tecken på avstötning (vanligtvis definierat som ~ 80% nekros av givare vävnad)
  7. Allogen hud transplantationer vanligtvis avvisa mellan D8-12 postoperativa

V. Nyttiga tips

  1. Skörd givare vävnad nära basen på örat kommer att: 1) maximera transplantat storlek, och 2) ger en ojämn ventrala överhäng som kommer att underlätta delning
  2. Använd alltid en ny rakblad för rakning mottagare
  3. Om smärtstillande ska ges ip, administrera före transplantationen för att minimera postoperativa hantering (minimera risken för att störa transplantat)
  4. Om möjligt, ta bort handskarna innan bandaget. Handskar tenderar att hålla bandaget och komplicera tillämpningen
  5. Placera en enda sutur vid bandaget slutet minimerar förtida borttagande
  6. Vira bandaget så hårt tillåtet och bedöma andas innan du placerar sutur. Om bandaget är för hårt, kommer djuret slutar andas. Om bandaget är för lös, kommer djur ta bort det.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Såsom visats i denna video-artikeln är hudtransplantation modell en snabb och enkel metod för att övervaka allogen T-cell svar. Allogen hud transplantation har ett brett användningsområde och har utnyttjats till analys effektiviteten i en mängd olika immunsuppressiva medel och tolerans protokoll induktion, samt att undersöka de biologiska effekterna av olika blockering antikroppar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

NIH immunologi utbildningsstipendium T32 AI 60.573 (KRG) och NIH ge GM 41.514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics