Murine 피부 이식

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Allogeneic 피부 이식은 MHC - 서로 다른 기증자 항원을 분석 호스트 T 세포 응답에 대한 표준 모델입니다. 이 비디오 문서 BALB/c--> C57BL / 6 피부 이식을 수행에 관련된 각 단계의 영상 자습서를 제공합니다.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

가장 엄격한 최소 기술적으로 도전적인 모델 중 하나로서, 피부 이식은 MHC - 서로 다른 기증자 항원을 분석 호스트 T 세포 응답에 대한 표준 방법입니다. 이 비디오 문서의 목적은 마우스 모델을 사용 피부 이식의 단계별 영상 데모로 뷰어를 제공하는 것입니다. 2) 이식에 대한 수신자를 준비, 3) 피부 이식, 4) 붕대 제거 및 모니터링 이식 거부, 5) 유용한 힌트 1) 수확 기증자 피부 : 프로토콜은 5 주요 구성 요소로 나누어져 있습니다. 일단 실력, 절차 자체가 수행하는 <10 분 정도 소요됩니다.

Protocol

이전 실험 개시하기 :

  • IACUC 승인을 받아야
  • 수술기구 및 Q - 도움말을 소독

I. 하베스트 기증자 조직

  1. (기관의 SOP에 따라) 기증자 마우스를 안락사
  2. 알코올 (内耳)의 기지에서 젖은 머리 뒤로
  3. 기지에서 귀를 잘라 수확하여 기증자 피부
  4. 얼음 접시에 넣어 조직
  5. 분할 이어 : 쥐 - 치아 포셉과 (内耳)의 기지로 조직 핀치 복부와 지느러미 양측, 부드럽게 조직을 분열 시키려고, 부동 등의 조직, 내부 표면 아래, PBS 얼음 속에서, collagenous 복부 플랩를 버리고

II. 이식받는 준비

  1. 마취 마우스 승인 절차를 사용
  2. 수술 통증 (예 : 0.05-0.1 MG / G Bupernex의 IP)에 대한 진통제 투여
  3. 가로 위치에 플레이스 마우스
  4. 동물 충분히 진정되도록 발끝 핀치를 수행
  5. 젖은 알코올로 머리와 흉부를 면도
  6. 알코올 면봉과 함께 깨끗한 지역을 닦아

III. 피부 이식

  1. 쥐 - 치아 포셉와 함께 텐트 피부 포셉 아래 ~ 0.25-0.5 cm 잘라 : ~ 1cm 절개를 확인
  2. PBS에서 기증자 피부 이식 침대 위에 자리 (그래프트 침대에 직면하고 귀 피부의 내부 표면)를 제거하고, 멸균 면봉을 넣었와 여분의 PBS를 제거
  3. 그 이식 (이식 가장자리가 아래에 모습을 드러냅니다하지 그 이식받는 사람의 트렁크 피부에 숙취가없는 것을 확인하고) 이식 침대 이내에 단호하게 자리잡고 있으므로 신중하게 거리를 초과 기증자의 피부를 트림
  4. 멸균 붕대로 감싸받는 사람 (피부 이식을 통해 위치가 아닌 접착 거즈 세그먼트 포함)
  5. 그 붕대이 (동물의 호흡을 평가) 너무 꽉되지 않도록하고 팔을 자유롭게 이동 아르
  6. 단일 2-0 실크 봉합사와 보안 붕대
  7. 깨끗한 새장에 플레이스 동물 (동물까지 가열 램프에 따라 충분히 마취로부터 복구되었습니다)
  8. 모니터받는 고통의 흔적을 1-2/day과 고통 구호를위한 필요에 따라 진통제 투여

IV. 붕대 제거 (6~7일 포스트 이식)

  1. 마취 마우스 승인 절차를 사용
  2. 실크 봉합사 컷 및 제거
  3. 신중하게 붕대 (그래프트를 방해하지 않도록 만들기)를 통해 컷 뭉툭한 끝 가위를 사용하여 부드럽게 제거
  4. 깨끗한 케이지 마우스로 돌아가기
  5. 폼 또는 수축의 흔적을 붕대 제거 후 이식 ~ 8 시간을 확인합니다. 있는 경우, 수술이 vascularize에 실패 할 수도 있습니다 및 기술 실패로 간주되어야합니다.
  6. 거절의 흔적 (보통 기증자의 조직 ~ 80 %의 괴사로 정의)에 대한 일일 모니터
  7. Allogeneic 피부 이식은 보통 D8 - 12 수술 사이 거부합니다

V. 유용한 힌트

  1. 가까이 귀에의 기본에 기증자의 조직을 것입니다 수확 : 1) 그래프트의 크기를 극대화하고, 2) 분할을 용이하게합니다 고르지 복부 오버행을 제공합니다
  2. 항상받는 조작에 대한 새 면도날을 사용하여
  3. 진통이 IP를 부여하는 경우 (그래프트을 방해의 가능성을 최소화) 수술 처리를 최소화하기 위해 절차를 이식하기 전에 관리
  4. 가능하다면, 붕대를 적용하기 전에 장갑을 제거합니다. 장갑은 붕대를 심어 응용 프로그램을 복잡하게하는 경향이
  5. 붕대 끝에 하나의 봉합사를 게재하면 조기 제거를 최소화합니다
  6. 꽉로 허용하고 봉합을 배치하기 전에 호흡을 평가로 바꿈 붕대. 붕대가 너무 꽉 경우, 동물은 호흡을 중지합니다. 붕대가 너무 느슨한 경우, 동물은 그것을 제거됩니다.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

본 동영상 문서에 시연, 피부 이식 모델 allogeneic T 세포 응답을 모니터링을위한 빠르고 쉬운 방법입니다. Allogeneic 피부 이식은 어플 리케이션의 광범하고 분석하는 immunosuppressive 대리인 및 내성 유도 프로토콜뿐만 아니라 조사를 위해 다양한 차단 항체의 생물 학적 효과의 다양한의 효율성을 활용하고 있습니다.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

NIH 면역학 교육 그랜트 T32 AI 60,573 (KRG)와 NIH 부여 GM 41,514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics