Murine huidtransplantatie

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Allogene huid transplantatie is een standaard model voor het testen van gastheer T-cel responsen aan MHC-ongelijksoortige donor antigenen. Deze video-artikel geeft een visuele handleiding van iedere stap die betrokken zijn bij het uitvoeren van een BALB/c--> C57BL / 6 huid transplantatie.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Als een van de strengste en minst technisch uitdagende modellen, huid transplantatie is een standaard methode voor het testen van gastheer T-cel responsen aan MHC-ongelijksoortige donor antigenen. Het doel van deze video-artikel is om de kijker te voorzien van een stap-voor-stap visuele demonstratie van de huid transplantatie met de muis model. Het protocol is onderverdeeld in vijf hoofdonderdelen: 1) het oogsten van donorhuid, 2) het opstellen ontvanger voor transplantatie; 3) huid transplantatie; 4) bandage verwijdering en het toezicht op afstoting van het transplantaat; 5) nuttige tips. Eenmaal bedreven, moet de procedure zelf te nemen <10 min. uit te voeren.

Protocol

Voorafgaand aan de start van het experiment:

  • Verkrijgen van goedkeuring IACUC
  • Steriliseer chirurgische instrumenten en Q-tips

I. Harvest donorweefsel

  1. Euthanaseren donor muis (in overeenstemming met SOP instelling)
  2. Natte haar terug uit het oor met alcohol
  3. Oogst donorhuid door te snijden oor af aan de basis
  4. Plaats weefsel in plaat op ijs
  5. Split oor: knijp ventrale en dorsale zijde van het weefsel op de basis van het oor met de rat-tand tang; voorzichtig uit elkaar te trekken weefsel; zweven dorsale weefsel, inwendig oppervlak naar beneden, in PBS op ijs en schenk collagene ventrale klep

II. Bereid ontvanger voor transplantatie

  1. Verdoven muis met behulp van goedgekeurde procedure
  2. Beheren pijnstillende voor post-op pijnbestrijding (dat wil zeggen 0,05-0,1 mg / g Bupernex ip)
  3. Plaats de muis in de laterale positie
  4. Voer teen knijpen om ervoor te zorgen dier is voldoende verdoofd
  5. Natte haren met alcohol en scheren thorax
  6. Veeg gebied schoon met alcoholdoekje

III. Skin Transplant

  1. Maak ~ 1 cm incisie: tent huid met rat-tand tang en snijd ~ 0,25-0,5 cm onder tang
  2. Verwijder de donorhuid van PBS, plaats bovenop graft bed (met interne oppervlak van het oor de huid naar graft bed), en verwijder overtollig PBS met een steriele Q-tip
  3. Voorzichtig weg trimmen overtollige donorhuid, zodat de transplantatie ligt vlak binnen de graft bed (zorg ervoor dat de graft kanten zijn gekruld onder en dat de transplantatie niet kater op stam ontvanger huid)
  4. Wikkel ontvanger in steriel verband (met de niet-klevende gaasje segment geplaatst over de huidtransplantatie)
  5. Zorg ervoor dat de bandage niet te strak wordt (te beoordelen dier ademen) en dat de armen zijn vrij mobiel
  6. Veilige bandage met een 2-0 zijden hechtdraad
  7. Plaats van dieren in een schone kooi (onder verhitting lamp tot dier is voldoende hersteld van anesthesie)
  8. Monitor ontvanger 1-2/day op tekenen van nood en beheren pijnstiller nodig is voor pijnbestrijding

IV. Bandage Removal (6-7 dagen na transplantatie)

  1. Verdoven muis met behulp van goedgekeurde procedure
  2. Knippen en verwijder zijden hechtdraad
  3. Met behulp van stompe uiteinde een schaar, knip voorzichtig door bandage (zorg ervoor dat niet te enten verstoren) en verwijder voorzichtig
  4. Keer terug muis te reinigen kooi
  5. Controleer graft ~ 8 uur na het verwijderen bandage op tekenen van korstvorming of inkrimping. Indien aanwezig, kan transplantaat niet hebben vascularize en moet worden beschouwd als een technische storing.
  6. Monitor dagelijks op tekenen van afwijzing (meestal gedefinieerd als ~ 80% necrose van de donor weefsel)
  7. Allogene huidtransplantaties zal meestal weigeren tussen d8-12 na de operatie

V. Handige tips

  1. Oogsten donorweefsel dicht bij de basis van het oor wil: 1) te maximaliseren ent grootte, en 2) zorgen voor een ongelijke ventrale overhang dat zal vergemakkelijken splitsen
  2. Gebruik altijd een nieuw scheermesje voor het scheren ontvanger
  3. Als pijnstiller wordt gegeven ip, alvorens toe te dienen aan de procedure transplantatie aan post-op het hanteren een minimum te beperken (minimaliseren kans op het verstoren van de graft)
  4. Indien mogelijk, verwijder handschoenen voor het aanbrengen van het verband. Handschoenen hebben de neiging om het verband stok en de toepassing bemoeilijken
  5. Het plaatsen van een enkele hechting aan het verband einde zal minimaliseren voortijdige verwijdering
  6. Wrap bandage zo strak als is toegestaan ​​en beoordelen van de ademhaling VOORDAT het plaatsen van hechtdraad. Als pleister te strak is, zal dier stoppen met ademen. Als bandage te los is, zal dier verwijderen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Zoals aangetoond in deze video-artikel, de huid transplantatie model is een snelle en eenvoudige methode voor de controle allogene T-cel responsen. Allogene huid transplantatie heeft een breed scala aan toepassingen en is gebruikt voor het testen van de efficiëntie van een verscheidenheid van immunosuppressiva en tolerantie-inductie-protocollen, evenals het onderzoeken van de biologische effecten van de verschillende blokkerende antilichamen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

NIH Immunologie Training Grant T32 AI 60.573 (KRG) en NIH subsidie ​​GM 41.514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics