Transplantation de peau murine

Biology

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Summary

La transplantation allogénique de la peau est un modèle standard d'analyse des réponses des cellules T à l'hôte antigènes du donneur MHC-disparates. Cette vidéo-article fournit un tutoriel visuelle de chaque étape à effectuer une greffe BALB/c--> C57BL / 6 peau.

Cite this Article

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Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

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Abstract

Comme l'un des modèles les plus strictes et moins difficile techniquement, la peau de transplantation est une méthode standard pour le dosage réponses de l'hôte de lymphocytes T aux antigènes MHC-donateurs disparates. Le but de cette vidéo article est de fournir au spectateur une démonstration étape par étape visuelle de la transplantation de peau en utilisant le modèle de la souris. Le protocole est divisé en cinq composantes principales: 1) la peau des donneurs de récolte; 2) la préparation de bénéficiaires pour la greffe; greffe de peau 3), 4) l'enlèvement bandage et le rejet du greffon suivi; 5) des conseils utiles. Une fois compétents, la procédure elle-même devrait prendre <10 min à effectuer.

Protocol

Avant le début de l'expérience:

  • Obtenir l'approbation du IACUC
  • Stériliser les instruments chirurgicaux et les Q-tips

Tissu I. Récolte des donateurs

  1. Euthanasier souris donneuse (en conformité avec SOP institution)
  2. Mouiller les cheveux en arrière de la base de l'oreille avec de l'alcool
  3. La peau des bailleurs de fonds récolte en coupant l'oreille à l'arrêt de base
  4. Placez le tissu de la plaque sur la glace
  5. L'oreille Split: pincez côtés ventral et dorsal de tissu à la base de l'oreille avec le rat-dent de forceps; tirez doucement en dehors des tissus; tissus flottent dorsale, surface interne vers le bas, dans le PBS sur la glace; jetez collagènes rabat ventral

II. Préparer Récipiendaire d'une transplantation

  1. La souris en utilisant une procédure approuvée Anesthetize
  2. Administrer analgésique pour soulager la douleur post-opératoire (c.-à 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex)
  3. Placez la souris en position latérale
  4. Effectuer pincement de l'orteil pour assurer des animaux est suffisamment sédation
  5. Mouiller les cheveux avec de l'alcool et raser le thorax
  6. Essuyez la zone propre avec tampon imbibé d'alcool

III. Greffe de peau

  1. Faire une incision ~ 1 cm: la peau tente avec le rat-dent de pince et couper ~ 0.25 à 0,5 cm en dessous des pinces
  2. Enlever la peau des bailleurs de fonds du CPE, place au sommet lit de greffe (avec une surface interne de la peau d'oreille face à lit de greffe), et enlever l'excédent avec du PBS stérile, Q-tip
  3. Soigneusement rogner la peau donateurs excès de telle sorte que la transplantation est platement sein lit de greffe (en s'assurant que les bords du greffon ne sont pas courbés sous et que la corruption ne fait pas la gueule de bois sur la peau du tronc destinataire)
  4. Bénéficiaires Envelopper dans un bandage stérile (avec le segment de gaze non-adhésif placé sur la greffe de peau)
  5. S'assurer que le bandage est trop serré (évaluer la respiration des animaux) et que les armes sont librement mobiles
  6. Bandage avec une seule suture de soie 2-0
  7. Placer dans des animaux en cage propre (sous la lampe de chauffage jusqu'au animal a suffisamment récupéré de l'anesthésie)
  8. Moniteur bénéficiaires 1-2/day les signes de détresse et d'administrer analgésique nécessaire pour soulager la douleur

IV. Retrait Bandage (6-7 jours post-transplantation)

  1. La souris en utilisant une procédure approuvée Anesthetize
  2. Couper et enlever suture de soie
  3. Avec des ciseaux extrémité émoussée, soigneusement découpé par un bandage (en veillant à ne pas perturber la greffe) et retirez délicatement
  4. Retour de la souris pour cage propre
  5. Vérifiez greffe de ~ 8 heures après l'enlèvement bandage pour des signes de croûtes ou de contraction. S'il est présent, la greffe peut avoir omis de vasculariser et doit être considéré comme un échec technique.
  6. Surveiller quotidiennement les signes de rejet (généralement définie comme une nécrose ~ 80% du tissu du donneur)
  7. Greffes de peau allogénique seront généralement rejettent entre d8-12 post-op

Conseils utiles V.

  1. Récolte tissu du donneur à proximité de la base de l'oreille va: 1) de maximiser la taille du greffon, et 2) fournir un surplomb inégale ventrale qui facilitera fractionnement
  2. Toujours utiliser une lame de rasoir neuve pour le rasage bénéficiaires
  3. Si antalgique doit être donnée ip, administrer la procédure avant la greffe afin de minimiser la manipulation post-op (minimiser les risques de perturber la greffe)
  4. Si possible, enlever les gants avant d'appliquer le bandage. Gants tendance à coller le pansement et compliquent l'application
  5. Placer une suture simple à la fin pansement sera de minimiser le retrait prématuré
  6. Enveloppez un bandage aussi serré que permise et évaluer la respiration Avant de placer de suture. Si le bandage est trop serré, animal arrêter de respirer. Si le bandage est trop lâche, animal sera le retirer.

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Discussion

Comme démontré dans cette vidéo l'article, le modèle de greffe de peau est une méthode rapide et facile pour le contrôle des lymphocytes T allogéniques réponses. La peau de transplantation allogénique a une large gamme d'applications et a été utilisée pour doser l'efficacité d'une variété d'agents immunosuppresseurs et les protocoles d'induction de tolérance, ainsi que pour étudier les effets biologiques des différents anticorps bloquants.

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Acknowledgements

NIH immunologie Subvention de formation T32 IA 60573 (ARK) et NIH GM 41514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

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