Overview
Nematoides podem ser propagados facilmente no laboratório - em parte porque hermafroditas podem se reproduzir por auto-fertilização. No entanto, cruzes genéticas e outros experimentos podem exigir um grande número de machos. Este vídeo descreve um método para enriquecer para c. elegans machos.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Singaravelu et al, Isolamento e Ativação In vitro de Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. Exp. (2011).
1. Enriquecimento da população masculina
- Dependendo da necessidade experimental, um grande número de machos pode ser obtido empregando uma das seguintes estratégias:
- grande população de machos do tipo selvagem pode ser obtida cruzando 5 machos do tipo selvagem e 1 hermafrodita em um pequeno gramado de OP50 semeado no centro da placa NGM. Cerca de 50% da geração que sucesso será machos selvagens.
- him-5(e1490) ou ele-8(e1489) hermafroditas lançam um grande número de machos. ele-5 e ele-8 machos são férteis e não há defeito óbvio em morfologia e função do esperma. Assim, ele-5 ou ele-8 machos podem ser usados em vez de machos selvagens para muitas experiências.
2. Identificação e isolamento de homens
- Examinar a morfologia da cauda dos vermes; a cauda do verme macho está arredondada.
- Escolha machos de estágio L4 e transfira-os para uma placa NGM semeada com E. coli OP50 e deixe-os crescer por um dia ou dois. O crescimento de machos celibatários na ausência de hermafroditas previne a perda de espermatozoides e, portanto, um grande número de espermatozoides estaria disponível durante o procedimento experimental.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
