Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For at forberede kapillærfoderen eller CAFE-analysen skal du indsætte sorterede eller markerede glaskapillærer fyldt med farvet, flydende mad, nederste ende først gennem pipettespidserne oven på et formonteret eksperimentelt hætteglas. Sørg for, at kapillærerne er sikkert placeret i samme højde og ikke er i kontakt med apparatet.
Marker startniveauet for menisken i hver kapillær. Hus derefter hætteglassene i et temperatur-, fugtigheds- og lysstyret miljø under forsøgets varighed, mens du udskifter kapillærer efter behov. Under CAFE-analysen er mobile fluer uhæmmede og har fri adgang til den nederste åbne ende af mikropipetten. Fluer fodrer frivilligt, når de udvider deres proboscis og indtag væsken, hvilket reducerer mediet inde i kapillæren.
At spore fødevareforbrug og præference for en bestemt periode, registrere nedstigningen af menisken fra startmærket til niveauet i slutningen af denne periode fra kvalificerende kapillærer. I eksempelprotokollen vil vi se CAFE-analysen med samlingen modificeret for at opnå reduceret fordampning fra de væskefyldte kapillærer.
- Fjern forsigtigt pipettespidsen, der lukker en af de ydre åbninger, og sæt en fyldt glaskapillær i nederste ende først. Fastgør kapillæren ved at placere pipettespidsen tilbage ved siden af kapillæren. Gentag dette trin for alle testede fødevareopløsninger.
Placer derefter kapillærenderne inde i alle hætteglassene på samme niveau, 3 til 4 centimeter fra låget. Lad afstanden mellem filterpapiret være for at forhindre kapillæren i at lække. Brug en tuschpen til at mærke den øverste ende af den farvede væske.
Placer forberedt CAFE assays i en plastikkasse med en gridded indlæg. Brug en svamp bung at anvende 100 mikroliter af ferskvand hver 24 timer for at holde luftfugtigheden konstant inde i analysen. Brug fire separate hætteglas fyldt med 30 milliliter dobbelt-destilleret H2O som fugtighed enheder, og læg dem ved siden af CAFE assays i plastboksen.
Dæk plastboksen for at skabe et fugtighedskontrolleret miljø under eksperimentet. Overfør kassen til en sikker position i et temperatur-, lys- og fugtighedskontrolleret klimakammer i forsøgsperioden.
I slutningen af analysen og før du udskifter kapillæren, skal du holde CAFE-analysen i oprejst position. Fjern ikke låget, og marker kapillærens nedre menisk. Kassér dataene, hvis mærkets ende ikke er under det oprindelige mærke. Udskift de brugte kapillærer med friskfyldte kapillærer til langsigtede eksperimenter hver 24. time.
Mål nedgangen i menisken. Kassér derefter de gamle kapillærer. Fjern derefter forsigtigt kapillærerne fra analysen, og opbevar dem til dataindsamling. Kontroller, om væsken inde i kapillæren nåede den nederste ende. Hvis væsken inde i kapillæren ikke nåede den nederste ende, skal du kassere dataene.
Efter forsøget afmonteres opsætningen, og hætteglassene, lågene og svampebollerne vaskes i et sæbebad. Derefter tørres de natten over ved stuetemperatur til videre brug. Gentag eksperimenter med de samme genotyper på mindst tre forskellige dage.
