Ensayo de isla: un método de alto rendimiento para evaluar el comportamiento locomotor de Drosophila

Abstract

Fuente: Eidhof, I., et al. Análisis de alto rendimiento del comportamiento locomotor en el ensayo de la isla de Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Este video describe el ensayo de la isla, un método conductual utilizado para estudiar la locomoción de Drosophila. El protocolo de muestra presenta una configuración para el ensayo compatible con el análisis de imágenes semiautomatizado.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Eidhof et al., High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay, J. Vis. Exp. (2017).

1. Construcción de la caja de ensayo de la isla

1. Prepare una bandeja hecha de un material resistente, como el polimetacrilato de metilo (PMMA), para que contenga una capa de agua (es decir, un baño). Asegúrese de que el material no sea blanco.
   NOTA: Se recomiendan unas dimensiones de 40 x 35 x 2,5^cm3 (Figura 1A).
2. Prepare una caja (42 x 38 x 25 cm....

Results

Figura 1: Diagrama de flujo que describe los requisitos, el procedimiento experimental y el análisis del ensayo de la isla. (A) Equipo de ensayo de la isla. (B) Configuración experimental para el ensayo de la isla. (C) Ensayo de la isla. (D) Procesamiento de datos de ensayos de islas con la macro "Drosophila Island Assay". La macro "Drosophi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
25 viales de Drosophila de 95 mm	Materia de mosca	32-116SB	-
Cámara web Logitech C525 HD	Logitech	-	Cualquier cámara web con conexión USB es adecuada.
Soporte para sostener la cámara web	-	-	-
lámpara	-	-	Las luces LED de 12 V son apropiadas
Almohadilla de golpeo	-	-	Cualquier alfombrilla de ratón funciona
Caja de ensayo de la isla	-	-	Dimensiones: 40x35x2,5 cm. Agujero 20x30 cm. Transparente.
Baño de ensayo en la isla	-	-	Dimensiones: 42x38x25 cm. No blanco.
Isla/plataforma	-	-	Dimensiones: 42x38x25 cm. Blanco uniforme.
jabón	-	-	El detergente para lavar platos estándar es adecuado.
ordenador	-	-	Los scripts se ejecutan tanto en Windows como en Mac
Software de grabación de imágenes: HandiAvi®	AZcendant®	-	HandyAvi solo es compatible con Windows y ha sido descrito a lo largo del manuscrito. Se puede descargar desde: http://www.azcendant.com/DownloadHandyAvi.html (versión 5.0)
Software de grabación de imágenes: WebcamCapture	-	-	Plugin Fiji/ImageJ que se puede utilizar en Mac como alternativa a HandyAvi para grabaciones de imágenes y que se puede descargar desde: https://imagej.nih.gov/ij/plugins/webcam-capture/ Al utilizar este método, el usuario debe utilizar la misma configuración de carpeta y grabación de imágenes indicada en este manuscrito, Con la excepción de que para cada réplica experimental, la pila de imágenes capturadas debe exportarse como Stack.tiff a la carpeta de réplica experimental correspondiente. Al ejecutar la macro "Drosophila Island Assay" en estos datos, no debe haber texto en la configuración "Identificador del primer fotograma".