הקרנה לשינויים גנומיים: שיטה לזיהוי מוטנטים שנוצרו על ידי CRISPR בדרוזופילה

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: Du, L., ואח ‘. אסטרטגיה יעילה ליצירת מערכות שעתוק בינאריות ספציפיות לרקמות ב Drosophila על ידי עריכת הגנום. ג’יי ויס אקספ. (2018).

סרטון זה מתאר שיטת הקרנה לזיהוי זבובי דרוזופילה מהונדסים, שהגנום שלהם שונה באמצעות CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 הוא כלי רב עוצמה לעריכת גנום שחולל מהפכה באופן שבו מדענים יכולים לתפעל את הגנום של האורגניזם. בפרוטוקול הדוגמה, נראה כיצד לזהות מוטנטים שנוצרו על ידי CRISPR, שבהם הכנסה של רצף טראנסאקטיביזציה מחליפה את האקסון הראשון של הגן ללא ענף (bnl), ובכך יוצרת קו נהג ספציפי לגן bnl, bnl-LexA.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Du et al., אסטרטגיה יעילה ליצירת מערכות שעתוק בינאריות ספציפיות לרקמות בדרוסופילה על ידי עריכת הגנום, J. Vis. Exp. (2018). 1. טיסה וגנטיקה והקרנה (איור 1 ואיור 2) כאשר העוברים המוזרקים מתפתחים למבוגרים, חוצים כל זבוב G0 כדי לאזן זבובים. בחר …

Representative Results

איור 1: מבט כולל על זרימת עבודה לעריכת גנום בתיווך CRISPR/Cas9 כדי ליצור מערכת שעתוק בינארית. משך הזמן המשוער הנדרש עבור כל שלב מצוין. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה. <p class="jove…

Materials

Tris-HCl Sigma Aldrich T3253 Molecular Biology
EDTA Sigma Aldrich E1161 Molecular Biology
NaCl Sigma Aldrich S7653 Molecular Biology
UltraPure DNase/RNase-Free Water ThermoFisher Scientific 10977-023 Molecular Biology
Primers IDT-DNA PCR
Proteinase K ThermoFisher Scientific 25530049 Molecular Biology
2x PCR PreMix, with dye (red) Sydlab MB067-EQ2R Molecular Biology
MKRS/TB6B Kornberg lab Fly line
CO2 station Genesee Scientific 59-122WCU fly pushing
Stereo microscope Olympus SZ-61 fly pushing
Microtube homogenizing pestles Fisher-Scientific 03-421-217 genomic DNA isolation

Play Video

Cite This Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).

View Video