ゲノム修飾のスクリーニング:ショウジョウバエにおけるCRISPR生成変異体の同定方法

Published: April 30, 2023

Abstract

出典: Du, L., 他 . ゲノム編集によるショ ウジョウバエ における組織特異的なバイナリ転写システムを生成するための効率的な戦略. J. ヴィス・エクス (2018).

このビデオでは、CRISPR-Cas9を使用してゲノムを改変したトランスジェニックショウジョウバエを同定するスクリーニング方法について説明します。CRISPR-Cas9は、科学者が生物のゲノムを操作する方法に革命を起こした強力なゲノム編集ツールです。プロトコル例では、TRANSActivationシーケンスの挿入が分岐のない(bnl)遺伝子の最初のエキソンに取って代わるCRISPR生成変異体を同定する方法を見て、bnl-LexAというbnl遺伝子特異的ドライバラインを作成する。

Protocol

このプロトコルは、ゲノム編集、J.Vis. Exp.(2018)によるショウジョウバエにおける組織特異的バイナリ転写システムを生成するための効率的な戦略であるDu et al.からの抜粋である。 1. 飛ぶ遺伝学とスクリーニング(図1および図2) 注入された胚が成人に発達すると、各単一のG0 ハエを横切ってバランサハに飛ぶ。標的となるアリールを含む?…

Representative Results

図1:CRISPR/Cas9媒介ゲノム編集のワークフローの概要を示し、バイナリ転写システムを生成する。 各ステップに必要なおおよその所要時間が示されます。 この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。 <p class="jove_conten…

Materials

Tris-HCl Sigma Aldrich T3253 Molecular Biology
EDTA Sigma Aldrich E1161 Molecular Biology
NaCl Sigma Aldrich S7653 Molecular Biology
UltraPure DNase/RNase-Free Water ThermoFisher Scientific 10977-023 Molecular Biology
Primers IDT-DNA PCR
Proteinase K ThermoFisher Scientific 25530049 Molecular Biology
2x PCR PreMix, with dye (red) Sydlab MB067-EQ2R Molecular Biology
MKRS/TB6B Kornberg lab Fly line
CO2 station Genesee Scientific 59-122WCU fly pushing
Stereo microscope Olympus SZ-61 fly pushing
Microtube homogenizing pestles Fisher-Scientific 03-421-217 genomic DNA isolation

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Cite This Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).

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