जीनोमिक संशोधनों के लिए स्क्रीनिंग: ड्रोसोफिला में CRISPR-जनित म्यूटेंट की पहचान करने के लिए एक विधि

Abstract

स्रोत: डीयू, एल., एट अल जीनोम संपादन द्वारा ड्रोसोफिला में ऊतक-विशिष्ट बाइनरी ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम उत्पन्न करनेके लिए एक कुशल रणनीति। जे विस एक्सप्रेस। (2018).

यह वीडियो ट्रांसजेनिक ड्रोसोफिला मक्खियों की पहचान करने के लिए एक स्क्रीनिंग विधि का वर्णन करता है, जिसका जीनोम CRISPR-Cas9 का उपयोग करके संशोधित किया गया था । CRISPR-Cas9 एक शक्तिशाली जीनोम संपादन उपकरण है कि जिस तरह से वैज्ञानिकों को एक जीव के जीनोम हेरफेर कर सकते है क्रांतिकारी बदलाव है । उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम देखेंगे कि CRISPR-जनित म्यूटेंट की पहचान कैसे की जाए, जिसमें एक ट्रांसएक्टिवेशन अनुक्रम का सम्मिलन शाखारहित (बीएनएल)जीन के पहले एक्सोन की जगह जाता है, इस प्रकार बीएनएल जीन-विशिष्ट ड्राइवर लाइन, बीएनएल-लेक्साका निर्माण होता है।

Protocol

यह प्रोटोकॉल डु एट अलसे एक अंश है, जो जीनोम संपादन, जे विस एक्सपी (2018) द्वारा ड्रोसोफिला में ऊतक-विशिष्ट बाइनरी ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम उत्पन्न करने के लिए एक कुशल रणनीति है। 1. फ्लाई जे?…

Representative Results

चित्रा 1: एक बाइनरी ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम उत्पन्न करने के लिए CRISPR/Cas9-मध्यस्थता जीनोम संपादन के लिए कार्यप्रवाह का अवलोकन। प्रत्येक चरण के लिए आवश्यक अनुमानित समय ?…

Materials

Tris-HCl	Sigma Aldrich	T3253	Molecular Biology
EDTA	Sigma Aldrich	E1161	Molecular Biology
NaCl	Sigma Aldrich	S7653	Molecular Biology
UltraPure DNase/RNase-Free Water	ThermoFisher Scientific	10977-023	Molecular Biology
Primers	IDT-DNA		PCR
Proteinase K	ThermoFisher Scientific	25530049	Molecular Biology
2x PCR PreMix, with dye (red)	Sydlab	MB067-EQ2R	Molecular Biology
MKRS/TB6B	Kornberg lab		Fly line
CO2 station	Genesee Scientific	59-122WCU	fly pushing
Stereo microscope	Olympus	SZ-61	fly pushing
Microtube homogenizing pestles	Fisher-Scientific	03-421-217	genomic DNA isolation