맛 선호 분석: 드로소필라에서 먹이 행동을 측정하는 방법

Overview

이 비디오는 선호하는 물질을 섭취한 후 플라이의 복부 색을 평가하여 맛이 다르게 맛을 주는 유색 솔루션으로 어트랙션 또는 회피를 측정하는 데 사용되는 행동 방법인 맛 선호도 분석법을 설명합니다. 이 기능을 갖춘 프로토콜은 다양한 자당 농도의 솔루션에 대한 파리의 선호도를 측정하는 데 사용되는 절차를 보여줍니다.

Protocol

이 프로토콜은 반텔과 테시에에서 발췌, 성인 Drosophila에대한 맛 선호 분석,J. Vis. Exp. (2016). 

1화 기아

1. 표준 플라이 바이알 의 바닥에 18.2 MΩ 물이있는 면공을 포화시켜 비행 기아 바이알을 준비하십시오. 또는 18.2MΩ 물로 작은 필터 용지 스트립을 포화시키고 유리병 내에서 비스듬히 배치합니다.
2. CO₂ 패드에 ~ 100 마리의 동물 세트로 파리를 수집한 다음 파리를 준비 된 유리병에 추가하십시오.
   참고: 최상의 결과는 5일 미만의 동물로 얻을 수 있습니다. 그러나, 동물의 정확한 나이는 시간이 지남에 따라 맛 선호도의 변화를 결정하기 위해 실험 변수로 제어 될 수있다.
3. 면공이나 폼 스토퍼를 사용하여 바이알을 닫습니다. 환경적으로 통제되는 인큐베이터에 유리병을 배치합니다. 온도를 25°C로 유지하고 습도를 70% 이상 유지합니다. 바이알을 24시간 동안 그대로 둡니다.

2. 맛 선호 분석

1. 테스트와 같은 날에 분석할 모든 태스포를 준비합니다.
   참고: 사용할 정확한 tastants는 묻는 실험적인 질문에 따라 달라집니다. 다음은 이 프로토콜에 사용되는 예제 tastants입니다. 최적화는 섹션 4를 참조하십시오.
   1. 100mM 자당 용액 10μl, 붉은 음식 착색 13μl, 18.2MΩ 수의 977 μl을 결합하여 제어 태액(1mM 자당)을 준비합니다.
   2. 100mM 자당 용액 50μl, 청색식 착색 10μl, 18.2MΩ 수의 940 μl을 결합하여 실험용 태스트(5mM 자당)를 준비한다.
2. 표준 100mm x 15mm 플라스틱 페트리 접시를 사용하여 분석 챔버를 다음과 같이 준비합니다.
   1. 12시에 플레이트 가장자리에서 가장 가까운 10 μl 컨트롤 타스트 3 방울을 놓고 6시에 3 방울을 떨어 뜨립니다. 방울 사이의 간격이 유사한지 확인합니다.
   2. 3시에 플레이트 가장자리에서 가장 가까운 실험용 태스트 10 μl 방울 3방울을 놓고 9시에 3방울을 떨어뜨립니다. 방울 사이의 간격이 유사한지 확인합니다.
   3. 원하는 만큼 복제할 수 있는 경우 2.2.1 및 2.2.2 단계를 반복합니다.
3. 100마리의 굶주리고 있는 유리병1병은 모든 동물을 마취할 수 있을 만큼 충분히 긴 CO₂ 패드로 날아갑니다(약 10초). 준비된 분석 챔버의 중간에 동물을 브러시하고 접시 뚜껑으로 덮습니다.
   참고: CO₂ 노출의 긴 기간은 복구 시간을 개선하고 공급 행동에 대한 간섭을 제한하기 위해 피해야한다. 얼음에 노출 (~5 분) 심지어 제한 된 노출에서 발생할 수 있는 CO₂ 행동 효과 피하기 위해 마취에 사용할 수 있습니다.
4. 불투명한 골판지 상자에 분석 챔버를 놓습니다. 검사 중인 상태와 유전자형으로 상자 의 외부에 레이블을 지정해야 합니다.
5. 전체 설정(2.4단계에서 골판지 상자에 포함된 분석챔버)을 2시간 동안 70% 이상의 습도를 가진 25°C 인큐베이터에 넣습니다.
6. 모든 복제에 대해 2.3~2.5단계를 반복합니다.
7. 2 시간 후, 여전히 골판지 상자에 포함 된 분석 챔버를 -20 °C 냉동고에 직접 배치하여 수량에 대비할 때까지 하십시오.

3. 맛 선호 분석 정량화

1. 단일 분석 챔버를 실내 온도까지 따뜻하게 할 수 있도록 (약 5 분).
2. 해부 현미경에서, 브러시 또는 집게 쌍을 사용하여, 그들의 복부의 색깔에 따라 동물을 그룹 : 빨간색, 파란색, 보라색 또는 선명(그림 1).
3. 각 그룹에서 동물의 수를 기록합니다. 명확한 동물이 분석에 참여하지 않았기 때문에 계산에 포함되지 않은 것을 고려하십시오.
4. 다음 방정식 중 하나에 따라 기본 설정 인덱스를 계산합니다.
   1. 실험적인 관심 분제가 적색 염료에 추가되면 사용(N_빨간색 + 0.5N_{퍼플)/(N빨간색} + N_블루 + N_퍼플)을사용하십시오.
   2. 실험용 태슬이 파란색 염료에 추가되면 방정식을 조정합니다(N_파란색 + 0.5N_{퍼플)/(N블루} + N_빨간색 + N_퍼플)로조정합니다.
5. 모든 실험 조건 및 복제에 대한 계산을 반복합니다.

4. 맛 선호 분석의 최적화

1. 경험적으로 사용 되는 식품 착색 지표의 농도 결정 그래서 음식 착색 맛 분석의 결과에 영향을 주지 않습니다., 다음과 같이:
   1. 2.1단계에서 나타난 바와 같이 동일한 염기화합물(예: 5mM 자당)을 사용하여 4개의 태스를 준비하지만 식품 착색을 생략한다.
   2. 1.3% 붉은 음식 착색을 맛볼 수 있습니다. 각튜브(예: 0.6%, 1%, 1.3%) 등 다양한 농도의 청색식품 착색으로 나머지 3개의 태액을 만드십시오.
   3. 전체 프로토콜 단계 2.2 ~ 3.4 각 태액 쌍에 대 한: 1.3% 빨간색 대 0.6% 블루; 1.3% 빨간색 대 1% 파란색 과 1.3% 빨간색 대 1.3% 블루.
   4. 반복 단계 4.1.1-4.1.3 청색 식품 착색의 다른 백분율로 기본 설정 지수평균0(그림 2).
      참고: 출발점으로, 1.3% 붉은 음식 착색과 함께 1% 블루 푸드 착색은 일반적으로 좋은 결과를 산출합니다. 파란 식품 착색의 만족스러운 농도가 1.3%의 염료와 일치할 수 없는 경우, 4.1.1~4.1.3단계는 다양한 적색 농도와 청색식품 착색의 일정한 농도로 반복될 수 있다.
   5. 동일한 최적화된 식품 착색 농도로 테스트할 모든 조건을 분석합니다.

Representative Results

그림 1: 맛 취향 분석 결과. 복부 착색의 변이에 있는 몇몇 보기는 도시됩니다. 어두운 빨간 섭취(A). 라이트 레드 섭취(B). 다크 블루 섭취(C). 라이트 블루 섭취(D). 보라색 복부는 전체 착색이 보라색(E)으로나타나거나 복부의 뚜렷한 영역이 빨간색 (화살표 헤드) 및 파란색 (화살표)(F)의별도의 부분의 부분을 표시 할 때 고려됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2: 식품 착색 효과 제어. 맛에 음식 착색을 추가하면 동물의 취향에 영향을 미치지 않아야합니다. 적색 염료의 농도를 유지하면서 적색 염료의 농도를 변화시키면서 1.3% 빨간색에서 1.0%의 청색으로 최적의 조합을 나타냈다. 이는 0.5에 가까운 기본 설정 인덱스 값으로 표시됩니다. 값은 표준 편차 ± 평균입니다. * p < 0.05, ***p & 0.001 양면 학생의 t-테스트에서. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blue Food Coloring (Water, Propylene Glycol, FD&C Blue 1 and Red 40, Propylparaben)	McCormick	N/A
Cryo/Freezer Boxes w/o Dividers	Fisher	03-395-455
Dumont #5 Forceps	Fine Science Tools	11251-20
Leica S6 E Stereozoom 0.63X-4.0X microscope	W. Nuhsbaum, Inc.	10446294
Petri dish (100 mm x 15 mm)	BD Falcon	351029	Reuseable if thoroughly washed and dried
Quick-Snap Microtubes	Alkali Scientific Inc.	C3017
Red Food Coloring (Water, Propylene Glycol, FD&C Reds 40 and 3, Propylparaben)	McCormick	N/A
Sucrose	IBI Scientific	IB37160