Drosophila Aggresjonsanalyse: En metode for å teste atferdsplastisitet i fluer

Overview

Aggresjon er en medfødt oppførsel, og tidligere kamperfaring påvirker kampstrategi og utfall av senere konkurranser i fluer. Denne videoen beskriver en analyse som brukes til å studere Drosophilasaggressive oppførsel. Eksempelprotokollen inneholder analysen som utføres i et oppsett som eliminerer flyhåndtering og derfor reduserer stress for dyrene, noe som ellers vil påvirke fagenes ytelse.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Trannoy et al., en ny tilnærming som eliminerer håndtering for å studere aggresjon og "taper" -effekten i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2015).

1. Atferdseksperiment

1. Utfør atferdseksperimentene med 6-7-dagers mannlige fluer.
2. Sett plastdelere inn i hvert kampkammer.
3. Fjern bomullspluggen fra isolasjonsrøret og plasser røret under et åpent hull på siden av apparatet.
4. La flyet gå inn i kampkammeret med negativ geotaxis, vanligvis i løpet av få sekunder.
5. Lukk skyveveggen etter at flyet har forlatt røret og kommet inn i kammeret.
6. Gjenta prosedyren for å introdusere den andre fluen i kampkammeret på den andre siden av apparatet.
7. Plasser apparatet tilbake i den opplyste videoopptaksposisjonen.
8. Begynn videoopptak og fjern plastdeleren slik at fluer kan samhandle.
   1. For aggresjonseksperimenter:
      1. I disse eksperimentene kjemper rekorden i minst 20 minutter for å sikre dannelsen av sterke dominansforhold.
      2. Etter ønsket tid, stopp videoopptak.
      3. Fjern fluer fra kampkamrene ved å reversere prosedyren beskrevet ovenfor.
      4. Vask virkeapparatet grundig med mildt vaskemiddel og vann etter hver bruk og skyll.
   2. For "taper" effekteksperimenter:
      MERK: I disse eksperimentene betraktes første kamper som kondisjoneringsfasen og andre kamper som testfasen. Hvileperioden mellom kampene kan variere, men 10 min tillater dannelse av en sterk "taper" effekt.
      1. Følg prosedyren beskrevet ovenfor for å utføre en første kamp.
      2. KRITISK TRINN: For å indusere dannelsen av en "taper" mentalitet, sørg for at de første kampene er minst 20 minutter lange for å etablere sterke dominansforhold. Etter 20 min, sett plastskilleren inn i kampkamrene for å skille fluene.
      3. Etter en 10 min hvileperiode, fjern forsiktig plastdeleren slik at fluer kan samhandle for andre kamper.
      4. På slutten av den andre 20 min kampen, stopp videoopptaket.
      5. Fjern fluer fra atferdskamre som ovenfor.
      6. Igjen, rengjør virkeapparatet grundig.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Behavioral chambers	Mike machine		Fabricated in-house. Directly contact the company for more information.
Borosilicate glass vials	VWR International	47729-576	16 x 10 mm
Cotton	Fisherbrand	22-456-881	Any brand can be used
Srew cap tube	VWR International	10011-394	15 mm diameter, 10 mm height
Plastic slices	Electron Microscopy Sciences	70329-40	22 x 40 x 0.25 mm Thickness
Light source (bulb)	VWR International	500003-418	Any brand can be used
Timer	VWR International	62344-641	Any brand can be used
Binocular	Nikon	SMZ-745	Any brand can be used
Camera (SONY Handycam HDR-CX330)	B&H	SOHDRCX330B	Any brand can be used