Overview
线虫可以在实验室中轻松繁殖,部分原因是她的马夫罗狄蒂可以通过自我受精繁殖。 然而,基因交叉和其他实验可能需要大量的男性。 此视频描述了一种为男性C. elegans丰富的方法。
Protocol
本协议摘自辛加拉韦卢等人,隔离和体外激活的卡诺哈布迪蒂斯优雅精子,J.维斯Exp。(2011).
1. 男性人口的丰富
- 根据实验需要,通过采用以下策略之一,可以获得大量男性:
- 在NGM板块中央播种的OP50小草坪上,穿越5只野生雄性雄性和1只草本雄性,可以获得大量野生型雄性。大约50%的后一代将是野生类型的雄性。
- 他 - 5(e1490) 或他 - 8(e1489)赫马罗狄蒂扔大量的男性。他-5和他-8雄性是肥沃的,精子形态和功能没有明显的缺陷。因此,他-5或他-8雄性可用于代替野生类型的雄性进行许多实验。
2. 男性的身份识别和隔离
- 检查蠕虫的尾部形态;雄性蠕虫的尾巴是圆的。
- 挑选L4阶段雄性,并转移到一个NGM板与 大肠杆菌 OP50种子,让他们生长一两天。在没有母细胞的情况下生长的独身雄性可以防止精子的流失,因此在实验过程中会有大量的精子。
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