ביוסינתזה של מטריקס סחוסים ידי כונדרוציטים יכולה להיות מושפעת על ידי יישום של גירויים מכאניים. שיטה זו מתארת את הטכניקה של החלת זני דחיסה דינמיים לכונדרוציטים גלומים במבני 3D וההערכה של Induced שינויים בחילוף חומרי chondrocyte.
סחוס במפרק סובל מיכולת תיקון מוגבלת, כאשר נפגע על ידי עלבון מכאני או מושפל על ידי מחלה, כגון דלקת מפרקים ניוונית. כדי לתקן את הליקוי הזה, כמה התערבויות רפואיות פותחו. שיטה אחת כזו היא לשוב אל פני שטח לאזור הפגוע ברקמת סחוס מהונדס, אך בדרך כלל רקמה המהונדסת חסרות את המאפיינים ועמידות ביוכימיים של סחוס מקורי, חקירת השרידות ארוכות הטווח שלו. זה מגביל את יישום הנדסת רקמות סחוס לתיקון פגמי מוקד קטנים, בהסתמך על הרקמה שמסביב כדי להגן על החומר המושתל. כדי לשפר את התכונות של הרקמות המפותחות, גירוי מכאני הוא שיטה פופולרית משמשת להגברת הסינתזה של מטריקס סחוסים, כמו גם את התכונות המכאניות כתוצאה של הרקמות המהונדסות. גירוי מכאני חל כוחות לרקמה בונה מקביל לאלו בגוף חי. זההוא מבוסס על ההנחה שהסביבה המכאנית, בחלקו, מסדירה את הפיתוח והתחזוקה של 1,2 רקמת ילידים. הצורה הנפוצה ביותר מיושמת של גירוי מכאני בהנדסת רקמת סחוס היא דחיסה דינמית בזנים פיסיולוגיים של כ 5-20% בתדירות של 1 הרץ 1,3. מספר מחקרים בחנו את ההשפעה של דחיסה דינמית והראו את זה יש השפעה חיובית על חילוף חומרים וביוסינטזה chondrocyte, סופו של דבר משפיע על התכונות הפונקציונליות של 4-8 רקמות המפותחות. במאמר זה, אנו מדגימים את השיטה המכאנית כדי לעורר מבנים הידרוג chondrocyte-agarose תחת דחיסה דינמית ולנתח שינויים ביוסינתזה דרך מבחנים ביוכימיים וradioisotope. שיטה זו יכולה גם להיות שונה כדי קושי להעריך את שינויים שנגרמו פוטנציאל בתגובה תאית כתוצאה מגירויים מכאניים.
השיטה המתוארת ליישום גירויים מכאניים מבוקרים לתא בעלת גרעין agarose הידרוג מאפשרת חקירה הישירה להשפעות של כוחות דחיסה דינמיים בחילוף חומרי chondrocyte. השימוש במתקן לבדיקה מותאמת אישית בשילוב עם טבעות התמך ספק מגבלת רוחב למבנים כדי להימנע מבעיות פוטנציאליות של מדגם מפנ?…
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ham’s F-12 | Thermo Fisher Scientific | SH3001002 | |
Collagenase A | Sigma Aldrich Ltd. | C0130 | |
Protease | Sigma Aldrich Ltd. | P5147 | |
Fetal Bovine Serum | Sigma Aldrich Ltd. | F1051 | |
Ascorbate | Sigma Aldrich Ltd. | A4034 | |
Antibiotics/antimycotics | Sigma Aldrich Ltd. | A5955 | |
HEPES | Bioshop Canada Ltd. | HEP001 | |
Trypan blue | Sigma Aldrich Ltd. | 93595 | |
Reichert Bright-Line Hemacytometer | Hausser Scientific | 1490 | |
Quant-iT PicoGreen | Invitrogen | P7589 | |
Papain from papaya latex | Sigma Aldrich Ltd. | P3125 | |
Ammonium Acetate | Sigma Aldrich Ltd. | A1542 | |
Ethyldiaminetetraacetic Acid | Sigma Aldrich Ltd. | E9884 | |
DL-Dithiothreitol | Sigma Aldrich Ltd. | 43819 | |
Low Melting Point Agarose, Type VII | Sigma Aldrich Ltd. | A9045 | |
Mesh Screen (200) Filter | Sigma Aldrich Ltd. | S4145 | |
Mach-1 Micromechanical Tester | Biomomentum Inc. | V500cs | |
Compression Loading Jig | Custom-built | Similar product could be supplied by Biomomentum Inc. | |
Falcon 24 Well Culture Plate | Thermo Fisher Scientific | B353047 | |
β-Liquid Scintillation Counter | Beckman Coulter | LS6500 | |
[3H] Proline | Perkin-Elmer | NET323005MC | |
[35S] Sulfur | Perkin-Elmer | NEX041005MC |