Introduction
Het onderzoek van de bij de ontwikkeling van trombose en de evaluatie van de effectiviteit van anti-trombotische geneesmiddelen mechanismen vereist gevestigde experimentele diermodellen. Grote diermodellen waren de eersten die worden gebruikt als zij grote schepen meer op mensen dan knaagdieren 1. Echter, hoge kosten, de grotere vereiste voorzieningen en de moeilijkheid genetisch manipuleren zijn belangrijke nadelen aan het gebruik en grote dieren zijn thans beperkt tot late preklinische studies eenmaal voorproeven op knaagdieren eindresultaten 2 gegeven. Met brede beschikbaarheid van transgene en knockout stammen en hun kleine grootte die de hoeveelheid antitrombotische geneesmiddelen nodig voor in vivo onderzoek minimaliseert worden muizen voornamelijk gebruikt voor trombose onderzoek. Daarom zijn verscheidene modellen van trombotische aandoeningen ontwikkeld bij muizen 3.
Vele gevestigde trombose modellen verstoren de intimeen laag van de vaatwand, gevolgd door blootstelling van de sub endotheliale extracellulaire matrix om de bloedstroom induceren van de vorming van bloedstolsels 4. De trombi kan van blootstelling van collageen waarvan bloedplaatjes activering triggers of / en de blootstelling van weefselfactor waarvan de stollingscascade 5 activeert. Verschillende technieken worden vervolgens gebruikt om de oorspronkelijke vaatschade bereiken. Pierangeli et al. Ontwikkelden een mechanische verstoring model met een microchirurgie tool op de dijader 6. Kikushi et al. Beschreef een model dat bestaat uit de toediening van een foto reactieve verbinding (Rose Bengal) dat zich ophoopt in de lipide bilaag van endotheliale cellen gevolgd door de specifieke excitatie van de vaatwand plaats met groen licht (540 nm) 7. De schade kan ook veroorzaakt worden door een korte hoge intensiteit pulse laser belichting 8. Een andere techniek allereerst vastgesteld aan de halsslagader van rattenbestaat in de topicale toepassing van ferrichloride (FeCl3) 9. In dit geval, het vaartuig erosie resultaten uit die door FeCl3 vrije radicalen die lipideperoxidatie en vernietiging van endotheelcellen 10 veroorzaakt. De schade induceert de expressie van verschillende adhesiemoleculen triggering bloedplaatjesadhesie en aggregatie en leukocyten rekrutering. Het is aangetoond dat leucocyten, met name neutrofielen, spelen een cruciale rol bij de activatie van de bloedcoagulatie cascade die leidt tot trombose 11. Deze methode is bijzonder geschikt voor de stollingscascade te reproduceren; onderzoekers moeten in gedachten houden dat, in dit muismodel, trombose wordt meestal veroorzaakt bij gezonde vaten terwijl trombose bij mensen voornamelijk plaatsvindt in zieke bv houden. atherosclerotische vaten.
Aangezien dit model is zeer eenvoudig te implementeren en is ook effectief bij muizen, is nu de meest gebruikte trombose model voor kleine dieren in vivo studies. Bovendien biedt deze techniek de mogelijkheid om de vorming van trombi in diverse vaten veroorzaken. Target schepen kunnen slagaders of aders van grote diameter (carotis, dijbeen, vena cava) of kleine diameter (mesenterium, cremaster) 12-14. Meer recent werd ook gebruikt op het proximale cerebralis media een model van beroerte 15 ontwikkelen. De trombose formatie kan direct worden waargenomen door het opklaren na fluorescerende etikettering van bloedplaatjes en leukocyten of gevolgd door het meten van de bloedstroom daling met een temperatuur sonde of een Doppler sonde 12,16,17. Diverse parameters zoals de occlusietijd, trombusvorming tijd of trombus grootte kan vervolgens worden onderzocht. De fysiologische verschillen tussen de vaten onderzochte resulteren in aanzienlijke verschillen in de trombi verkregen. Daarom onderzoekers selecteert gewoonlijk het doelvat volgens de parameters die ze willen measure en / of de ziekte instelling die ze willen onderzoeken. Kenmerkend het model de halsslagader relevanter voor onderzoek naar atherotrombose betrekking tot myocardinfarct of beroerte, terwijl studies naar de vena cava relevanter voor onderzoek naar diepe veneuze trombose. De toegankelijkheid van de verschillende vaten bepaalt ook de methode voor groei trombus te meten. Bijvoorbeeld, de mesenteriale vaten eenvoudig kunnen worden geopend waardoor dit model geschikt voor intravitale microscopische observatie en het bestuderen van de dynamica van trombusvorming. De halsslagader is minder toegankelijk, maar groter waardoor de bloedstroom metingen en bieden een uitstekend model om occlusieve trombose te bestuderen.
Het ferrichloride geïnduceerde trombose model heeft enorme vooruitgang die in het begrijpen van deze pathologie. Het is gebruikt in veel studies gericht op de rol van de von Willebrand factor in trombosevorming 18,19. Gecombineerd met genetische modicatie technieken heeft het mogelijk gemaakt een groot aantal specifieke gen betrokken bij trombotische aandoeningen. Lamrani et al. bijvoorbeeld gebleken dat een knock-in van het JAK2 V617F gen is gekoppeld aan een versnellende vorming van instabiele stolsel 20. Zhang et al. Hebben de fysiologische gevolgen van de bloedplaatjes P2Y12 receptor onderzocht en aangetoond dat transgene muizen overexpressie specifiek deze receptor in bloedplaatjes alleen weergegeven een snelle en stabiele trombusvorming in mesenterica verwond met FeCl3 21. De cruciale rol van weefsel-type plasminogeen activator (tPA) en urokinase-type plasminogeen activator (uPA) in fibrine degradatie leidt is onderzocht bij deze methode 22. Verder biedt dit model ook een eenvoudige en nauwkeurige manier testen van de fibrinolytische capaciteit van vele nieuwe geneesmiddelen in vivo. Zo hebben Wang et al. Dit model th tweedehandse preklinische validatie van een nieuw recombinant plasminogeenactivator gericht tegen geactiveerde plaatjes 23. Deze methode staat ook de validatie van therapeutische eiwitten geïsoleerd uit het speeksel van teken, vampier vleermuizen en muggen of uit het gif van slangen met een specifieke identificatie van de doelgroep 24-27. Deze voorbeelden demonstreren de veelzijdigheid van het ferrichloride model. In dit artikel richten we ons op twee methoden en studie ijzerchloride geïnduceerde trombose op twee verschillende type drukvat; mesenterische vat en halsslagader.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle experimenten met dieren werden goedgekeurd door de Alfred Medical Research en Opleiding Precinct Animal Ethics Committee (E / 1534/2015 / B). Alle chirurgische manipulaties werden uitgevoerd onder volledige narcose en de dieren hebben geen pijn ervaren in elk stadium. Alle experimenten worden beschreven, zijn niet-herstel.
1. Voorbereiding
- Snijd dunne banden van filter papier (1 mm x 2 mm).
- Vers bereiden 2 oplossingen ferrichloride van 4% (w / v) en 6% (w / v) verdund in gedeïoniseerd water. Bereid rhodamine 6G-oplossing 0,3% in PBS, gefiltreerd door 0,22 urn.
- Snijd een klein stukje (5 mm x 1 cm) van het witte plastic van de spuit wrapper.
2. Mesenterium arteriole Trombusvorming Waargenomen door Intravitale Microscopie
- Weeg een 10-12 weken oude mannelijke C57BL / 6 wildtype muis en dus verdoven met een mengsel van ketamine (100 mg / kg) en xylazine (10 mg / kg), maar intraperitoneale injectie. Bewaken van de diepte van de anesthesie door respons tot teen, staart en / of de huid knijpen, reactiviteit van het hoornvlies en oogleden knijpen, en de afwezigheid van snorharen beweging. Eventueel Injecteer tweede dosis ketamine (50 mg / kg) verdoving van het dier te handhaven. Breng vet zalf op de ogen tot droog voorkomen terwijl onder narcose. Plaats de muis in een petrischaaltje geplaatst op een verwarmingselement aangepast tot 37 ° C.
OPMERKING: Hoewel IP injectie kan pijn veroorzaken voor de dieren, de duur van deze ongemakken minimale (minder dan 3 seconden) zijn. Pijn en ongemak van injecties wordt beperkt door middel van ervaren en bekwaam personeel en geschikte naalden (25 G). Na alle procedures, euthanize alle dieren met behulp van een overdosis van ketamine en xylazine, gevolgd door cervicale dislocatie. - Voer een abdominale incisie van ongeveer 3 cm in de huid en knip het buikvlies.
- Plaats de muis in de zijkant van het huisdierri schotel voorzichtig exterioriseren de darmen en voorzichtig uit het mesenterium met 2 wattenstaafjes een geschikt vat op het oppervlak van de petrischaal te brengen. Goed droog met een delicate wisser.
OPMERKING: Om de beweging van de mesenteriale vaten te beperken, kan Papaverine worden gebruikt om darm peristaltiek remmen. - Week de staart van de muis in warm water om de vaten verwijden en injecteer 30 gl Rhodamine 6G (0,3%) in de staartader van de muis met een 29 G spuit leukocyten en bloedplaatjes label.
- Plaats de petrischaal onder een omgekeerde microscoop en focus op de gekozen arteriole met de heldere veld kanaal.
- Dompel een band filtreerpapier met 6% (w / v) ijzer (III) chloride en het filterpapier toegepast op de arteriole twee tang; de eerste die de filter papier, de tweede om voorzichtig op het op het gebied van belang vast te houden. Let trombusvorming in de eerste 10 seconden na het afzetten van het filterpapier.
LET OP: Het is heel commop het midden microvasculatuur en de precisie van de afzetting van het filterpapier en de zacht druk verwonden Daarom moeten deze kwestie te beperken. - Observeer trombusvorming door fluorescentiemicroscopie (TRITC channel: piek excitatie 557 nm, piek emissie 576 nm), door het filter papier. Let op de circulerende leukocyten en bloedplaatjes die de Rhodamine 6G en hun aggregatie in de trombus hebben genomen is dus gemakkelijk te identificeren.
- Neem het filterpapier na 1 minuut blootstelling aan ijzer (III) chloride en verder om de vorming van de trombus te controleren. Was het schip met PBS.
- Observeer en noteer de dynamische vorming van de trombus benadrukt met de etikettering van bloedplaatjes en leukocyten met Rhodamine 6G. Leg de beelden en meten van de grootte van de trombus. De hierin gepresenteerde beelden werden verkregen met een omgekeerde intravitale microscoop, maar een objectieve 4X, in de TRITC fluorescentiekanaal.
- Fadat alle procedures, inslapen het dier met behulp van een overdosis van ketamine en xylazine, gevolgd door cervicale dislocatie.
3. halsslagader Trombusvorming Afgaande van Blood Flow snelheidsmeting
- Weeg een 10-12 weken oude mannelijke C57BL / 6 muis en dienovereenkomstig verdoven met een mengsel van ketamine (100 mg / kg) en xylazine (10 mg / kg) wel intraperitoneale injectie. Breng vet zalf op de ogen tot droog voorkomen terwijl onder narcose.
- Bevestig de muis onder een operationele microscoop met plakband op benen, op een verwarmingselement aangepast tot 37 ° C.
- Maak een kleine kussen uit een ruitenwisser en plak het onder de kop van de muis om het hoofd lichtjes verheffen. Gebruik een draad lus met een tang op de snuit naar beneden trekken (gebruik boventanden). Hierdoor wordt het gebied van de halsslagader blootleggen gemakkelijke toegang.
- Voer een 5 mm diepe snede van de huid direct onder de kaak, tot aan het borstbeen.
- Ontleden de fascia en isoleren van een fragment van de linker of rechter carotis communis boven de bifurcatie.
- Zorgvuldig introduceren pincet in-tussen de slagader en het lef om ze te scheiden. Laat de zenuw loopt dicht bij de slagader niet storen en raak te veel van de halsslagader als het schade aan het schip kan veroorzaakt. Isoleer een doorsnede van ten minste 5 mm van de slagader.
- Droog het gebied van de slagader juist met wissers te voorkomen dat er vloeistof hindert de FeCl3.
- Zet de kleine witte plastic stuk onder het geïsoleerde deel van de gemeenschappelijke carotis zodat de FeCl3 niet genieten in de omliggende weefsels. Hiervoor gebruikt u een tweede tang om het stuk om de eerste langzaam de plastic papier onder de slagader te brengen en schuif.
- Dompel een stuk filtreerpapier met 4% (w / v) en 6% (w / v) ferrichloride en plaats het rondom de slagader.
- Na 3 min blootstelling, haal de filter papier, spoelen met PBS en droog het gebied wet ruitenwissers.
- Plaats de Doppler flow sonde rond het schip in de gewonde gebied en start de opname van de veranderingen in de flow. In de gezonde halsslagader van volwassen muizen, de stroom gewoonlijk ongeveer 1 ml / min. Let op! contact van de probe met ferrichloride wordt de probe beschadigen zodat geen contact kan worden vermeden. De hierin gepresenteerde gegevens werden verkregen met een Transonic System Inc. Flow meter, TS420 perivasculaire module voorzien van een Nano Doppler sonde 0,5 PBS.
OPMERKING: De concentratie van ferrichloride kan de kinetiek van trombusvorming resulteert in verschillende occlusie tijd wijzigen. Aldus werd een blootstelling aan 6% (w / v) ferrichloride wordt een sneller occlusie dan blootstelling aan 4% (w / v) ferrichloride. - Naar aanleiding van alle procedures, euthanaseren alle dieren met behulp van een overdosis van ketamine en xylazine, gevolgd door cervicale dislocatie en zorgvuldig reinigen van de Doppler sonde.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De fluorescentie microscopie intravitale observatie van het mesenterium wordt de accumulatie van Rhodamine 6G tonen gelabelde bloedplaatjes en leukocyten langs de vatwand verwond door FeCl3. De geleidelijke vorming van een gedeeltelijk thrombus wordt bewaakt in een 200 urn mesenterium vat (Figuur 1). Een trombus langzaam weergegeven en is duidelijk herkenbaar na de eerste minuut van blootstelling aan FeCl3 (figuur 1, t = 60 sec). 40 sec na verwijdering van het filtreerpapier gedrenkt met FeCl3, de trombose snel vordert en eindelijk aanwezig op de wand van het gehele deel vaartuig (figuur 1, t = 100 sec).
Figuur 1:. Trombus groei Waargenomen door Fluorescent Intravitale Microscopie op een Mesenterium Vessel Beelden werden genomen op 15 sec, 60sec en 100 sec na de afzetting van het filterpapier gedrenkt in 6% (w / v) FeCl3-oplossing. Het filtreerpapier werd na 60 seconden blootstelling. Leukocyten en bloedplaatjes werden gelabeld door middel van pre-injectie van Rhodamine 6G (0,5% w / v). Rode pijlen geven bloedplaatjes / leukocyten aggregaten. Scale bar 200 pm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Een intra-carotide thrombus wordt geïnduceerd door het toepassen van een filterpapier gedrenkt in FeCl3 oplossing rond een geïsoleerde halsslagader en de veranderingen van de bloedstroom stroomafwaarts van het letsel is opgenomen met een Doppler sonde (figuur 2). Een algemeen constante bloedstroom ongeveer 1,1 ml / min wordt gemeten in de niet verwonde halsslagader. Na 3 minuten blootstelling van het vat met een filterpapier gedrenkt in 4% (w / v) FeCl3-oplossing, een occlusieve trombus is obtained een occlusie tijd van 13 min en 30 sec na het begin van de belichting. Na 3 min belichting met een filterpapier gedrenkt in 6% (w / v) FeCl3, is een occlusieve trombus verkregen met een occlusietijd van 9 minuten en 30 seconden na het begin van de belichting.
Figuur 2. Representatieve opnamen van de bloedstroom door de halsslagader Na FeCl3 Injury. Bloedstroom werd gemeten met een Doppler probe die in de halsslagader net stroomafwaarts van het filtreerpapier gedrenkt met 4% (w / v) en 6% ( w / v) FeCl3. Het filtreerpapier werd na 3 min blootstelling. Als controle bloedstroming werd verkregen door meting van de gezonde halsslagader.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De ijzerchloride geïnduceerde trombose model is een uitstekend research tool. Zoals getoond in deze studie, is het uiterst eenvoudig te implementeren en bij gebruik in combinatie met intravitale microscopie of Doppler flowmeter, biedt een goede real-time monitoring van trombusvorming. De belichtingstijd en de concentratie van FeCl3 aanpassen, maar biedt ook de mogelijkheid om hetzij niet-occlusief of occlusieve trombi produceren.
Deze werkwijze heeft ook een aantal beperkingen. In de halsslagader, het grote nadeel is dat hoewel de occlusie tijd effectief kan worden gewijzigd, de reproduceerbaarheid van het model te zwak om trombusgrootte en groeisnelheid 10 nauwkeurig te regelen. Verschillende groepen hebben gewerkt aan een standaardisatie van het model 28,29. Owens et al. Gesuggereerd dat betrouwbare en reproduceerbare occlusietijd kunnen verkrijgbaar praktijk en door het verminderen van de variatie factoren zoals leeftijdde muizen, de genetische achtergrond van de muizen, de anesthesie toegepast, de techniek voor het ferrichloride expositie en de concentratie van de ijzerchloride 28. De Doppler sonde zelf ook een aantal beperkingen met een zekere mate van achtergrondsignaal aanwezig die kan invloed op de vaststelling van de occlusie. De bloedstroom kan ook worden veranderd door de vorming van instabiele trombi.
Op de mesenteriale vat, kan de reproduceerbaarheid worden beïnvloed door de grootte van het vat, dat varieert meer dan de halsslagaders en het aanwezige vet dat de omvang van het letsel af. Vermeld is dat de trombi verkregen verschillen afhankelijk van de grootte van de vaatwand beschadiging die kan beperken tot endotheel verspreiding of van invloed op de gladde spiercellen van de media-laag 30. De laser bestraling model vormt een goed alternatief van het ijzerchloride model dat een betere reproduceerbaarheid biedt 8. Het is echter beperkt tot kleine vaartuigen die voldoende transparant om de penetratie van de laser mogelijk zijn. Ook moet worden opgemerkt dat in dit model, endotheliale cellen vernietigd na ferrichloride toepassing en het is daarom niet geschikt voor studies naar de rol van endotheelcellen. Het is echter mogelijk het ferrichloride vervangen door calcium ionofoor een zwakkere schade beperkt tot de activatie van het endotheel 31 verkrijgen.
Een andere beperking van dit model is dat het niet geschikt om het ontstaan van de ziekte op lange termijn te bestuderen. Om aan deze eis te voldoen, hebben Boulaftali et al. Dorsale huidplooi kamers die de bewaking van de zelfde trombus mogelijk gedurende een aantal weken 32 ontwikkeld. Deze techniek is bijzonder goed geschikt voor de werking van trombolytische geneesmiddelen onderzocht volgens de thrombus volwassenheid. In deze studie werd het stolsel vergrijzing gevonden om de lytische werking van een recombinante vorm van tissu afbreuke plasminogeenactivator, die momenteel de gouden standaard van trombolytische geneesmiddelen voor menselijk gebruik.
Ondanks een aantal nadelen die moeten worden genomen in overweging, de FeCl3 model is om de studie van de menselijke trombose relevant. De samenstelling van de verkregen trombi werd geanalyseerd op histologische sectie en de aanwezigheid van plaatjes, fibrine en rode bloedcellen zijn geïdentificeerd in de intra-carotide trombi 33. Bovendien, aangezien atherotrombotische aandoening verondersteld wordt geïnitieerd door de oxidatie van lipoproteïnen, het induceren van de vatverwonding hoewel een oxido-reductiereactie het FeCl3 model is wil de pathofysiologie van menselijke ziekte na te bootsen dan mechanisch, fotochemische of laser geïnduceerd letsel 34.
De gevormde trombus hoewel ferrichloride is ook beschreven gevoelig voor zowel antistollingsmiddel en anti-bloedplaatjes geneesmiddelen. Heparine en Clopidogrel bijvoorbeeld zijn rep geweestorted de occlusietijd van trombi gevormd in de halsslagader 29 uitstrekken. De toediening van een recombinante vorm van hirudine aanzienlijk verlengd de trombusvorming keer op het mesenterium microvasculatuur 17. Daarom is de ijzerchloride model biedt een uitstekende inzicht in trombose en is een zeer relevant instrument voor de preklinische validatie van nieuwe trombolytische, antistollingsmiddel en anti-bloedplaatjes geneesmiddelen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
De auteurs willen graag technische ondersteuning van Joy Yao en Dr. Karen Alt, evenals de financiering van de NHMRC en NHF erkennen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Whatman chromatography paper | GE Healthcare | 3030917 | |
| Iron (III) chloride 40% (w/v) | VWR | 24212.298 | |
| Rhodamine 6G | Sigma | R4127 | |
| Inverted microscope | Olympus | IX81 | |
| Digital black-and-white camera | Olympus | XM10 | |
| Doppler flowmeter | Transonic | TS420 | |
| Nano-doppler flow probe | Transonic | 0.5 PBS | |
| Ketamine | Hospira | 0409-2051-05 | |
| Xylazine (Rampun) | Bayer | 75313 | |
| Petri dish | Sarstedt | 82.1472 | |
| Insulin syringe (29 G) | BD Ultra-Fine | 326103 | |
| Cotton tipped applicators | BSN medical | 211827A | |
| Dynek dysilk sutures | Dynek Pty Ltd | CS30100 | |
| Dulbecco's phosphate buffer saline (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| Heating pad | Kirchner | T60 |
References
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).
- Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. Murine thrombosis models. Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).
- Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).
- Furie, B., Furie, B. C. Mechanisms of thrombus formation. N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).
- Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).
- Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).
- Rosen, E. D., Raymond, S., et al. Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi. Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).
- Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).
- Eckly, A., Hechler, B., et al. Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis. J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).
- Darbousset, R., et al. Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice. Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).
- Denis, C., Methia, N., et al. A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis). Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).
- Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice. Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).
- Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor. J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).
- Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).
- Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen. Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).
- Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo. Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).
- Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor. Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).
- Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B. Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).
- Lamrani, L., Lacout, C., et al. Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm. Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).
- Zhang, Y., Ye, J., et al. Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12. J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).
- Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator. Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).
- Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets. Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).
- Decrem, Y., et al. Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis. J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).
- Ma, D., et al. Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo. Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).
- Lei, X., et al. Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis. Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).
- Waisberg, M., et al. Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis. PLoS Pathog. 10 (9), e1004338 (2014).
- Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model. J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).
- Wang, X., Xu, L. An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research. Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).
- Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery. Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).
- Bonnard, T., et al. Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm. Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).
- Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy. Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).
- Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice. Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).
- Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).
