Introduction
Studiet af de mekanismer, der er involveret i udviklingen af trombose og evaluering af effektiviteten af anti-trombotiske lægemidler kræver veletableret eksperimentelle dyremodeller. Store dyremodeller var de første til at blive brugt, da de giver store skibe mere ligner mennesker end gnavere 1. Men høje omkostninger, de større nødvendige faciliteter og vanskeligheden ved at manipulere dem er genetisk er store ulemper for deres brug og store dyr er nu begrænset til sene prækliniske studier, når foreløbige test på gnavere har givet afgørende resultater 2. Med bred tilgængelighed af transgene og knockout stammer og deres lille størrelse, der minimerer mængden af antitrombotiske lægemidler kræves for in vivo testning mus hovedsageligt bruges til trombose forskning. Derfor har flere modeller af trombotiske lidelser er udviklet i mus 3.
Mange etablerede trombose modeller forstyrre Intimet lag af karvæggen, efterfulgt af udsættelse af det sub endotel ekstracellulære matrix til blodgennemstrømningen inducere dannelsen af blodpropper 4. Tromberne kan skyldes eksponering af kollagen, som udløser blodplader aktivering eller / og fra eksponering af vævsfaktor som aktiverer koagulationskaskaden 5. Adskillige teknikker anvendes derpå til at nå det oprindelige fartøj skade. Pierangeli et al. Udviklet en mekanisk sprængning model med en mikrokirurgi værktøj på den femorale vene 6. Kikushi et al. Beskrev en model, som består i administration af et billede reaktiv forbindelse (Rose Bengal), der akkumuleres i lipiddobbeltlaget af endotelceller, efterfulgt af det specifikke excitation af karvæggen af interesse med grønt lys (540 nm) 7. Skaden kan også induceres af en kort høj intensitet puls laserbelysning 8. En anden teknik for det første fastsat på halspulsåren hos rotterbestår i topisk påføring af ferrichlorid (FeCl3) 9. I dette tilfælde er de fartøj blotlægning resultater fra frie radikaler genereret af FeCl3 som forårsager lipidperoxidation og destruktion af endotelceller 10. Skaden inducerer ekspression af flere adhæsionsmolekyler udløser blodpladeadhæsion og aggregering såvel som leukocytter rekruttering. Det er blevet påvist, at leukocytter, især neutrofiler, spiller en afgørende rolle i aktiveringen af blodkoaguleringskaskaden fører til thrombose 11. Denne metode er velegnet til at reproducere koagulationskaskaden; efterforskere skal huske på, at i denne musemodel, er trombose typisk induceret i sunde fartøjer mens trombose hos mennesker primært forekommer i syge f.eks. atherosclerotiske fartøjer.
Da denne model er meget enkel at implementere og er også effektiv i mus, er det nu det mest brugt trombose tilstandl for lille dyr in vivo studier. Desuden er denne teknik giver mulighed for at inducere dannelsen af tromber i forskellige typer beholdere. Target fartøjer kan være arterier eller vener med stor diameter (carotis, femorale, vena cava) eller lille diameter (mesenterium, cremaster) 12-14. For nylig blev det også anvendt på den proksimale arteria cerebri media at udvikle en model for slagtilfælde 15. Den trombose dannelse kan være direkte observeret af intravital mikroskopi efter fluorescerende mærkning af blodplader og leukocytter eller overvåges ved at måle blodgennemstrømningen faldet med en temperaturføler eller en Doppler probe 12,16,17. Adskillige parametre såsom okklusion tid, thrombedannelse tid eller trombe størrelse kan derefter undersøges. De fysiologiske forskelle mellem fartøjer undersøgte resultat i betydelige variationer i tromber opnået. Derfor efterforskere vælge normalt målkarret i henhold til de parametre, som de ønsker at measure og / eller sygdommen indstilling de ønsker at undersøge. Typisk model på halspulsåren er mere relevant for forskning i aterotrombose relateret til myokardieinfarkt eller slagtilfælde mens undersøgelser af vena cava er mere relevante for forskning i dyb venetrombose. Tilgængeligheden af de forskellige fartøjer bestemmer også den metode, der anvendes til at måle trombe vækst. For eksempel, er let at få adgang gør denne model velegnet til intravital mikroskopisk observation og undersøgelse af dynamikken i trombedannelse de mesenteriske fartøjer. Halspulsåren er mindre tilgængeligt men større muliggør blod flowmålinger og giver en fremragende model til at studere okklusiv thrombose.
Ferrichlorid induceret thrombosemodel har tilvejebragt enorme fremskridt i forståelsen af denne patologi. Det har været anvendt i mange undersøgelser, der fokuserer på den rolle, von Willebrand faktor i trombose dannelse 18,19. Kombineret med genetisk modifikation teknikker, har det kunnet pege på mange specifikke gen involveret i trombotiske lidelser. Lamrani et al. for eksempel har vist, at en knock-in for JAK2 V617F-genet er associeret med en accelererende dannelse af ustabile koagel 20. Zhang et al. Har undersøgt den fysiologiske konsekvenser af P2Y12 blodplade-receptoren og viste, at transgene mus, der overudtrykker specifikt denne receptor i blodplader kun, udviste en mere hurtig og stabil thrombedannelse i mesenterialarterie såret med FeCl3 21. Den afgørende rolle, Tissue-plasminogenaktivator (tPA) og urokinase-plasminogenaktivator (uPA) i fibrin nedbrydningsprocessen er også blevet undersøgt i denne fremgangsmåde 22. Endvidere denne model giver også en enkel og nøjagtig måde at teste de fibrinolytiske kapacitet i mange nye lægemidler in vivo. For eksempel har Wang et al. Brugt denne model til the præklinisk validering af en hidtil ukendt rekombinant plasminogenaktivator målrettet mod aktiverede blodplader 23. Denne metode også gjort det muligt validering af terapeutiske proteiner isoleret fra spyt af flåter, vampyr flagermus, og myg eller fra giften af slanger med specifik identifikation af målet 24-27. Disse eksempler viser alsidigheden af den ferrichlorid model. I denne artikel har vi fokus på to metoder og studere ferrichlorid induceret trombose på to forskellige skibstype; mesenteriske fartøj og halspulsåren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle forsøg med dyr blev godkendt af Alfred Medical Research og Uddannelse Precinct Animal Ethics Committee (E / 1534/2015 / B). Alle kirurgiske manipulationer blev udført i fuld bedøvelse og dyrene ikke oplever smerte på noget tidspunkt. Alle beskrevne forsøg er ikke-inddrivelse.
1. Fremstilling
- Skære tynde bånd af filterpapir (1 mm x 2 mm).
- Frisk forberede 2 opløsninger af ferrichlorid på 4% (vægt / volumen) og 6% (vægt / volumen) fortyndet i deioniseret vand. Forbered rhodamin 6G opløsning 0,3% i PBS, filtreret gennem 0,22 um.
- Skær et lille stykke (5 mm x 1 cm) fra hvide plastik sprøjte wrapper.
2. mesenterium arteriole trombedannelse Observeret ved Intravital Microscopy
- En 10-12 uger gamle C57BL / 6 vildtype mus vejes og anesthetize overensstemmelse med en blanding af ketamin (100 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg) selvom intraperitoneal injektion. Overvåge dybden af anæstesi ved reaktion til tå, hale og / eller hud knivspids, reaktivitet fra hornhindens og øjenlågenes knivspids, og fravær af whiskers bevægelse. Hvis det er nødvendigt, injiceres en anden dosis af ketamin (50 mg / kg) for at opretholde anæstesi af dyret. Påfør dyrlæge salve på øjnene for at forhindre tørhed, mens under anæstesi. Placer musen i en lille petriskål anbragt på en varmepude indstillet til 37 ° C.
BEMÆRK: Selvom IP-injektion kan resultere i smerte for dyrene, vil varigheden af dette ubehag være minimal (mindre end 3 sekunder). Smerter og ubehag forbundet med injektioner, vil blive minimeret ved brug af erfarne og kompetente personale og passende nål størrelse (25 G). Efter alle procedurer, aflive alle dyr under anvendelse af en overdosis af ketamin og xylazin, efterfulgt af cervikal dislokation. - Udfør en abdominal midtlinie incision på ca. 3 cm i huden og forsigtigt skære peritoneum.
- Placer musen på den side af PETri skålen, forsigtigt eksteriorisere sine tarme og forsigtigt at mesenterium med 2 vatpinde til at bringe en egnet beholder til overfladen af petriskålen. Tør ordentligt med en delikat visker.
BEMÆRK: For at begrænse bevægelsen af mesenteriale fartøjer kan Papaverin anvendes til at hæmme gut peristaltikken. - Soak halen af musen i varmt vand for at udvide blodkarrene og injicere 30 pi rhodamin 6G (0,3%) i halevenen af mus med en 29 G sprøjte til at mærke leukocytter og blodplader.
- Placer petriskålen under et omvendt mikroskop og fokusere på det valgte arteriole hjælp af lyse felt kanal.
- Soak et bånd af filterpapir med 6% (w / v) jern (III) chlorid og anvende filtrerpapir på arteriole med to tænger; den første til at holde filtrerpapir, den anden til forsigtigt tryk det på området af interesse. Observere thrombedannelse i den første 10 sek efter aflejringen af filtrerpapiret.
BEMÆRK: Det er ganske commom at skade den omgivet mikrovaskulatur og præcisionen af aflejringen af filtrerpapir, og forsigtigt presset er derfor vigtigt at begrænse dette problem. - Observere trombedannelse ved fluorescensmikroskopi (TRITC kanal: peak excitation 557 nm, emission peak 576 nm), gennem filtrerpapiret. Overhold de cirkulerende leukocytter og blodplader, der har taget op Rhodamine 6G og deres sammenlægning i tromben er derfor let at identificere.
- Tag filtrerpapiret ud efter 1 min for udsættelse for jern (III) chlorid og fortsætte med at overvåge dannelsen af tromben. Vask beholderen med PBS.
- Observere og registrere den dynamiske dannelse af tromben fremhævet med mærkning af blodplader og leukocytter med rhodamin 6G. Indfange billederne og måle størrelsen af tromben. De heri præsenterede billeder blev opnået med et omvendt mikroskop intravital, selvom en objektiv 4X, i TRITC fluorescenskanalen.
- Following alle procedurer, aflive dyret under anvendelse af en overdosis af ketamin og xylazin, efterfulgt af cervikal dislokation.
3. Arteria carotis trombedannelse vurderet af Blood Flow Velocity Måling
- En 10-12 uger vejer gamle C57BL / 6 mus og anesthetize overensstemmelse med en blanding af ketamin (100 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg), selvom intraperitoneal injektion. Påfør dyrlæge salve på øjnene for at forhindre tørhed, mens under anæstesi.
- Fastgør musen under et operativsystem mikroskop bruger tape på benene, på en varmepude indstillet til 37 ° C.
- Lav en lille pude ud af en visker og tape det under hovedet af musen til at løfte lidt i hovedet. Brug en tråd loop med tang til at trække snuden ned (brug øverste tænder). Dette vil udsætte området af halspulsåren for nem adgang.
- Udføre en lille 5 mm dybt indsnit i huden direkte under kæben, ned til brystbenet.
- Dissekerer fascia og isolere et fragment af enten venstre eller højre, fælles carotidarterie over forgreningen.
- Introducere omhyggeligt pincet i-mellem arterie og den frækhed at adskille dem. Du må ikke forstyrre nerve kører tæt på arterie og undgå at røre for meget af halspulsåren, da det kan forårsage skade på skibet. Isolere en sektion af en mindst 5 mm af arterien.
- Tørre området af arterien korrekt med vinduesviskere at undgå, at enhver væske interfererer med FeCl3.
- Sæt den lille hvide plastik stykke under den isolerede del af den fælles halspulsåre så FeCl3 ikke lægges i blød i det omgivende væv. Til dette formål skal du bruge en anden pincet til at bringe brik til den første derefter langsomt skub plastic papir under arterien.
- Et stykke filtrerpapir med 4% (vægt / volumen) eller 6% (vægt / volumen) ferrichlorid og placere den rundt arterien.
- Efter 3 min eksponering, tag filtrerpapir, skylles med PBS og tørre området wed vinduesviskere.
- Placer Doppler flow sonde rundt om skibet på det skadede område og begynde at optage ændringer i flow. I den sunde fælles halspulsåre af voksne mus, er strømmen normalt omkring 1 ml / min. Forsigtig! kontakt af sonden med ferrichlorid vil beskadige sonden så enhver kontakt bør undgås. De heri præsenterede data blev opnået med et Transonic System Inc. Flow Meter, TS420 perivaskulær modul udstyret med en Nano Doppler flow probe 0.5 PBS.
BEMÆRK: Koncentrationen af ferrichlorid kan modificere kinetikken af thrombedannelse resulterer i forskellige okklusion gange. Således en eksponering for 6% (vægt / volumen) ferrichlorid giver en hurtigere okklusion end eksponering til 4% (vægt / volumen) ferrichlorid. - Efter alle procedurer, aflive alle dyr under anvendelse af en overdosis af ketamin og xylazin, efterfulgt af cervikal dislokation og omhyggeligt rengøre Doppler probe.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den fluorescerende intravital mikroskopi observation af mesenteriet vil afsløre akkumuleringen af rhodamin 6G mærkede blodplader og leukocytter langs karvæggen såret af FeCl3. Den gradvise dannelse af en delvis trombe overvåges i en 200 um mesenteriet fartøj (figur 1). En thrombe langsomt vises, og er klart identificerbare efter det første minut af eksponering for FeCl3 (figur 1, t = 60 sek). 40 sekunder efter fjernelse af filtrerpapiret gennemvædet med FeCl3, trombosen hurtigt skrider frem, og endelig er til stede på væggen af hele skibet sektion observeret (figur 1, t = 100 sek).
Figur 1:. Blodprop Vækst observeret af Fluorescent Intravital Mikroskopi på en mesenterium Vessel Billeder blev taget på 15 sek, 60sek og 100 sek efter aflejringen af filterpapir vædet med 6% (vægt / volumen) FeCl3-opløsning. Filtrerpapiret blev fjernet efter 60 sekunders eksponering. Leukocytter og blodplader blev mærket gennem præ-injektion af rhodamin 6G (0,5% vægt / volumen). Røde pile angiver blodplader / leukocytter aggregater. Scale bar 200 um. Klik her for at se en større version af dette tal.
En intern carotis trombe induceres ved anvendelse af et filterpapir udblødt i FeCl3 opløsning omkring en isoleret arterie carotis og ændringerne i blodgennemstrømning nedstrøms for skaden er optaget med en Doppler flow probe (figur 2). En samlet konstant blodgennemstrømning omkring 1,1 ml / min måles i halspulsåren ikke-skadet. Efter en 3 min eksponering af fartøjet med en filterpapir udblødt i 4% (vægt / volumen) FeCl3-opløsning, en okklusiv trombe er obtained med en okklusion på cirka 13 min og 30 sek efter begyndelsen af eksponeringen. Efter en 3 minutters eksponering med et filterpapir udblødt i 6% (vægt / volumen) FeCl3, er en okklusiv thrombus opnået med en okklusion på cirka 9 minutter og 30 sekunder efter begyndelsen af eksponeringen.
Figur 2. Repræsentativ Recordings of Blood Flow gennem Arteria carotis efter FeCl3 Skade. Blood flow blev målt med en Doppler flow probe placeres på halspulsåren lige nedstrøms for filterpapir vædet med 4% (vægt / volumen) eller 6% ( vægt / volumen) FeCl3. Filtrerpapiret blev fjernet efter 3 min eksponering. Som en kontrol blodgennemstrømning blev opnået ved at måle den sunde carotidarterie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ferrichlorid induceret thrombosemodel er et fremragende forskningsværktøj. Som vist i denne undersøgelse, er det ekstremt let at implementere og når de anvendes i kombination med intravital mikroskopi eller Doppler flowmeter, det giver en god overvågning i realtid af thrombedannelse. Justering af tid eksponering og koncentrationen af FeCI3, det giver også mulighed for at producere enten ikke-okklusive eller okklusive tromber.
Men denne fremgangsmåde har også nogle begrænsninger. I halspulsåren, den store ulempe er, at selv om okklusion tid effektivt kan modificeres, reproducerbarheden af modellen stadig for svag til præcist at kontrollere trombe størrelse og væksthastighed 10. Flere grupper har arbejdet på en standardisering af modellen 28,29. Owens et al. foreslået, at pålidelig og reproducerbar okklusion tid kan opnås med praksis og ved at reducere alle de variation faktorer som aldermusene, den genetiske baggrund af musene, den udnyttede anæstesi, teknikken for ferrichlorid redegørelsen og koncentrationen af ferrichloridopløsning 28. Doppler probe selv har også nogle begrænsninger med en vis grad af baggrundssignal stede, som kan påvirke bestemmelsen af okklusionen. Blodgennemstrømningen kan også ændres ved dannelsen af ustabile tromber.
På den mesenteriske fartøj, kan reproducerbarheden påvirkes af størrelsen af det fartøj, der varierer mere end carotidarterierne og tilstedeværelsen af fedt, der kan reducerer omfanget af skaden. Det er blevet rapporteret, at tromber opnåede forskellige alt efter størrelsen af karvæggen læsion, som kan begrænse til endotel afgivelse eller også påvirke de glatte muskelceller i medierne lag 30. Den laserbestråling model udgør et godt alternativ af ferrichlorid model, som giver en bedre reproducerbarhed 8. Det er dog begrænset til små fartøjer, som er gennemsigtige nok til, at indtrængningen af laseren. Det bør også bemærkes, at i denne model, er endothelceller destrueret efter ferrichlorid ansøgning, og det er derfor ikke egnet til undersøgelser af rollen af endotelceller. Det er dog muligt at erstatte det ferrichlorid ved calciumionophor til opnåelse af en svagere skade, begrænset til aktivering af endothel 31.
En anden begrænsning ved denne model er, at den ikke er egnet til at studere langsigtet udvikling af sygdommen. For at opfylde dette krav, har Boulaftali et al. Udviklede dorsale skinfold kamre, som muliggør overvågning af samme trombe over flere uger 32. Denne teknik er specielt velegnet til at undersøge virkningerne af trombolytiske lægemidler i henhold til trombe modenhed. I denne undersøgelse blev blodproppen aldring fundet at forringe lytiske virkning af en rekombinant form af tissue plasminogen aktivator, som i øjeblikket er guldstandarden af trombolytiske lægemidler til human brug.
Trods nogle ulemper, der skal tages i betragtning, at FeCl3 model er relevant for studiet af menneskets trombose. Sammensætningen af det opnåede tromber er blevet analyseret på histologisk snit og tilstedeværelsen af blodplader, fibrin og røde blodlegemer er blevet identificeret i den intra-carotis tromber 33. Udover, eftersom aterotrombotisk lidelse antages at blive initieret ved oxydation af lipoproteiner, inducere fartøjet skade selvom en oxido-reduktionsreaktion af FeCl3 model er mere tilbøjelige til at efterligne patofysiologi den humane sygdom end en mekanisk, fotokemisk eller laser induceret beskadigelse 34.
Tromben dannes selvom ferrichlorid også er blevet beskrevet at være følsomme over for både antikoagulerende og trombocythæmmende lægemidler. Heparin og Clopidogrel eksempelvis har været reported at forlænge occlusionstid af tromber dannet i halspulsåren 29. Administrationen af en rekombinant form af hirudin har forlængede signifikant thrombedannelse tid på mesenteriet mikrovaskulaturen 17. Derfor er den ferrichlorid model giver fremragende indsigt i trombose og er et yderst relevant redskab for den prækliniske validering af nye trombolytisk, antikoagulerende og trombocythæmmende lægemidler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne anerkende teknisk support fra Joy Yao og Dr. Karen Alt, samt finansiering fra NHMRC og NHF.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Whatman chromatography paper | GE Healthcare | 3030917 | |
| Iron (III) chloride 40% (w/v) | VWR | 24212.298 | |
| Rhodamine 6G | Sigma | R4127 | |
| Inverted microscope | Olympus | IX81 | |
| Digital black-and-white camera | Olympus | XM10 | |
| Doppler flowmeter | Transonic | TS420 | |
| Nano-doppler flow probe | Transonic | 0.5 PBS | |
| Ketamine | Hospira | 0409-2051-05 | |
| Xylazine (Rampun) | Bayer | 75313 | |
| Petri dish | Sarstedt | 82.1472 | |
| Insulin syringe (29 G) | BD Ultra-Fine | 326103 | |
| Cotton tipped applicators | BSN medical | 211827A | |
| Dynek dysilk sutures | Dynek Pty Ltd | CS30100 | |
| Dulbecco's phosphate buffer saline (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| Heating pad | Kirchner | T60 |
References
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).
- Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. Murine thrombosis models. Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).
- Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).
- Furie, B., Furie, B. C. Mechanisms of thrombus formation. N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).
- Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).
- Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).
- Rosen, E. D., Raymond, S., et al. Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi. Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).
- Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).
- Eckly, A., Hechler, B., et al. Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis. J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).
- Darbousset, R., et al. Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice. Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).
- Denis, C., Methia, N., et al. A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis). Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).
- Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice. Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).
- Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor. J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).
- Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).
- Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen. Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).
- Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo. Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).
- Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor. Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).
- Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B. Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).
- Lamrani, L., Lacout, C., et al. Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm. Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).
- Zhang, Y., Ye, J., et al. Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12. J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).
- Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator. Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).
- Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets. Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).
- Decrem, Y., et al. Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis. J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).
- Ma, D., et al. Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo. Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).
- Lei, X., et al. Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis. Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).
- Waisberg, M., et al. Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis. PLoS Pathog. 10 (9), e1004338 (2014).
- Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model. J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).
- Wang, X., Xu, L. An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research. Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).
- Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery. Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).
- Bonnard, T., et al. Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm. Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).
- Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy. Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).
- Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice. Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).
- Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).
