Vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 Ophthalmoscopy와 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 이미징

요약

이 프로토콜 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 등 어떻게 고해상도 이미징 기술을 설명 하 고 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy에 정보를 얻기 위해 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하 여 작은 설치류에 이용 될 수 있다 망막 두께 microglial 각각 유통, 셀.

초록

스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월) 및 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy (SLO) 실험 안과에 광범위 하 게 사용 됩니다. 현재 프로토콜에서 마우스 표현 녹색 형광 단백질 (gfp) Cx3cr1 의 발기인에서 (BALB/c-Cx3cr1^gfp/gfp) microglia 세포에서 vivo에서 망막에 이미지를 사용 했다. Microglia 상주 세포는 망막의 고 여러 망막 질환^1,2,3,4,,56에 연루 되었습니다. 이 프로토콜의 망막 B-스캔, SD-10 월과 SLO에서 vivo에서,와 함께 Cx3cr1^gfp/gfp 마우스 microglia 셀 배포판의 이미징 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하는 세대에 대 한 상세한 접근을 제공 합니다. 프로토콜은 여러 기자 마우스 라인에서 사용할 수 있습니다. 그러나, 여기에 제시 된 프로토콜 몇 가지 제한이 있습니다. 첫째, SLO 및 SD-10 월, 고해상도 모드에서 사용 될 때 높은 축 해상도 측면 해상도와 데이터 수집 낮습니다 (3.5 µ m와 6 µ m, 각각). 또한, SLO에 초점 및 채도 수준을 높은 매개 변수 선택 및 눈의 올바른 정렬에 의존 합니다. 또한, 인간의 눈;에 비해 쥐에서 인간 환자는 마우스 눈의 더 높은 총 광학 힘 인 도전 위해 고안 된 장치를 사용 하 여 이 또한 다른 사람의 사이에서 마우스 렌즈에 의해 확대에 따라 확대 부정확⁷, 측면을 발생할 수 있습니다. 그러나, 축 검사 위치에 불구 하 고 측면 배율에 따라 달라 집니다, 그리고 축 SD 10 월 측정은 정확 하 게⁸.

서론

실험적인 안과에서 망막 병 리의 검사 일반적으로 조직학 기술을 사용 하 여 평가 합니다. 그러나, 조직학 동물 euthanization를 요구 하 고 조직의 실제 속성 변경 발생할 수 있습니다. SD-10 월과 SLO 정기적으로 사용 됩니다 임상 안과에서 진단 목적을 위해 여러 망막 질환 당뇨 황 반 부 종⁹, 앞쪽 허 혈 성 시 신경 병¹⁰또는 망막 화^{11 등의 모니터링} . SD-10 월과 SLO 추가 개입 없이 넓혀 진된 눈동자를 통해 시각화 되는 망막의 고해상도 이미지를 생성 하는 비-침략 적 기술이 있습니다. SD-10 월 SLO 입체 이미지는 망막의 생산 형광 데이터를 수집 하는 동안 망막의 단면 이미지를 만들려고 backscattering 데이터를 수집 하 여 망막 구조와 망막 두께의 정보를 제공 합니다. 요즘, 모두는 점점 작은 설치류^12,13,,1415 (또는 심지어 zebrafish¹⁶

프로토콜

모든 절차, BALB/c 성인 남성 및 여성 쥐 Cx3cr1의 발기인에서 gfp 익스프레스 누가 사용된 ²⁴ 했다. 마우스 ARVO 성명에 따르면 안과 및 비전 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 치료 하 고 모든 절차는 동물 복지에 스위스 연방 규정에 따르면 스위스 정부에서 승인 했다. 마우스는 medetomidine 염 산 염 (0.75 mg/kg)과 케 타 민 (45 mg/kg)의 피하 주입에 의해 취 했다. 적절 한 마 취 호흡 속도 동물을 모니터링 하 여 확인 되었다 ' 꼬리 핀치에 대 한 s 반응. 실험의 끝에, 쥐와 CO ₂ 흡입 안락사 되었다.

참고: 이미징 각 세션 (최대 20 분) 가능한 한 빨리 수행, 백 내장 형성 이후 다음 마 취 망막 시각화 ³⁰을 방해 수 있습니다.

1. 시스템 구성

1. 컴퓨터를 켭니다.
2. 전원 공급 장치를 켭니다. 메시지 " 시작 수집 모듈 " 장치의 제어판 화면에 나타납니다.
3. 소프트웨어를 작동 하는 소프트웨어의 바탕 화면 바로 가기를 두 번 클릭.

결과

여기에 제시 된 프로토콜을 사용 하 여, SD-10 월 스캔 하 고 SLO 이미지 같은 이미징 세션에 Cx3cr1^gfp/gfp 마우스에서 입수 했다. 그림 3 에 대표 SD-10 월 단일 검사는 30 °와 55 ° 렌즈 (그림 3A) 또는 대표 SLO 이미지 얻은 gfp 긍정적인 microglia 셀 시각화는 55 ° 또는 102 ° 렌즈와 함께 얻은 포함 되어 있습니다. 맥락 막의 높은 반사도 SD 10 월에서 관찰 검사 30 ° 55 ° 렌즈에 비해 얻은. 그러나, 망막 건축 30 °와 55 ° 이미지 (그림 3, 오른쪽 확대 이미지)에서 분명 하다. 망막 경계 수동 수정 후 (내부 제한 막 기반), 시 신경 머리 ( 에서에서 같은 거.......

토론

현재 문서에서는 망막 B-스캔의 수집과 같은 이미징 세션에서 마우스 망막에 gfp 긍정적인 microglia 분포의 이미징에 대 한 프로토콜을 보여 줍니다. SD-10 월과 SLO는 점점 사용 망막 질환의 동물 모델에서^{10,,1417,18,21}이상 망막 변경의 정보를 제공 하. 이 프로토콜, Cx3cr1^gfp/gfp 또는 Cx3cr1^{gfp / +} 마우스 망막 비 접촉 이미지 수와 망막 두께의 정보를 얻을 수 있습니다. 이것은 질병의 심각도 시간이 지남에 변경 또는 치료 치료 테스트 때 망막 질병 실험 모델에서 매우 중요 하다입니다. 또한, 프로토콜 망막에 형광 세포의.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Spectralis Imaging system (HRA+OCT)	Heidelberg Engineering, Germany	N/A	안과 이미징 플랫폼 시스템
Heidelberg Eye Explorer	Heidelberg Engineering, Germany	N/A	Version 1.9.13.0
78D standard ophthalmic non-contact slit lamp lens	Volk Optical Inc., Ohio, USA	V78C
Spectralis 광각 55°C; 렌즈	하이델베르크 Engineering, Germany	50897-002
ultra widefield 102° lens	Heidelberg Engineering, Germany	50117-001
medetomidine hydrochloride 1 mg/mL (Domitor)	Provet AG, Lyssach, Switzerland	Swissmedic Nr. 50'590 - ATCvet: QN05CM91	anesthetic/analgesic
ketamine 50mg/ml (Ketalar)	Parke-Davis, Zurich, Switzerland	72276388	마취제
트로피카미드 0.5% + 페닐에프린 HCl 2.5% (Augentropfen mix)	ISPI, 베른, 스위스	N/A	동공 확장
Omnican Insulin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm	B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Straß e, 독일	9151125
하이드록시프로필메틸셀룰로오스(메토셀 2%)	OmniVision, Neuhausen, 스위스	N/A
+4 dpt 경질 가스 투과성 콘택트 렌즈	Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY	N/A	기본 곡선: 7.20 - 8.40 mm 직경: 9.00 / 9.60 / 10.20 mm 전력: -25.00 to +25.00 디옵터
균형 염 용액(BSS)	Inselspital, Bern, 스위스	N/A
실리콘 펜치	N/A	N/A
atipamezole 5 mg/mL (Antisedan)	Provet AG, Lyssach, Switzerland	N/A	α 2 아드레날린성 수용체 길항제
GraphPad Prism 7	GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, USA	N/A	통계 분석 소프트웨어