Summary
यहां, हम प्रयोगात्मक चूहों में जी॰ और अंतर-धमनी रक्तचाप (बीपी) के एक साथ रिकॉर्डिंग के लिए एक सेटअप का वर्णन है, जो पशु सुविधाओं में मानक उपकरणों के साथ किया जा सकता है और शारीरिक या औषधीय करने के लिए लागू किया जा सकता हृदय चिकित्सा में रोगजनक या चिकित्सीय तंत्र की जांच करने के लिए अध्ययन ।
Abstract
हृदय फिजियोलॉजी या pathophysiology, रक्तचाप (बीपी) और जी॰ से संबंधित अध्ययन के लिए बुनियादी प्रेक्षणीय पैरामीटर हैं । अनुसंधान हृदय रोग मॉडल, संभावित हृदय चिकित्सकीय लक्ष्य या दवा एजेंटों पर ध्यान केंद्रित प्रणालीगत धमनी दबाव और दिल ताल परिवर्तन के आकलन की आवश्यकता है । जहां रेडियो टेलीमेट्री सिस्टम उपलब्ध नहीं है या सस्ती स्थितियों में, ऊरु धमनी cannulation की तकनीक अंतर-धमनी का दबाव तरंग रिकॉर्डिंग और प्रणालीगत बीपी माप प्राप्त करने के लिए एक वैकल्पिक तरीका है । इस तकनीक किफायती है और पशु सुविधाओं में मानक उपकरणों के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है । हालांकि, इनवेसिव धमनी दबाव रिकॉर्डिंग एक चुनौतीपूर्ण शल्य चिकित्सा कौशल हो सकता है, जो छोटी धमनियों के cannulation की आवश्यकता है । यहां, हम ऊरु धमनी cannulation प्रक्रियाओं के लिए कदम दर कदम प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । प्रमुख प्रक्रियाओं डेटा अधिग्रहण प्रणाली, ऊतक विच्छेदन और ऊरु धमनी cannulation, और दबाव रिकॉर्डिंग के लिए धमनी cannulation प्रणाली के सेटअप के अंशांकन शामिल हैं । सरफेस जी॰ रिकॉर्डिंग प्रक्रियाओं को भी शामिल किया गया है । हम भी normotensive और ग्रस्त चूहों से बीपी रिकॉर्डिंग के उदाहरण पेश करते हैं । इस प्रोटोकॉल एक साथ जी॰ के साथ प्रणालीगत बीपी के विश्वसनीय प्रत्यक्ष रिकॉर्डिंग की अनुमति देता है ।
Introduction
रक्तचाप (बीपी) और जी॰ (ईसीजी) हृदय फिजियोलॉजी और चिकित्सा के लिए बुनियादी मापदंडों हैं । प्रायोगिक पशु मॉडल व्यापक रूप से विभिंन हृदय रोगों के लिए जैव चिकित्सा अनुसंधान में लागू किया गया है जैसे ग्रस्त दिल विफलता1 और ईसीजी रिकॉर्डिंग और बीपी माप के लिए प्रक्रियाओं प्रयोगात्मक चूहों में किया जा सकता है ।
चूहों में बीपी माप के लिए तीन तरीके हैं: इंट्रा धमनी cannulation (इनवेसिव)2, पूंछ कफ plethysmography (इनवेसिव)3, और रेडियो टेलीमेट्री (इनवेसिव) । टेल कफ plethysmography द्वारा बीपी माप की विश्वसनीयता को रिकॉर्डिंग के दौरान पशु हैंडलिंग से प्रभावित किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, पूंछ कफ कोर बीपी परिवर्तन है कि एक साथ संयम और माप चरण4के दौरान हो आंक । रेडियो टेलीमेट्री जाग और स्वतंत्र रूप से5जानवरों को ले जाने में बीपी और हृदय की दर की निगरानी के लिए सबसे अच्छा "सोने के मानक" तकनीक माना जाता है । हालांकि, के बाद से रेडियो टेलीमेट्री हार्डवेयर और सॉफ्टवेयर महंगा है, अंतर धमनी cannulation भी व्यापक रूप से एक किफायती विकल्प के रूप में प्रयोग किया जाता है ।
इंट्रा धमनी cannulation काफी microsurgical कौशल की आवश्यकता है, लेकिन धमनी के दबाव के असली waveforms पैदावार । बीपी रेडियल, ऊरु, या बाहु धमनी में डाला खारा-भरा कैथेटर के माध्यम से दर्ज किया जा सकता है । प्रत्यक्ष इनवेसिव बीपी माप की इस विधि पूर्व शल्य चिकित्सा पशु तैयारी, संज्ञाहरण, प्रयोगशाला पशुओं के स्थिरीकरण, ऊतक विच्छेदन और धमनी cannulation में शल्य चिकित्सा कौशल, और माप प्राप्त करने से पहले उचित अंशांकन की आवश्यकता है .
कुतर भूतल ईसीजी मानव ईसीजी के समान है । एक चूहा ईसीजी पी तरंगों, क्यूआर परिसरों, टी तरंगों, और क्यूटी अंतराल6के अनुक्रम है । पी लहर, पीआर अंतराल, क्यूआर जटिल, और टी तरंगों अलिंद ध्रुवीकरण, अलिंद से ए वी नोड, वेंट्रिकुलर ध्रुवीकरण, और ध्रुवीकरण के लिए आवेग आचरण को प्रतिबिंबित क्रमशः । क्यूटी अंतराल Q लहर की दीक्षा से अंत टी वेव के बिंदु के रूप में परिभाषित किया गया है, जहां यह आईएसओ-विद्युत आधार रेखा को वापस1।
ईसीजी कार्डियक systole और diastole चरणों को इंगित करता है; इसलिए, सतह ईसीजी की एक साथ रिकॉर्डिंग इनवेसिव बीपी माप के साथ संबद्ध । तरीकों का एक संयोजन का उपयोग करके, यह एक रोग मॉडल या एक दवा या हृदय चिकित्सा में चिकित्सा के औषधीय प्रभाव में pathophysiological परिवर्तन स्पष्ट करने के लिए संभव है ।
जापान में हाई बीपी के साथ Wistar चूहों के रिश् तों द्वारा एक सहज ग्रस्त चूहा (SHR) तनाव प्राप् त किया गया था । बीपी की आयु 5 से 10 सप्ताह से उगता है और7साल की उंर के 30 से ३५ सप्ताह से स्थिर हो जाता है । Wistar-क्योटो चूहों (WKY) सिस्टोलिक बीपी के बारे में १३० mmHg7 है और सामांयतः normo-tension नियंत्रण के रूप में उपयोग किया जाता है । हमने SHR और WKY का इस्तेमाल intraarterial cannulation बीपी और ईसीजी रिकॉर्डिंग के रिजल्ट को प्रदर्शित करने के लिए किया ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
काऊशुंग चिकित्सा विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा वर्णित सभी पशु प्रयोगों को अनुमोदित किया गया ।
1. पशु देखभाल
- छोटे धमनी आकार के कारण मुश्किल cannulation से बचने के लिए, २०० ग्राम से अधिक शरीर के वजन वाले चूहों का प्रयोग करें ।
- पिंजरे और तेजी से चूहों रात भर से चाउ निकालें ।
- जब तक कि वहां एक विशेष प्रायोगिक डिजाइन है पानी विज्ञापन libidum प्रस्ताव ।
2. प्रायोगिक तैयारी
- निंनलिखित सामग्री प्राप्त करें: दांत के साथ संदंश (आंकड़ा 1a), सर्जिकल कैंची (चित्रा 1b), ठीक सुझावों के साथ संदंश (चित्रा 1C, 1 डी), angled सुझावों के साथ संदंश (चित्रा 1E), बुलडॉग संवहनी क्लैंप (चित्रा 1F ), रेशम स्ट्रिंग लंबाई में लगभग 20 सेमी (चित्रा 1G), सूक्ष्म कैंची (चित्रा ज), इंट्रा धमनी प्रवेशनी, एक बाँझ पॉलीथीन (पीई) ०.५ मिमी के एक आंतरिक व्यास और ०.९ मिमी के एक बाहरी व्यास के साथ ट्यूब, 25 – लंबाई में 30 सेमी, जुड़ा करने के लिए एक 26 जी एक्स 1/2 ' ' सुई (चित्रा 1I), २ ३-way stopcocks (चित्रा 1J) अंतर धमनी प्रवेशनी और दबाव transducer (चित्रा1), और heparinized खारा (१०० IU/एमएल) से भरा 1 मिलीलीटर सीरिंज को जोड़ने के लिए ।
-
पशु तैयारी
- isoflurane की साँस लेना द्वारा चूहे Anesthetize (एक 25 सेमी x 25 सेमी x 14 सेमी प्रेरण कक्ष 4% isoflurane के साथ संतृप्त, 3% isoflurane के साथ nosecone उपयोग के बाद) में चूहों को रखने.
नोट: यदि पशु पर्याप्त anesthetized न हो तो isoflurane की प्रवाह दर को मोड़ दें. - परीक्षण दर्द पलटा के पंजे चुटकी द्वारा ।
- एक पूर्व-कट स्टायरोफोम बोर्ड (या मोटा गत्ता) पर एक लापरवाह स्थिति में चूहे की जगह । शरीर (चित्रा 2a) को स्थिर करने के लिए रबर बैंड के साथ चार पैरों को ठीक करें ।
नोट: ईसीजी रिकॉर्डिंग के दौरान संभावित शोर से बचने के लिए, प्लेसमेंट सतह विद्युत प्रवाहकीय नहीं होना चाहिए ।
- isoflurane की साँस लेना द्वारा चूहे Anesthetize (एक 25 सेमी x 25 सेमी x 14 सेमी प्रेरण कक्ष 4% isoflurane के साथ संतृप्त, 3% isoflurane के साथ nosecone उपयोग के बाद) में चूहों को रखने.
- बीपी और ईसीजी रिकॉर्डिंग के लिए यंत्र तैयार करें । संकेतों को प्राप्त करने के लिए एक एनालॉग इनपुट इकाई शामिल करें, एक संगत हब के साथ एक दबाव transducer, तीन द्विध्रुवी सुई-इत्तला दे दी इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम सुराग, और उपयुक्त सॉफ्टवेयर के साथ एक कंप्यूटर.
3. दबाव Transducer अंशांकन
- बीपी रिकॉर्डिंग की दीक्षा से पहले, एक मानक पारा रक्तदाबमापी (चित्रा 1L) के साथ जांचना ।
- रक्तदाबमापी से दबाव कफ निकालें और मुद्रास्फीति ट्यूब पर तीन तरह टोंटी दबाव transducer के लिए डेटा अधिग्रहण प्रणाली की (आंकड़ा १,) कनेक्ट ।
- हवा जारी वाल्व दक्षिणावर्त पेंच । गेज पर आंखें रखें और मुद्रास्फीति बल्ब पंप रखना । जब गेज १०० mmHg से पता चलता है, तो दबाव transducer से कनेक्ट करने के लिए तीन-तरफ़ा टोंटी स्विच करें । अंशांकन के लिए १०० mmHg दबाव का उपयोग करें । बीपी की गणना के लिए रूपांतरण कारक स्वचालित रूप से निर्धारित किया जाएगा ।
- रक्तदाबमापी के दबाव में जब तक हवा जारी वाल्व की सुइयों पंगा लेना द्वारा दबाव जारी शूंय करने के लिए वापस आ गया है ।
- २०० mmHg के दबाव के साथ ३.२ कदम दोहराएं ।
- प्रेशर transducer से अलग कर पारा रक्तदाबमापी ।
- प्रेशर transducer को पीई कैथेटर (फिगर 1I) के तीन तरह के टोंटी से कनेक्ट करें ।
4. ऊरु धमनी के Cannulation के लिए मिनी सर्जरी
-
सतह मील का पत्थर पहचान और त्वचा के उत्पाद (चित्रा 2)
- वंक्षण क्रीज (पेट और जांघ के बीच जंक्शन पर इंडेंट) ( चित्र 2aमें लाइन धराशायी) के स्थान की पहचान करें ।
- वंक्षण क्रीज के केंद्र में त्वचा की पूरी परत चुटकी । फर या शेव किया जा सकता है बिजली कतरनी या चीरा से पहले एक लोमनाशक क्रीम का उपयोग कर चीरा साइट से हटा दिया ।
- त्वचा लिफ्ट और यह एक अभिविंयास में शल्य कैंची से काट लगभग ipsilateral जांघ (चित्रा बी) के समानांतर । ऊरु तंत्रिका और वाहिकाओं उजागर चमड़े के नीचे ऊतक (चित्रा 2c) के नीचे हैं ।
-
ऊतक के विच्छेदन ऊरु धमनी का पर्दाफाश करने के लिए
- काटना ठीक सुझावों के साथ संदंश का उपयोग ऊतक, परत से परत । विच्छेदन ऊरु जहाजों के स्तर पर बंद करो । यह सुनिश्चित करें कि विच्छेदन वाहिकाओं के नीचे घायल नहीं है ।
- ध्यान से संदंश (चित्रा 1C या 1 डी) का उपयोग करने के लिए ऊरु तंत्रिका और जहाजों के साथ नरम ऊतक स्पष्ट करने के लिए अच्छा अवलोकन प्राप्त करते हैं । नर्व में फाइबर जैसी रंगत होती है । नस गहरा बैंगनी है और धमनी गुणवाला है (आंकड़ा 3ए) ।
- angled युक्तियां (चित्रा 1E) के साथ संदंश का प्रयोग करें ऊरु धमनी और नस (चित्र बी) की उजागर लंबाई का विस्तार ।
-
ऊरु धमनी की Cannulation (चित्रा 3)
- संदंश का प्रयोग करें ऊरु नस को धमनी से अलग और ऊरु धमनी पर एक बुलडॉग दबाना लागू करने के रूप में संभव के रूप में कपाल (आंकड़ा 3सी) ।
- दो रेशम के तार के एक ढीले टाई, एक बस बुलडॉग दबाना और उजागर ऊरु धमनी (चित्रा 3 डी) के caudal टर्मिनल में दूसरे के नीचे बनाओ ।
- ऊरु धमनी (चित्रा 3E) माइक्रो कैंची (चित्रा ज) का उपयोग कर के ventral पक्ष पर एक छोटा सा छेद बनाओ ।
- छोटे छेद के माध्यम से पीई कैथेटर की नोक डालें और कैथेटर कपाल अग्रिम ।
नोट: पीई कैथेटर को आगे बढ़ाने के दौरान मरोड़ लागू न करें । मरोड़ बल ऊरु धमनी मोड़ और चमकदार एक प्रकार का रोग में परिणाम हो सकता है । - पीई कैथेटर सुरक्षित रूप से ऊरु धमनी लुमेन में उन्नत है के बाद बुलडॉग दबाना निकालें ।
नोट: ऊरु धमनी से बुलडॉग क्लैंप निकालते समय पीई कैथेटर पर आंखें रखें । नाड़ी के लिए अवलोकन के साथ जुड़े पीई कैथेटर में रक्त की एक backflush का अवलोकन धमनी लुमेन में अपने स्थान की पुष्टि करता है । - पीई कैथेटर की स्थिति को सुरक्षित करने के लिए ऊपरी सिल्क स्ट्रिंग को कस लें ।
नोट: पीई कैथेटर के किसी भी आकस्मिक पुल या अव्यवस्था प्रमुख रक्तस्राव में परिणाम कर सकते हैं । - ऊरु धमनी के caudal पक्ष से रक्तस्राव को रोकने के लिए निचली रेशमी स्ट्रिंग को कस लें ।
-
ऊरु धमनी cannulation की सफलता की पुष्टि
- ऊरु धमनी में 0.1-heparinized खारा के 0.2 मिलीलीटर इंजेक्षन करने के लिए एक 1 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें । इंजेक्शन पर प्रतिरोध तुच्छ होना चाहिए । इंजेक्शन पर किसी भी स्पष्ट प्रतिरोध देखा है, तो पूरे cannulation फिर से जांच करें ।
नोट: सुनिश्चित करें कि तीन तरह stopcocks उचित ऊरु धमनी प्रवेशनी में किसी भी नकारात्मक दबाव या खारा इंजेक्शन लगाने से पहले बंद कर रहे हैं । इस समय बिंदु पर, दबाव transducer में किसी भी इंजेक्शन एक पुनः अंशांकन की आवश्यकता होगी । - जांच करें कि क्या कोई cannulation साइट के आसपास बह रही है । यदि नहीं, एक गीला कपास की गेंद के साथ शल्य साइट को कवर ।
- ऊरु धमनी में 0.1-heparinized खारा के 0.2 मिलीलीटर इंजेक्षन करने के लिए एक 1 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें । इंजेक्शन पर प्रतिरोध तुच्छ होना चाहिए । इंजेक्शन पर किसी भी स्पष्ट प्रतिरोध देखा है, तो पूरे cannulation फिर से जांच करें ।
5. रक्तचाप की रिकॉर्डिंग
- पीई कैथेटर के लिए एक चिकनी फ्लश के बाद, पीई कैथेटर तीन तरह टोंटी दबाव transducer पर एक करने के लिए (चित्रा 4) देते हैं ।
- सुनिश्चित करें कि cannulation सिस्टम में कोई हवाई बुलबुले हैं । इसके अलावा तीन तरह के टोंटी के कनेक्शन जंक्शनों की जांच करें ।
- बीपी रिकॉर्ड करने के लिए १,००० हर्ट्ज की नमूना आवृत्ति के साथ डेटा अधिग्रहण प्रणाली शुरू. धमनी दबाव तरंगों का प्रदर्शन किया जाएगा (चित्रा 6) ।
- पूरे सेटअप के लिए ंयूनतम 3-5 मिनट के लिए स्थिर करने की अनुमति दें । अस्थिर संकेतों के साथ मामलों में, स्थिरीकरण समय 15 मिनट के लिए बढ़ाया जा सकता है ।
- यह सुनिश्चित करने के लिए कि रक्तस्राव नहीं हो रहा है cannulation साइट को समय पर जांचें ।
नोट: जब एक दबाव transducer से डेटा प्राप्त करने, यह जानवर के दिल के स्तर पर transducer जगह महत्वपूर्ण है ।
6. भूतल ईसीजी
- द्विध्रुवी ईसीजी के तीन सुराग की जांच करने के लिए सुनिश्चित करें कि सकारात्मक, नकारात्मक, और संदर्भ प्लेटिनम इलेक्ट्रोड बरकरार हैं ।
- बाएं foreleg, दायां foreleg, और दायां hindleg (चित्र 5) में चमड़े की लीड संमिलित करें ।
- १,००० हर्ट्ज और 3 की फ़िल्टर आवृत्ति-500 हर्ट्ज के नमूने आवृत्ति के साथ एक कस्टम-निर्मित ईसीजी एम्पलीफायर के लिए इलेक्ट्रोड हब संलग्न. ईसीजी रिकॉर्डिंग के दौरान स्थिर सुराग रखें. ईसीजी लीड की गति अस्थिर आधार रेखा और कलाकृतियों का उत्पादन कर सकते हैं ।
7. प्रयोग को पूरा करने के बाद पशु इच्छामृत्यु
- बीपी और ईसीजी रिकॉर्डिंग पूरी करने के बाद अधिग्रहण की व्यवस्था बंद कर दें । इलेक्ट्रोड निकालें । पीई कैथेटर को वापस लेने के बाद पहले से रखा सिल्क स्ट्रिंग को सही से कस कर ऊरु धमनी को Ligate ।
- चूहों को व्यक्तिगत रूप से दिखाई देने वाली इच्छामृत्यु को संकुचित कार्बन डाइऑक्साइड (CO2) गैस सिलेंडर से जुड़े चैंबर में रखें । शीर्ष सुरक्षित रूप से सील ।
- परिचय १००% के बारे में 10% की एक भरने की दर से प्रति मिनट चैंबर की मात्रा का 30% से2 सह ।
- चूहे पर अपनी आंखें रखो; श्वसन और फीका आंखों का रंग की कमी 2 − 3 मिनट के भीतर दिखाई देनी चाहिए ।
नोट: यदि श्वसन आंदोलन की समाप्ति 3 मिनट के बाद नहीं होती है, तो सिस्टम चैंबर भरण दर, सह2 आपूर्ति, या लीक के लिए जांच की जानी चाहिए । - 1 अधिक मिनट के लिए कक्ष के लिए सह2 प्रवाह बनाए रखने के बाद श्वसन रहता है ।
- हृदय और सांस की गिरफ्तारी और नोट निश्चित और फैली हुई विद्यार्थियों का पता लगाने के लिए मौत की पुष्टि ।
नोट: यदि चूहा मरा नहीं है लेकिन सह2 narcosis में, ऐसी द्विपक्षीय thoracotomy के रूप में इच्छामृत्यु की एक द्वितीयक विधि का उपयोग करें ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
हम राष्ट्रीय प्रयोगशाला पशु केंद्र (ताइपे, ताइवान) से SHR और normotensive Wistar-क्योटो WKY चूहों खरीदा है । सभी जानवरों को एक तापमान नियंत्रित सुविधा में रखा गया था (20 − 22 ° c) एक 12 ज लाइट/अंधेरे चक्र पर पानी और मानक चाउ के लिए नि: शुल्क पहुंच के साथ ।
हमने ६ ४७ सप्ताह पुराने चूहों का इस्तेमाल किया और उन्हें बीपी और ईसीजी माप से पहले तौला गया । SHR और WKY में ईसीजी और बीपी की एक साथ रिकॉर्डिंग से प्रतिनिधि अनुरेखण चित्रा 6में दिखाया गया है । 1 तालिका BP और हृदय की दर के लिए पैरामीटर्स दिखाता है । सांख्यिकीय (टी) परीक्षणों से पता चला काफी अधिक सिस्टोलिक बीपी और SHR में बीपी मतलब (१२४.५ mmHg ± १५.१ mmHg और ८४.३ mmHg ± ५.० mmHg) से WKY में (९०.० mmHg ± ७.५ mmHg और ६७.५ mmHg ± ५.० mmHg) (पी < ०.०५) (तालिका 1) ।
पी वेव, पीआर अंतराल, क्यूआर चौड़ाई, और क्यूटी अंतराल के मापदंडों ईसीजी रिकॉर्डिंग (तालिका 2) से मापा जा सकता है । ईसीजी इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट (दाहिने हिंद अंग पर) के संबंध में सही बनाम बाएँ ऊरु cannulation के विकल्प बीपी या ईसीजी संकेतों को प्रभावित नहीं किया.
चित्रा 1: सामग्री । (क) दाँतों से संदंश, (ख) शल्य कैंची, (ग) टिशू संदंश, (घ) ठीक सुझावों के साथ ऊतक संदंश, (ङ) कोण टिप संदंश, (च) बुलडॉग संवहनी दबाना, (छ) रेशमी तार, (ज) माइक्रो कैंची, (I) पॉलीथीन कैथेटर एक 26 जी एक्स 1/2 ' सुई के साथ जोड़ने और एक तीन तरह टोंटी (जे), (कश्मीर) दबाव transducer तीन तरह से टोंटी के साथ जोड़ने, (एल) एक टोंटी के साथ पारा रक्तदाबमापी ( हरे तीर) और एक हवा रिसाव वाल्व (सफेद तीर) के साथ मुद्रास्फीति बल्ब । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2: ऊरु धमनी विच्छेदन के लिए सतह मील का पत्थर । (एक) बाएं वंक्षण क्रीज के साथ लापरवाह चूहा एक धराशायी लाइन के साथ प्रकाश डाला । (ख) कमर त्वचा दांत के साथ संदंश द्वारा उठाया को शल्य कैंची से काट सकता है । (ग) ऊरु धमनी विच्छेदन के लिए शल्य अंचल. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3: ऊतक विच्छेदन और ऊरु धमनी के cannulation । (एक) उजागर ऊरु तंत्रिका (पीला तीर), ऊरु नस (नीला तीर), और ऊरु धमनी (लाल तीर) ऊतक विच्छेदन के बाद. (ख) तंत्रिका कट-ऑफ के बाद ऊरु नस और धमनी । (ग) विच्छेदित ऊरु धमनी के कपालीय टर्मिनल पर एक बुलडॉग संवहनी दबाना के आवेदन । (घ) एक बुलडॉग दबाना और ढीले संबंधों के साथ दो रेशम के तार के साथ ऊरु धमनी । (ङ) ऊरु धमनी के ventral ओर एक छोटा सा छिद्र, माइक्रो कैंची का उपयोग करके बनाया गया. (च) ऊरु धमनी में पॉलीथीन कैथेटर का सम्मिलन. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 4: दबाव रिकॉर्डिंग के लिए ऊरु धमनी cannulation । इंट्रा धमनी प्रवेशनी (एक डैश्ड ग्रीन लाइन द्वारा हाइलाइट) heparinized खारा के साथ भरा सीरिंज के साथ २ ३ तरह stopcocks (नीले तीर) के साथ जुड़ा हुआ है । प्रेशर transducer (लाल तीर) तीन तरह के stopcocks के माध्यम से cannulation से जुड़ा हुआ है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 5: इनवेसिव ऊरु धमनी दबाव और जी॰ के लिए पूरे प्रयोगात्मक सेटअप. तीन electrocardiographic लीड (लाल तीर) प्लैटिनम सुई इलेक्ट्रोड के साथ द्विपक्षीय सामने पैर और दाहिने पैर (पीले तीर) पर डाला । cannulation के साथ उजागर सही ऊरु धमनी (नीला तीर) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 6: प्रतिनिधि अनुरेखण । ईसीजी के एक साथ रिकॉर्डिंग और WKY में बीपी (बाएँ) और ईसीजी (ऊपर) के लिए SHR (दाएँ), और धमनी दबाव तरंगों (नीचे). कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
| WKY | SHR | P मान | |
| (n = 3) | (n = 3) | ||
| वजन, जी | ४०७.७ ± ६.४ | ३५३.७ ± १०.३ | < 0.01 |
| हृदय गति, लैंडलाइंस | २४१.३ ± १५.० | २६२.० ± १५.७ | ०.१८ |
| सिस्टोलिक बीपी, mmHg | ९०.० ± ७.५ | १२४.५ ± १५.१ | < 0.05 |
| डायस्टोलिक बीपी, mmHg | ५६.३ ± ४.० | ६४.२ ± ०.६ | ०.०८ |
| मतलब बीपी, mmHg | ६७.५ ± ५.० | ८४.३ ± ५.० | < 0.05 |
| नाड़ी दाब, mmHg | ३३.६ ± ४.४ | ६०.४ ± १५.१ | ०.०८ |
तालिका 1: इनवेसिव ऊरु धमनी cannulation द्वारा मापा रक्त दबाव का स्तर । डेटा मतलब ± मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं; SHR = अनायास ग्रस्त चूहों; WKY = Wistar-क्योटो चूहों; बीपी = ब्लड प्रेशर ।
| WKY | SHR | P मान | |
| (n = 3) | (n = 3) | ||
| हृदय गति, लैंडलाइंस | २४१.३ ± १५.० | २६२.० ± १५.७ | ०.१८ |
| पी वेव, msec | ३८.७ ± ९.३ | ४३.० ± ४.६ | ०.५२ |
| पीआर अंतराल, msec | ५९.० ± ७.८ | ६१.३ ± ४.७ | ०.६९ |
| क्यूआर चौड़ाई, msec | ४३.० ± ११.३ | ५०.० ± २.६ | ०.४ |
| क्यूटी अंतराल, msec | ११२.० ± १२.८ | ११६.७ ± ९.५ | ०.१५ |
तालिका 2: electrocardiographic पैरामीटर्स की माप । डेटा मतलब ± मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं; SHR = अनायास ग्रस्त चूहों; WKY = Wistar-क्योटो चूहे ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
इनवेसिव धमनी cannulation बीपी की अत्यधिक सटीक माप की अनुमति देता है । यह एक महंगा कैथेटर की आवश्यकता के बिना एक पीई ट्यूब के साथ किया जा सकता है । इनवेसिव बीपी माप भी सतह ईसीजी की एक रिकॉर्डिंग के साथ एक साथ किया जा सकता है ।
इस विधि के लिए प्रमुख अधिगम वक्र छोटे रक्त वाहिकाओं cannulate करने के लिए आवश्यक प्रयोगात्मक कौशल है । अनुभवी हाथों में, ऊरु धमनी cannulation के लिए सफल दर १००% दृष्टिकोण कर सकते हैं । अभ्यास वास्तविक प्रयोगों के प्रदर्शन से पहले की सिफारिश की है । प्रक्रिया के दौरान कुछ उल्लेखनीय अंक: (1) सुनिश्चित करें कि पशु शल्य चिकित्सा शुरू करने से पहले पूरी तरह से anesthetized हैं; (2) व्यापक रक्तस्राव को रोकने के लिए धमनी की दीवार को काटने से पहले उजागर धमनी की उच्च स्थिति में एक बुलडॉग दबाना का उपयोग करें; (३) केवल धमनी की ventral दीवार पर चीरा लगाकर और पृष्ठीय दीवार को हानिकारक बनाने से बचें; और (4) cannulation प्रणाली और electrocardiographic सुराग की स्थिर नियुक्ति रिकॉर्डिंग के दौरान गति कलाकृतियों से बचने में मदद करता है ।
इस प्रक्रिया के साथ संभावित जटिलताओं सर्जिकल विच्छेदन से नकसीर शामिल हैं । एक धमनी की एक सफल और चिकनी cannulation में नकसीर बहुत तुच्छ है । प्रमुख नकसीर ऊरु धमनी या नस या ऊतक विच्छेदन के दौरान प्रमुख शाखाओं को आकस्मिक क्षति के कारण हो सकता है । नकसीर एक स्पष्ट कपास की गेंद के साथ फोकल संपीड़न द्वारा रोका जा सकता है । प्रमुख रक्तस्राव का एक अंय कारण ऊरु cannulation का विस्थापन है । इस मामले में, रक्त की कमी आमतौर पर काफी बड़ी प्रणालीगत बीपी में एक महत्वपूर्ण गिरावट में परिणाम है । इस बिंदु पर, बीपी रिकॉर्डिंग जल्दी समाप्त किया जा सकता है ।
Telemeter आरोपण भी इनवेसिव बीपी रिकॉर्डिंग8के लिए एक स्थापित तकनीक है । टेलीमेट्री के लाभ के प्रति सचेत, स्वतंत्र रूप से संयम या संज्ञाहरण की सीमाओं के बिना पशुओं को ले जाने में समय की अपेक्षाकृत लंबी अवधि में एक उच्च निष्ठा निरंतर रिकॉर्डिंग प्राप्त करने की क्षमता है । प्रत्यक्ष बीपी रिकॉर्डिंग रेडियो ट्रांसमीटरों और मन्या धमनी cannulation9के सफल उपचर्म आरोपण के साथ किया जा सकता है । हालांकि, यह telemeter सफलतापूर्वक प्रत्यारोपित करने के लिए चुनौतीपूर्ण हो सकता है और रेडियो टेलीमेट्री के लिए हार्डवेयर और सॉफ्टवेयर महंगा कर रहे हैं ।
ऊरु धमनी cannulation द्वारा इनवेसिव बीपी माप के लिए कुछ सीमाएं हैं । पहला, यह अनर्गल और सजग चूहों में नहीं किया जा सकता. दूसरा, ऊरु धमनी में बीपी मध्य महाधमनी में बीपी की तुलना में अधिक या कम हो सकता है । तीसरा, धमनी cannulation छोटे कुतर के लिए मुश्किल हो सकता है, जहां पीई ट्यूब डालने के लिए ऊरु धमनियों का भी छोटा हो सकता है । चौथा, cannulated धमनी बीपी रिकॉर्डिंग को पूरा करने के बाद ligated किया जाना चाहिए और ऊरु धमनी के बंधाव हिंद पैर ischemia में परिणाम होगा । इस सीमा के कारण, जानवरों आमतौर पर इनवेसिव बीपी रिकॉर्डिंग निम्नलिखित euthanized हैं ।
इनवेसिव ऊरु धमनी cannulation निरोधक की आवश्यकता है और पशुओं, जो संभवतः तनाव का परिचय और anesthetizing दोनों बीपी और जी॰ डेटा10प्रभावित करता है । तनाव उचित संज्ञाहरण से समाप्त किया जा सकता है । संज्ञाहरण इंजेक्शन या साँस लेना प्रोटोकॉल भी शामिल है । हमारे पिछले अनुभव में, आईएफसआई anesthetized WKY चूहों में उच्च ऊंचा बीपी पता चलता है कि जानवरों को तनाव में या दर्द में अभी भी थे । चेतन WKY चूहों में सामान्य बीपी 130/80 mmHg है; यह हमारी सांस लेना में १०० mmHg नीचे गिरा-anesthetized WKY चूहों (1 टेबल) । साँस लेना संज्ञाहरण (isoflurane) इंजेक्शन एजेंटों पर कई फायदे हैं: त्वरित शुरुआत, न्यूनतम पशु हैंडलिंग, नियंत्रण में आसानी, कोई नियंत्रित दवाओं, और एक त्वरित वसूली. नुकसान उपकरणों की लागत, काम के माहौल में पर्याप्त गैस रिसाव के साथ मामले में मानव जोखिम का खतरा है, और बीपी पर एक महत्वपूर्ण दमन प्रभाव । Isoflurane-प्रेरित बीपी में कमी को चुनने पर विचार किया जाना चाहिए संज्ञाहरण शासन ।
आगे अनुप्रयोगों इनवेसिव बीपी माप के लिए संभव हो रहे हैं । नाड़ी तरंग वेग (PWV) के लिए द्रव गतिशीलता सिद्धांतों के अनुसार, कठोरता धमनी तेजी से11पल्स लहर का प्रचार. मन्या धमनी और ऊरु धमनी पर डबल cannulations लागू करते हैं, महाधमनी PWV निर्धारित किया जा सकता है. महाधमनी पल्स प्रसार की लंबाई मन्या (समीपस्थ) और बाहर (ऊरु) धमनियों में प्रवेशनी के सुझावों के बीच की दूरी के रूप में मापा जा सकता है. PWV महाधमनी लंबाई और समीपस्थ और बाहर की धमनी दलहन12के न्यूनतम मूल्यों पर समय के बीच अंतर के बीच अनुपात है ।
प्रयोगात्मक चूहों में एक साथ जी॰ और अंतर-धमनी बीपी रिकॉर्डिंग के लिए ऊपर वर्णित सेटअप एक सस्ती और अत्यधिक सुलभ तकनीक है शारीरिक या औषधीय अध्ययन रोगजनक या चिकित्सकीय की जांच के लिए हृदय चिकित्सा में तंत्र ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
यह अध्ययन ताइवान विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय द्वारा समर्थित था सबसे 104-2314-b-037-080-MY3 और सबसे 107-2314-b-037-110 करने के लिए एचसीएल और ताइवान राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थानों अनुदान NHRI-EX107-10724SC ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polyethylene tube | BECTON DICKINSON | 427401 | internal diameter of 0.5 mm, outer diameter of 0.9 mm |
| 26 G x 1/2"" needle | TERUMO | 160426D | |
| Adson Forceps | TOP Line | 12-540 | 12 cm (4.75") Long, Straight, 1 x 2 Teeth |
| Bulldog vascular clamp | Teleflex | 357581 | 8 mm |
| Computer | AUSUS | X453M | |
| Exernal analog signal recording device | iWorx | T5141538 | This allows the recording of up to three channels of ECG, EMG or EEG as well as GSR (skin conductance) from a single iWire input on the recording Module. |
| Graefe Forceps | AESCULAP Surgical Instruments | BD312R | MICRO DRESSING FORCEPS, CURVED, SERRATED, 105 mm, 4 1/8 |
| Mecury sphygmomanometer | Spirit | CK-101 | |
| Pressure transducer | iWorx | IworxBP100 | |
| Semken Forceps | MEDE TECHNIK | 10-104 | 100 mm |
| Software | LabScribe3 | ||
| Surgical scissors | HEBU | 1714 | 14.5 cm long |
| Syringe (1 mL) | TERUMO | 160426D | |
| Three-way stopcocks | Cole-Parmer | EW-30600-23 | |
| Tipped forceps | World Precision Instruments | 504506 | 11 cm long, 0.1 x 0.06 mm Tips |
| Vannas Scissors | World Precision Instruments | 500086 | 8.5 cm long, Straight, 0.025 x 0.015 mm Tips, 7mm super fine Blades |
References
- Shiou, Y. -L., Huang, I. C., Lin, H. -T., Lee, H. -C. High fat diet aggravates atrial and ventricular remodeling of hypertensive heart disease in aging rats. Journal of the Formosan Medical Association. , (2017).
- Parasuraman, S., Raveendran, R. Measurement of invasive blood pressure in rats. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 3 (2), 172-177 (2012).
- Fink, G. D. Does Tail-Cuff Plethysmography Provide a Reliable Estimate of Central Blood Pressure in Mice? Journal of the American Heart Association: Cardiovascular and Cerebrovascular Disease. 6 (6), e006554 (2017).
- Wilde, E., et al. Tail-Cuff Technique and Its Influence on Central Blood Pressure in the Mouse. Journal of the American Heart Association: Cardiovascular and Cerebrovascular Disease. 6 (6), (2017).
- Braga, V. A., Prabhakar, N. R. Refinement of Telemetry for Measuring Blood Pressure in Conscious Rats. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science : JAALAS. 48 (3), 268-271 (2009).
- Kaese, S., Verheule, S. Cardiac electrophysiology in mice: a matter of size. Frontiers in Physiology. 3 (345), (2012).
- Okamoto, K., Aoki, K. Development of a strain of spontaneously hypertensive rats. Japanese Circulation Journal. 27, 282-293 (1963).
- Van Vliet, B. N., Chafe, L. L., Antic, V., Schnyder-Candrian, S., Montani, J. P. Direct and indirect methods used to study arterial blood pressure. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 44 (2), 361-373 (2000).
- Alam, M. A., Parks, C., Mancarella, S. Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry. Journal of Visualized Experiments. (111), e53991 (2016).
- Irvine, R. J., White, J., Chan, R. The influence of restraint on blood pressure in the rat. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 38 (3), 157-162 (1997).
- Nvd Vosse, F., Stergiopulos, N. Pulse Wave Propagation in the Arterial Tree. Annual Review of Fluid Mechanics. 43 (1), 467-499 (2011).
- Cosson, E., et al. Aortic stiffness and pulse pressure amplification in Wistar-Kyoto and spontaneously hypertensive rats. The American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 292 (5), H2506-H2512 (2007).
