Summary

Rotte Mammary Epithelial Celletransplantation i Interscapular White Fat Pad

Published: March 04, 2020
doi:

Summary

Denne artikel beskriver en transplantationmetode til graft donor rotte mælkeceller epitelceller i den interscapular hvide fedt pude af recipient dyr. Denne metode kan anvendes til at undersøge vært og/eller donorvirkninger på mælkeepiteludvikling og eliminerer behovet for forclearing og udvider dermed nytten af denne teknik.

Abstract

Så tidligt som i 1970’erne, forskere har med succes transplanteret mælkeceller epitelceller i den interscapular hvide fedt pad af rotter. Podning mammary epitel ved hjælp af transplantation teknikker udnytter det hormonelle miljø, som den unge gnaver vært. Disse undersøgelser er velegnet til at udforske virkningen af forskellige biologiske manipulationer på mælkekirtlen udvikling og dissekere mange aspekter af mælkekirtlen biologi. En fælles, men begrænsende, træk er, at transplanterede epitelceller er stærkt påvirket af den omgivende stroma og udkonkurreret af endogene epitel; for at udnytte indfødte mælkevæv, abdominal-inguinale hvide fedt pad skal ryddes for at fjerne vært mælkeepitel før transplantation. En stor hindring, når du bruger rotte model organismen er, at rydde udviklingslandene mælketræ i post-fravænnet rotter er ikke effektiv. Når transplanteret i kirtel-fri fedt puder, donor epitelceller kan genbefolke den ryddede vært fedt pad og danne en funktionel mælkekirtlen. Den interscapular fedt pad er et alternativt sted for disse grafts. En stor fordel er, at det mangler kanalstruktur endnu giver den normale stroma, der er nødvendig for at fremme epitel udvækst og er let tilgængelig i rotten. En anden stor fordel ved denne teknik er, at det er minimalt invasive, fordi det eliminerer behovet for at ætse og fjerne den voksende endogene mammary træ. Derudover indeholder den interscapulære fedtpude et mediale blodkar, der kan bruges til at adskille steder til podning. Fordi endogene kirtler forbliver intakt, denne teknik kan også bruges til undersøgelser sammenligne endogene mælkekirtlen til den transplanterede kirtel. Dette papir beskriver metoden til mælkeepitelcelletransplantation i den interscapular hvide fedt pude af rotter.

Introduction

Postnatal mammøkirtel udvikling og ductal morfogenese er processer i vid udstrækning påvirket af hormonelle signalering i begyndelsen af puberteten. Hos mus og rotter, almindeligt anvendte model organismer af mælkekirtlen biologi, denne proces begynder omkring 3 uger af alder, hvor hurtig spredning og differentiering resultere i dannelsen af den modne parenkym. Den modne mælkekirtlen kan gennemgå mange runder af ekspansion og involution, en ejendom, der har været under efterforskning siden begyndelsen af det20. Inden for rammerne af hyperproliferation og udvikling af kræft blev der i1950’erne udviklet mælkekirteltransplantationsteknikker , som blev forstærket af den kvantitative metode , som Gould et al. bidrog med i 19772,3,4. Raffinement af transplantation teknik i gnavere har bidraget til store fremskridt i forståelsen af normal mælkekirtlen biologi, der stadig er meget udbredt til at studere effekten af forskellige behandlinger og genetisk manipulation på normal mælkekirtlen udvikling og sygdom stater.

Mange hypoteser er blevet genereret og efterfølgende testet ved hjælp af mælkekirtlen transplantation, først beskrevet af DeOme et al. i 19591. Eksperimenter på tværs af flere årtier viste tilbøjeligheden af ductal væv punktafgifter fra donor mælkekirtler til at genbefolke hele fedt pad5,6,7 og viste, at en kritisk komponent af mælkekirtlen udvikling ligger i disse epitelstrukturer. Senere undersøgelser i mus viste, at en enkelt mælkestamceller kan genbefolke en renset fedtpude og bidrog til opdagelsen af en enkelt, almindelig stamforemand af basale og luminale mælkeceller8,9,10. I overensstemmelse med disse konklusioner, Er det blevet foreslået, at transplantation øger puljen af celler med multilineage-repopulating potentiale som følge af plasticitet, så podede celler til at vokse en funktionel mælkekirtlen7,10,11,12,13. Det er vigtigt, at brugen af transplantationsteknikker i gnavere overvinder begrænsningerne af cellekultur-inducerede abnormiteter14 og giver ofte resultater på bare et spørgsmål om uger.

Mens proceduren oprindeligt blev beskrevet i forbindelse med præoplastiske læsioner i mus, blev den hurtigt udvidet til rotter og anvendt i forbindelse med behandlingen med kræftfremkaldende stoffer for at etablere mangfoldighed som et mål for kræftfølsomhed15, men populariteten af transplantationsteknikker har fulgt udviklingen af genetiske værktøjer for hver art. Selv om mus undersøgelser indarbejde transplantation har bidraget mange translationelle resultater, parenkym af rotte mælkekirtlen ligner det menneskelige tættere16,17 og tilbyder klare fordele for at studere østrogen receptor-positiv (ER +) brystkræft. Mammary tumorer er utilgængelige i begge arter, men de adskiller sig med hensyn til hormon følsomhed og genekspression profiler. En primær forskel er, at rotte mælketumorer udtrykke og afhænge af funktionen af æggestokkene og hypofyse hormon receptorer, nemlig østrogen og progesteron (PR), svarende til luminal-A subtype af human brystkræft. Faktisk, mammary epitelcelletransplantation, som beskrevet i denne protokol, er blevet brugt til at studere genetiske varianter involveret i brystkræft og bestemme cellulære autonomi virkninger på mælkeepitelceller18.

Ud over tumorbiologi, kanalen epitel af den normale rotte mælkekirtlen udviser et højere niveau af forgrening og er flankeret af et tykkere lag af stroma end musen. Betydningen af stroma er veldokumenteret i mælkeepiteltransplantationsundersøgelser. Mammary epitel skal interagere med fede stroma, og ideelt set sin egen mesenchyme, at gennemgå sin karakteristiske morfogenese19,20. Podning væv i en modtager mælkekirtlen giver et optimalt miljø; tilstedeværelsen af endogenepitel kan dog forstyrre resultaterne. Preclearing mælkekirtlen af endogene epitel er almindeligt udført i mus transplantation assays og kræver kirurgisk excision af endogene mælkevæv og / eller fjernelse af brystvorten1,21,22. Selv om det er muligt, preclearing mælkeepitel i post-fravænning rotter er ikke så almindeligt udført, hovedsagelig på grund af ineffektivitet clearing den voksende mælketræ i post-fravænning rotter. Da det har vist sig, at regioner med fedtvæv andre steder i kroppen kunne støtte væksten af transplanteret mælkeepitel21,23,24, processen med preclearing kan let undgås i rotter ved podning væv i interscapular hvid fedt pad.

Den transplantationsmetode, der er beskrevet i dette papir, indebærer injektion af enzymatisk adskilte mælkekirtelorider (fragmenter af mælkeductal epitel og andre celler, der kan mororegenese) eller monopergers celler i den interscapular fedtpude, der er indavlet, isogene eller kongene stammer af laboratorierotter2. Fordi interscapular fedt pad er normalt blottet for mælkevæv, det giver et passende miljø for flere transplantationssteder uden at det er nødvendigt at præ-klar endogene epitel. Som følge heraf er værtsdyrets endogene, abdominale mønelle mælkekirtler ikke underlagt kirurgisk manipulation, udvikler sig normalt og kan ikke forstyrre fortolkningen af resultaterne. Derudover, den intakte mælkekirtler kan bruges til sammenligning for at evaluere vært versus donor effekter på mælkeepitel udvikling og tumorigenese18,25. Selv om genindsættelse af mælkekirtlen fra en enkelt stamcelle er tilgængelig for mus, det er endnu ikke blevet udviklet til rotte, hovedsagelig på grund af den manglende tilgængelighed af antistoffer til at vælge for rotte mælkestamceller25,26,27. På trods af dette kan transplantation af monodispersed mælkeepitelceller til kvantificering af genbefolkende potentiale udføres med succes, og disse celler vil udvikle sig normalt, når de podes ind i den relevante ramme2,3,4. Mens organoider er gode til mange formål, monodispersed celler er nødvendige for kvantitative anvendelser, for eksempel, at bestemme antallet af mælkeepitelceller, der kræves for kræft indledningen efter ioniserende strålebehandling28 eller for at sammenligne karakteristika flow cytometrisk udvalgte mælkeceller epitelcellepopulationer29.

Til dato, den procedure, der er beskrevet her er den mest robuste metode til at udføre mælkekirtlen transplantation i rotten med et overordnet mål om at studere mælkekirtlen udvikling og mekanismer, der ligger til grund for brystkræft udvikling. Donor- og/eller recipientdyrene udsættes ofte for forskellige variabler før, under eller efter den epiteltransplantation. Som eksempler kan nævnes enkeltgensundersøgelser , der involverer kemisk carcinogenese30, stråling28,31,32, genetisk manipulation af værts-/donorgenom18og hormonmanipulation12. En stor fordel ved den enzymatiske dissociation, der er beskrevet i denne protokol, er muligheden for at isolere epitelorier eller monodispersed celler til komplementære eksperimenter, der involverer flowcytometri, 3D-kultur, genredigering og meget mere. Fremtidige anvendelser af denne teknik vil omfatte yderligere manipulation af donor og / eller vært væv med genteknologi. For eksempel kan donorceller genetisk ændres ex vivo på enhver valgt genomisk locus ved hjælp af CRISPR-Cas9 genredigeringssystem. Tilsvarende kan recipient rotter også genetisk ændres for at studere samspillet mellem donor og modtager manipuleret genetiske faktorer.

Protocol

Alle dyr blev anbragt og vedligeholdt i et AAALAC-godkendt anlæg, og forsøg, der er beskrevet i denne protokol, blev godkendt af MUSC Institutional Animal Care & Use Committee (IACUC). Dyr til gensidig transplantation bør være en indavlet eller isogen stamme med genkogen status foretrukket eller tilbagekrydset i mindst 6 generationer. 1. Høst donor rotte mælkekirtlen epitel Bestemme antallet af donor rotter er nødvendige for transplantation.BEMÆRK: Generelt kan 1 donorrot…

Representative Results

Donor og modtager mælkekirtlerTrinene til at isolere og forberede rottemælkeepitelceller til transplantation er vist i figur 1A. Ved 4 ugers alderen er donorrottens endeogene mælkekirtlen begyndt modning, og epitel kan visualiseres på hele monterede dias, der er plettet med alumcarmin (figur 1B). En donor rotte i denne alder vil give ca 1 x 10…

Discussion

Denne protokol beskriver en mælkeepitelcelletransplantationsteknik, der er optimeret til at arbejde med rotter. Isolerede mælkeepitelorier fra donorrotter (3-5 uger) podes ind i den interscapular hvide fedtpude af recipientrotter (også 3-5 uger). Resultaterne kan fortolkes så lidt som 4-6 uger senere, ved hjælp af lys mikroskopi til at undersøge podet væv; den optimale tid mellem transplantation og ofring skal dog fastsættes, inden der gennemføres et fuldstændigt eksperiment. Hvis der er gået for lidt eller fo…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dette arbejde blev finansieret af Hollings Cancer Center’s Cancer Center Support Grant P30 CA138313 pilot forskning finansiering fra National Institutes of Health (https://www.nih.gov/), og midler fra Institut for Patologi & Laboratory Medicine ved Medical University of South Carolina. Vi vil gerne takke Marijne Smiths for at optage interviewudtalelserne.

Materials

0.2 µM syringe filters Fisher Scientific 09-715G sterile-filtering collagenase digestion media
1.5 – 2.0 mL microcentrifuge tubes (sterile) Fisher Scientific 05-408-129 containing resuspended cells and/or brain homogenate mixture
100 µM cell strainers Corning 431752 filtering brain homogenate
100 uL gastight syringes with 25 gauge needles Hamilton 81001 & 90525 For injecting graft mixture into recipient animals (1 per donor genotype/condition)
1000 uL pipette tips + pipette transferring cells/mixtures/tissue
15 mL polypropylene tube Falcon (Corning) 352196 brain homogenate mixture storage, or cell : homogenate mixture for transplantation
40 µM cell strainers Corning 431750 filtering organoids after washing the cell pellet
50 mL polypropylene tubes Fisher Scientific 05-539-6 for collagenase digestion of donor mammary gland tissue
60 mm dishes Thermo Scientific 130181 for mincing tissue
Alum Potassium Sulfate Sigma-Aldrich 243361/237086 staining mammary gland whole mount slides
Anesthesia vaporizer for veterinary use follow institutional protocol
Beta-dine or iodine
Borosilicate glass culture tube for homogenization Fisher Scientific 14-961-26 for homogenization of brain (use appropriate tube for homogenizer)
Carmine Sigma-Aldrich C6152/1022 staining mammary gland whole mount slides
Cell counting apparatus
Clean animal cages for recovery follow institutional protocol
Collagenase Type 3 Worthington Biochemical Corp. LS004183 enzymatic digestion of minced mammary gland tissue from donor rats
deionized water for chemical solutions
DMEM/F12 GIBCO 11320033 for mincing tissue, collagenase digestion media and resuspending epithelial cell mixtures
EDTA monodispersion mixture
Ethanol, 200 Proof Decon Labs 2705/2701 mammary whole mount slide fixative, mammary whole mount slide washes, cleaning surgical incision sites (diluted)
Fetal Bovine Serum (FBS) Hyclone inactivation solution
Gauze
Glacial acetic acid Fisher Scientific A38-212 use for mammary whole mount slide fixative (1:4 glacial acetic acid in 100% ethanol)
HBSS GIBCO monodispersion mixture
Heating pads follow institutional protocol
Ice buckets (x2)
Incubator with orbital rotation must be capable of maintaining 37°C, shaking at 220-225 RPM (for collagenase digestion of mammary tissue)
Isoflurane anesthesia follow institutional protocol
Light microscope or digital camera visualizing whole mounted mammary epithelium and/or acquiring images
Mechanical homogenizer Fisher Scientific TissueMiser or alternative models
Mineral oil, pure Sigma-Aldrich/ ACROS Organics 8042-47-5 long-term storage of cleared mammary gland whole mounts
Oxygen tanks for anesthesia vaporizer follow institutional protocol
Paper towels or delicate task wipes
Positively-charged microscope slides Thermo Scientific P4981-001 mammary gland tissue whole mounts
Postoperative analgesic Institutional protocol
Scale body weight measurements of animals, proper dosing of pain medication
Shaver electric clippers, or other
Staining jars minimum of 1 per chemical wash, size appropriate for the number of slides, glass preferred
Sterile field drapes IMCO 4410-IMC used during transplantation
Sterile scissors and forceps x3 (autoclaved) autoclave surgical tools used for donors and recipients
Syringes: 5 mL (or greater) for sterile filtration of collagenase digestion media
Trypsin Worthington monodispersion mixture
Waste collection receptacle for liquids (poured or aspirated)
Wound clip applier, clips, and removal tool Fine Science Tools 12020-00 Closing the skin incision over the interscapular white pad pad
Xylenes Fisher Scientific X3S-4 clearing mammary gland whole mount slides after staining

References

  1. DeOme, K. B., Faulkin, L. J., Bern, H. A., Blair, P. B. Development of Mammary Tumors from Hyperplastic Alveolar Nodules Transplanted into Gland-free Mammary Fat Pads of Female C3H Mice. Cancer Research. 19 (5), 515-520 (1959).
  2. Gould, M. N., Biel, W. F., Clifton, K. H. Morphological and quantitative studies of gland formation from inocula of monodispersed rat mammary cells. Experimental Cell Research. 107 (2), 405-416 (1977).
  3. Gould, M. N., Clifton, K. H. The Survival of Mammary Cells Following Irradiation in Vivo A Directly Generated SingleDose-Survival Curve. Radiation Research. 72 (2), 343 (1977).
  4. Gould, M. N., Clifton, K. H. The survival of rat mammary gland cells following irradiation in vivo under different endocrinological conditions. International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 4 (7-8), 629-632 (1978).
  5. Hoshino, K., Gardner, W. U. Transplantability and Life Span of Mammary Gland during Serial Transplantation in Mice. Nature. 213 (5072), 193-194 (1967).
  6. Ormerod, E. J., Rudland, P. S. Regeneration of mammary glands in vivo from isolated mammary ducts. Development. (96), 229-243 (1986).
  7. Smith, G. H., Medina, D. A morphologically distinct candidate for an epithelial stem cell in mouse mammary gland. Journal of Cell Science. 90 (1), 173 (1988).
  8. Shackleton, M., et al. Generation of a functional mammary gland from a single stem cell. Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).
  9. Sleeman, K. E., Kendrick, H., Ashworth, A., Isacke, C. M., Smalley, M. J. CD24 staining of mouse mammary gland cells defines luminal epithelial, myoepithelial/basal and non-epithelial cells. Breast Cancer Research. 8 (1), R7 (2006).
  10. Stingl, J., et al. Purification and unique properties of mammary epithelial stem cells. Nature. 439 (7079), 993-997 (2006).
  11. Kordon, E. C., Smith, G. H. An entire functional mammary gland may comprise the progeny from a single cell. Development. 125 (10), 1921-1930 (1998).
  12. Kamiya, K., Gould, M. N., Clifton, K. H. Quantitative studies of ductal versus alveolar differentiation from rat mammary clonogens. Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 219 (3), 217-225 (1998).
  13. Kim, N. D., Oberley, T. D., Yasukawa-Barnes, J., Clifton, K. H. Stem cell characteristics of transplanted rat mammary clonogens. Experimental Cell Research. 260 (1), 146-159 (2000).
  14. Daniel, C. W. Growth of Mouse Mammary Glands in vivo after Monolayer Culture. Science. 149 (3684), 634 (1965).
  15. Beuving, L. J., Faulkin, L. J., DeOme, K. B., Bergs, V. V. Hyperplastic Lesions in the Mammary Glands of Sprague-Dawley Rats After 7,12-Dimethylbenz[a]anthracene Treatment. Journal of the National Cancer Institute. 39 (3), 423-429 (1967).
  16. Russo, J., Rubin, E., Damjanov, I., et al. Comparative Study of Human and Rat Mammary Tumorigenesis. Pathology Reviews. , 217-251 (1990).
  17. Nandi, S., Guzman, R. C., Yang, J. Hormones and mammary carcinogenesis in mice, rats, and humans: a unifying hypothesis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (9), 3650-3657 (1995).
  18. Ding, L., et al. Deletion of Cdkn1b in ACI rats leads to increased proliferation and pregnancy-associated changes in the mammary gland due to perturbed systemic endocrine environment. PLoS Genetics. 15 (3), e1008002 (2019).
  19. Sakakura, T., Nishizuka, Y., Dawe, C. Mesenchyme-dependent morphogenesis and epithelium-specific cytodifferentiation in mouse mammary gland. Science. 194 (4272), 1439-1441 (1976).
  20. Sakakura, T., Sakagami, Y., Nishizuka, Y. Dual origin of mesenchymal tissues participating in mouse mammary gland embryogenesis. Developmental Biology. 91 (1), 202-207 (1982).
  21. Faulkin, L. J., Deome, K. B. Regulation of Growth and Spacing of Gland Elements in the Mammary Fat Pad of the C3H Mouse. Journal of the National Cancer Institute. 24, 953-969 (1960).
  22. Brill, B., Boecher, N., Groner, B., Shemanko, C. S. A sparing procedure to clear the mouse mammary fat pad of epithelial components for transplantation analysis. Laboratory Animals. 42 (1), 104-110 (2008).
  23. Hoshino, K. Morphogenesis and growth potentiality of mammary glands in mice. I. Transplantability and growth potentiality of mammary tissue of virgin mice. Journal of the National Cancer Institute. 29, 835-851 (1962).
  24. Hoshino, K. Regeneration and growth of quantitatively transplanted mammary glands of normal female mice. The Anatomical Record. 150 (3), 221-235 (1964).
  25. Smits, B. M. G., et al. The Gene Desert Mammary Carcinoma Susceptibility Locus Mcs1a Regulates Nr2f1 Modifying Mammary Epithelial Cell Differentiation and Proliferation. PLOS Genetics. 9 (6), e1003549 (2013).
  26. Kim, N. D., Clifton, K. H. Characterization of rat mammary epithelial cell subpopulations by peanut lectin and anti-Thy-1.1 antibody and study of flow-sorted cells in vivo. Experimental Cell Research. 207 (1), 74-85 (1993).
  27. Kim, N. D., Oberley, T. D., Clifton, K. H. Primary culture of flow cytometry-sorted rat mammary epithelial cell (RMEC) subpopulations in a reconstituted basement membrane, Matrigel. Experimental Cell Research. 209 (1), 6-20 (1993).
  28. Clifton, K. H., Tanner, M. A., Gould, M. N. Assessment of radiogenic cancer initiation frequency per clonogenic rat mammary cell in vivo. Cancer Research. 46 (5), 2390-2395 (1986).
  29. Sharma, D., et al. Quantification of epithelial cell differentiation in mammary glands and carcinomas from DMBA- and MNU-exposed rats. PLoS One. 6 (10), e26145-e26145 (2011).
  30. Smits, B. M. G., et al. The non-protein coding breast cancer susceptibility locus Mcs5a acts in a non-mammary cell-autonomous fashion through the immune system and modulates T-cell homeostasis and functions. Breast Cancer Research. 13 (4), R81-R81 (2011).
  31. Gould, M. N., Clifton, K. H. Evidence for a Unique in Situ Component of the Repair of Radiation Damage. Radiation Research. 77 (1), 149-155 (1979).
  32. Kamiya, K., Clifton, K. H., Gould, M. N., Yokoro, K. Control of ductal vs. alveolar differentiation of mammary clonogens and susceptibility to radiation-induced mammary cancer. Journal of Radiation Research. 32 (Suppl 2), 181-194 (1991).
  33. Sharma, D., et al. Effective flow cytometric phenotyping of cells using minimal amounts of antibody. BioTechniques. 53 (1), 57-60 (2012).
  34. Hewitt, H. B., Blake, E., Proter, E. H. The Effect of Lethally Irradiated Cells on the Transplantability of Murine Tumours. British Journal of Cancer. 28 (2), 123-135 (1973).
  35. Peters, L. J., Hewitt, H. B. The Influence of Fibrin Formation on the Transplantability of Murine Tumour Cells: Implications for the Mechanism of the Révész Effect. British Journal of Cancer. 29 (4), 279-291 (1974).
  36. Zhang, R., Haag, D., Gould, M. N. Quantitating the frequency of initiation and cH-ras mutation in in situ N-methyl-N-nitrosourea-exposed rat mammary gland. Cell Growth & Differentiation. 2 (1), 1-6 (1991).
  37. Berry, D. C., Stenesen, D., Zeve, D., Graff, J. M. The developmental origins of adipose tissue. Development. 140 (19), 3939-3949 (2013).
  38. Tchkonia, T., et al. Fat depot origin affects adipogenesis in primary cultured and cloned human preadipocytes. American Journal of Physiology – Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 282 (5), R1286-R1296 (2002).
  39. Tchkonia, T., et al. Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots. Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).
  40. Sanchez-Gurmaches, J., et al. PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors. Cell Metabolism. 16 (3), 348-362 (2012).
  41. Hoshino, K. Transplantability of mammary gland in brown fat pads of mice. Nature. 213 (5072), 194-195 (1967).
  42. Sakakura, T., Sakagami, Y., Nishizuka, Y. Persistence of responsiveness of adult mouse mammary gland to induction by embryonic mesenchyme. Developmental Biology. 72 (2), 201-210 (1979).
  43. Alston-Mills, B., Rivera, E. M. Factors influencing differential growth of rat mammary tumor fragments and cells transplanted in gland-free and gland-containing mammary fat pads. European Journal of Cancer and Clinical Oncology. 21 (10), 1233-1243 (1985).
  44. Neville, M. C., Medina, D., Monks, J., Hovey, R. C. The mammary fat pad. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 3 (2), 109-116 (1998).
  45. Smits, B. M. G., et al. The Gene Desert Mammary Carcinoma Susceptibility Locus Mcs1a Regulates Nr2f1 Modifying Mammary Epithelial Cell Differentiation and Proliferation. PLoS Genetics. 9 (6), e1003549 (2013).

Play Video

Cite This Article
Shunkwiler, L. B., Haag, J. D., Gould, M. N., Smits, B. M. G. Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad. J. Vis. Exp. (157), e60401, doi:10.3791/60401 (2020).

View Video