Summary

Мышь Модель неполно резекированных мягкая ткань саркома для тестирования (Neo) адъювантной терапии

Published: July 28, 2020
doi:

Summary

В этом протоколе мы описываем модель мыши неполной хирургической резекции саркомы мягких тканей для тестирования (нео)адъювантной терапии.

Abstract

Хирургия часто является первым методом лечения многих твердых опухолей. Тем не менее, местные рецидивы часто происходят после первичной резекции опухоли, несмотря на адъювантные или нео-адъювантные терапии. Это происходит, когда хирургические поля недостаточно без опухоли, в результате чего остаточные раковые клетки. С биологической и иммунологической точки зрения, хирургия не является нулевым событием; рана исцеления окружающей среды, как известно, вызывают как про-и противоопухолевых путей. Как следствие, доклинические модели для разработки лекарств, направленных на предотвращение местного рецидива должны включать хирургической резекции при тестировании новых (нео)адъювантной терапии, для моделирования клинических условий у пациентов, получавших хирургическое вмешательство.

Здесь мы описываем модель мыши неполной хирургической резекции саркомы мягких тканей WEHI 164, которая позволяет тестировать (нео)адъювантные терапии в установке реакции заживления ран. В этой модели, 50% или 75% опухоли удаляется, оставляя некоторые ткани рака на месте для моделирования валового остаточного заболевания после операции в клинических условиях. Эта модель позволяет тестирование терапии в контексте хирургии, а также с учетом раны исцеления ответ, который может повлиять на эффективность (нео) адъювантных методов лечения. Неполная хирургическая резекция приводит к воспроизводимой отрастающей опухоли у всех мышей при отсутствии адъювантной терапии. Адъювантное лечение блокадой контрольно-пропускных пунктов приводит к уменьшению отрастания опухоли. Эта модель, таким образом, подходит для тестирования терапии в контексте хирургии debulking и связанных с ней раны исцеления ответ и может быть распространена на другие виды твердого рака.

Introduction

Хирургия остается основным вариантом лечения для многих твердых опухолей1, в том числе саркома мягких тканей2,3. Несмотря на улучшения в методах хирургии рака, и комбинации с (нео) адъювантной терапии, есть еще высокий риск рецидива рака и метастазов после первичной резекции опухоли4,5. В саркоме мягких тканей рецидивы возникают особенно локорегически, в месте проведения операции, что приводит к повышенной заболеваемости и смертности. В клинических условиях может быть трудно получить достаточно широкие поля (например, из-за анатомических ограничений), что приводит к неполной резекции и последующему рецидиву опухоли6. Хирургическое напряжение и последующий процесс заживления ран, как известно, создают иммуносупрессивную микроокироволиню опухоли, благоприятную для рецидива опухоли7,,8. Поэтому при открытии и разработке новых методов лечения саркомы мягких тканей, особенно иммунотерапии, следует в идеале учитывать хирургическую реакцию на заживление ран.

Большинство доклинических исследований для адъювантной терапии первоначально проводятся с использованием подкожной сингенной или ксенотрансплантации мыши модели, без включения хирургического стресса и раны исцеления ответ9,10. Поэтому мы разработали сингенную подкожную модель саркомы мягких тканей мыши, включающую неполную хирургическую резекцию. WEHI 164 фиброзаркома клетки прививки подкожно, и как только опухоли установлены, мы удаляем 50-75% опухоли навалом (Рисунок 1A-E). Опухоли постоянно вновь растут из оставшейся опухоли. Эта модель позволяет для тестирования адъювантной терапии при рассмотрении эффекта хирургического стресса и заживления ран. Аналогичные хирургические модели неполной резекции были использованы в ряде исследований несколькими группами и оказались воспроизводимыми и эффективными11,12,13. Здесь мы предоставляем подробное описание этого протокола.

Protocol

Звери, использовавшиеся в этих экспериментах, были получены из Центра ресурсов для животных (Перт, Западная Австралия). В Северном фонде медицинских исследований Имени Гарри Перкинса (Perth, Западная Австралия) животные находились в стандартных условиях, свободных от патогенов. Все экспе?…

Representative Results

Рост опухоли размером 50 мм2 является идеальным размером для частичного дебулка. Неполная хирургическая резекция 50 мм2 опухолей приводит к 100% (n’5) воспроизводимого отрастания опухолей при отсутствии адъювантной иммунотерапии(рисунок 4A)….

Discussion

Мы предоставляем протокол для мышиной модели неполной хирургической резекции саркомы мягких тканей для проверки пери-оперативной терапии. Мы также стандартизировали хирургический разрез, чтобы дать оценку заживления ран между мышами после лечения.

Размещение опухоли …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа поддерживается грантами от Sock его в Саркому! Фонд, Австралийская и Новозеландская ассоциация сарком, Детский фонд исследований лейкемии и рака и вечная благотворительность. WJD поддерживается Саймон Ли стипендий и научно-исследовательских стипендий от Национального совета по здравоохранению и медицинским исследованиям, и рак Совета WA.

Materials

26 gauge 0.5 mL insulin syringe Becton Dickinson, Australia 326769 None
2-Mercaptoethanol Life Technologies Australia Pty Ltd 21985023 None
Anaestetic gas machine Darvall Vet, Australia SKU: 2848 None
Anti-CTLA-4 BioXcell, USA BE0164 None
Anti-PD-1 BioXcell, USA BP0273 None
Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL RB healthcare UK Limited, UK 55175 Prescription order
Chlorhexidine Surgical Scrub 4% Perigo Australia, Australia CHL01449F(scrub None
Fetal Bovine serum CellSera, Australia AU-FBS-PG None
Forceps Fine 10.5 cm Surgical house, Western Australia CC74110 None
Forceps Fine 12 cm Serrated Surgical house, Western Australia CC74212 None
Forceps Halsted 14 cm Surgical house, Western Australia CD01114 None
Heating chamber Datesand Ltd, UK Mini-Thermacage None
HEPES (1M) Life Technologies Australia Pty Ltd 15630080 None
Isoflurane Henry Schein Animal Health, Australia SKU: 29405 Prescription order
Lubricating Eye Ointment Alcon n/a None
Penicillin/streptomycin 1000X Life Technologies Australia Pty Ltd 15140122 None
Phosphate Buffered Solution 10x Life Technologies Australia Pty Ltd 70013-032 None
Reflex 7mm Clips Able scientific, Australia AS59038 None
Reflex 7mm Wound Clip Applicator Able scientific, Australia AS59036 None
Reflex Wound Clip Remover Able scientific, Australia AS59037 None
Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit Darvall Vet, Australia #7885 None
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine Life Technologies Australia Pty Ltd 21870092 None
Scissors Iris STR 11 cm Surgical house, Western Australia KF3211 None
Scissors Iris STR 9 cm Surgical house, Western Australia JH4209 None
Small Induction Chamber Darvall Vet, Australia SKU: 9630 None
TrypLE express 1x Life Technologies Australia Pty Ltd 12604-021 None

References

  1. Orosco, R. K., et al. Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers. Scientific Reports. 8 (1), 5686 (2018).
  2. Haas, R. L., et al. Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas. Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).
  3. Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma. Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).
  4. Smith, H. G., et al. Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma. British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).
  5. Uramoto, H., Tanaka, F. Recurrence after surgery in patients with NSCLC. Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).
  6. Stojadinovic, A., et al. Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas. Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).
  7. Krall, J. A., et al. The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy. Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).
  8. Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity. Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86 (2018).
  9. Predina, J. D., et al. Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment. American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).
  10. Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
  11. Khong, A., et al. The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40. BMC Cancer. 14, 969 (2014).
  12. Broomfield, S., et al. Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy. Cancer Research. 65 (17), 7580-7584 (2005).
  13. Predina, J. D., et al. A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation. Cancer Biology & Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).
  14. Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).
  15. Overwijk, W. W., Restifo, N. P. B16 as a mouse model for human melanoma. Current Protocols in Immunology. , (2001).
  16. Predina, J., et al. Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).
  17. Endo, M., Lin, P. P. Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma. Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37 (2018).
  18. Liu, J., et al. Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease. Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).
  19. Park, C. G., et al. Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases. Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).
  20. Tai, L. H., et al. A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies. Journal of Visualized Experiments. (85), e51253 (2014).
  21. Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis. Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).
  22. Qiu, W., Su, G. H. Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models. Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).
  23. Erstad, D. J., et al. Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy. Disease Models & Mechanisms. 11 (7), (2018).

Play Video

Cite This Article
Rwandamuriye, F. X., Weston, B. J., Johns, T. G., Lesterhuis, W. J., Zemek, R. M. A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies. J. Vis. Exp. (161), e60882, doi:10.3791/60882 (2020).

View Video