Burada, akut lenfoblastik lösemi hastası kaynaklı ksenogreft modelinin, CD19 hedefli kimerik antijen reseptörü T hücresi ile ilişkili toksisiteleri değerlendirmek ve izlemek için bir strateji olarak kullanıldığı bir protokol tanımlanmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Akut Lenfoblastik Lösemi Hasta Kaynaklı Ksenogreft Fare Modeli Kullanılarak Kimerik Antijen Reseptörü T Hücresi İlişkili Toksisitelerin Değerlendirilmesi
Bu makalede
Düzeltme bildirimi
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Özet
Özet
Kimerik antijen reseptörü T (CART) hücre tedavisi, birden fazla CD19 + malignite tipinin tedavisi için güçlü bir araç olarak ortaya çıkmıştır ve bu da yakın zamanda birkaç CD19 hedefli CART (CART19) hücre tedavisinin FDA onayına yol açmıştır. Bununla birlikte, CART hücre tedavisi, kendi morbidite ve mortalitelerini taşıyan benzersiz bir dizi toksisite ile ilişkilidir. Buna sitokin salınım sendromu (CRS) ve nöroinflamasyon (NI) dahildir. Klinik öncesi fare modellerinin kullanımı, hem CART etkinliğini hem de CART toksisitesini değerlendirmek için CART teknolojisinin araştırılması ve geliştirilmesinde çok önemli olmuştur. Bu adoptif hücresel immünoterapiyi test etmek için mevcut preklinik modeller arasında sinjeneik, ksenogreft, transgenik ve insanlaştırılmış fare modelleri bulunur. İnsan bağışıklık sistemini sorunsuz bir şekilde yansıtan tek bir model yoktur ve her modelin güçlü ve zayıf yönleri vardır. Bu yöntem makalesi, CART19 ile ilişkili toksisiteleri, CRS ve NI'yi değerlendirmek için bir strateji olarak akut lenfoblastik lösemili hastalardan lösemik blastlar kullanan hasta kaynaklı bir ksenogreft modelini tanımlamayı amaçlamaktadır. Bu modelin, klinikte görüldüğü gibi terapötik etkinliğin yanı sıra CART19 ile ilişkili toksisiteleri özetlediği gösterilmiştir.
Giriş
Kimerik antijen reseptörü T (CART) hücre tedavisi, kanser immünoterapisi alanında devrim yaratmıştır. Nüks/refrakter akut lenfoblastik lösemi (ALL), büyük B hücreli lenfoma, manto hücreli lenfoma, foliküler lenfoma ve multipl miyelom 1,2,3,4,5,6,7 tedavisinde başarılı olduğu kanıtlanmıştır ve bu da son FDA onaylarına yol açmıştır. Klinik çalışmalardaki ilk başarıya rağmen, CART hücre tedavisi ile tedavi, genellikle şiddetli ve bazen ölümc....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu protokol, Mayo Clinic'in Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB), Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC A00001767) ve Kurumsal Biyogüvenlik Komitesi'nin (IBC, Bios00000006.04) yönergelerini takip eder.
NOT: Farelerle çalışmak için kullanılan tüm malzemeler steril olmalıdır.
1. NSG farelerine busulfan enjeksiyonu
- Erkek, 8-12 haftalık, bağışıklığı baskılanmış, NOD-SCID IL2rγnull (NSG) fareler edinin ve enjeksiyondan önce tartın.
NOT: İstatistiksel anlamlılık için, grup başına en az beş fare kullanılması ve bu deneyin dişi farelerle en az bir kez daha tekrarlanması önerilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu protokolün amacı, ALL'li hastaların tümör hücrelerinden bir PDX fare modeli kullanarak CART hücresi ile ilişkili toksisiteleri değerlendirmektir (Şekil 1). İlk olarak, NSG fareleri, immünosupresif hale getirmek ve CART hücre aşılamasını kolaylaştırmak amacıyla i.p. busulfan (30 mg / kg) enjeksiyonları aldı28. Ertesi gün, TÜM hastalardan türetilen ~ 5 × 106 PBMC (i.v.) aldılar. Fareler, kuyruk kanaması testi ile ~ 13 hafta boyunca aşılama açısınd.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu raporda, bir ALL PDX modeli kullanarak CART hücresi ile ilişkili toksisiteleri değerlendirmek için bir metodoloji tanımlanmıştır. Daha spesifik olarak, bu model, hastaların CART hücrelerinin infüzyonundan sonra sıklıkla yaşadığı yaşamı tehdit eden iki toksisiteyi, CRS ve NI'yi taklit etmeyi amaçlamaktadır. Klinikte gözlenen CART toksisitelerinin birçok ayırt edici özelliğini özetler: kilo kaybı, motor disfonksiyon, nöroinflamasyon, inflamatuar sitokin ve kemokin üretimi ve farklı efektör hücrelerin merkezi sinir siste.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
S.S.K., OCAR immünoterapisi alanında Novartis'e (Mayo Clinic, Pennsylvania Üniversitesi ve Novartis arasındaki bir anlaşma yoluyla) ve Mettaforge'a (Mayo Clinic aracılığıyla) lisanslanan patentlerin mucididir. R.L.S. ve S.S.K., CAR immünoterapisi alanında Humanigen'e lisanslı patentlerin mucitleridir. S.S.K. Kite, Gilead, Juno, Celgene, Novartis, Humanigen, MorphoSys, Tolero, Sunesis, Leahlabs ve Lentigen'den araştırma fonu alıyor.
Teşekkürler
Bu çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (R37CA266344, 1K99CA273304), Savunma Bakanlığı (CA201127), Mayo Clinic K2R boru hattı (SSK), Mayo Clinic Bireyselleştirilmiş Tıp Merkezi (SSK) ve Predolin Vakfı (RLS) aracılığıyla desteklenmiştir. Ayrıca, Mayo Clinic NMR Çekirdek Tesis personeline teşekkür ederiz. Şekil 1 BioRender.com'de oluşturuldu
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| APC Anti-İnsan CD19 | Biolegend | 302211 | |
| Alkol Hazırlama Pedi | Wecol | 6818 | |
| 14.0 yazılımını analiz | edin AnalyzeDirect, Inc. | N/A | https://analyzedirect.com/analyze14/ |
| Suni gözyaşı (Mineral yağ ve vazelin) | Akorn | 17478-062-35 | Göz kuruluğunu önlemek için topikal oftalmik jel |
| BD FACS Lysing Solution | BD | 349202 | Kırmızı kan hücreleri parçalanan tampon |
| BD Micro-Fin IV insülin şırıngaları | BD | 329461 | |
| Brillian Violet 421 Anti-İnsan CD45 | Biolegend | 304032 | |
| Bruker Avance II 7 Tesla | Bruker Biospin | N/A | MRI makinesi |
| Busulfan (NSC-750) | Selleckchem | S1692 | |
| CountBright mutlak sayma boncukları | Invitrogen | C36950 | |
| CytoFLEX System B4-R2-V2 | Beckman Coulter | C10343 | akış sitometresi |
| Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin | Gibco | 14190-144 | |
| ERT Kontrol/Yolluk Modülü | SA Instruments | Model 1030 | Küçük Hayvan İzleme Solunum ve Geçit Sistemi |
| Fetal sığır serumu | Millipore Sigma | F8067 | |
| Hemositometre | Parlak Çizgi | Z359629-1EA | |
| İnsan AB Serumu; Erkek Bağışçılar; AB tipi; US | Corning | 35-060-CI | |
| Isofluran (Sıvı) | Sigma-Aldrich | 792632 | |
| CANLI/ÖLÜ Sabitlenebilir Aqua Ölü Hücre Leke Kiti, 405 nm uyarma için | Invitrogen | L34966 | |
| Microvette 500 Lityum heparin | Sarstedt | 20.1345.100 | Kan alma tüpü |
| MILLIPLEX Huma / Sitokin / Kemokin Manyetik Boncuk Paneli | Millipore Sigma | Sitokinleri ve kemokinleri tanımlamak için | HCYTMAG-60K-PX38 |
| Omniscan | Ge Healthcare Inc. | 0407-0690-10 | Gadolinyum bazlı konstrast ajan |
| Pd Anti-Fare CD45 | Biolegend | 103106 | |
| Penisilin-Streptomisin-Glutamin (100x), Sıvı | Gibco | 10378-016 | |
| Yuvarlak Alt Polietilen Test tüpü | Corning | 352008 | |
| Sodyum Azide,% 5 (a / h) | Ricca Chemical | 7144.8-16 | |
| Paslanmaz Çelik Cerrahi Blade | Bard-Parker | 371215 | |
| X-VIVO 15 Serumsuz Hematopoetik Hücre Ortamı | Lonza | 04-418Q |
Kaynaklar
- Turtle, C. J., et al. Immunotherapy of non-Hodgkin's lymphoma with a defined ratio of CD8+ and CD4+ CD19-specific chimeric antigen receptor-modified T cells. Science Translational Medicine. 8 (355), (2016).
- Kochenderfer, J. N., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
Düzeltme
Formal Correction: Erratum: Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-derived Xenograft Mouse Model
Posted by JoVE Editors on 3/14/2023. Citeable Link.
An erratum was issued for: Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-derived Xenograft Mouse Model. The Authors section was updated from:
Claudia Manriquez Roman1,2,3,4,5
R. Leo Sakemura1,2
Fang Jin6
Roman H. Khadka6
Mohamad M. Adada1,2
Elizabeth L. Siegler1,2
Aaron J. Johnson6
Saad S. Kenderian1,2,6
1T Cell Engineering Laboratory, Mayo Clinic, Rochester,
2Division of Hematology, Mayo Clinic, Rochester,
3Mayo Clinic Graduate School of Biomedical Sciences, Mayo Clinic, Rochester,
4Department of Molecular Medicine, Mayo Clinic, Rochester,
5Regenerative Sciences PhD Program, Mayo Clinic, Rochester,
6Department of Immunology, Mayo Clinic, Rochester
to:
Claudia Manriquez Roman1,2,3,4,5
R. Leo Sakemura1,2
Brooke L. Kimball1,2
Fang Jin6
Roman H. Khadka6
Mohamad M. Adada1,2
Elizabeth L. Siegler1,2
Aaron J. Johnson6
Saad S. Kenderian1,2,6
1T Cell Engineering Laboratory, Mayo Clinic, Rochester,
2Division of Hematology, Mayo Clinic, Rochester,
3Mayo Clinic Graduate School of Biomedical Sciences, Mayo Clinic, Rochester,
4Department of Molecular Medicine, Mayo Clinic, Rochester,
5Regenerative Sciences PhD Program, Mayo Clinic, Rochester,
6Department of Immunology, Mayo Clinic, Rochester
