Summary
تقدم هذه الورقة بروتوكولا اقتصاديا وفعالا لفحص الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي. بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي في غضون 60 دقيقة ، مما يحسن بشكل فعال كفاءة مختبر أمراض الذكورة وأخصائيي أمراض الذكورة.
Abstract
يمكن أن تؤدي زيادة عدد الكريات البيض إلى انخفاض حركة المنوية ، وزيادة التشوهات المورفولوجية للحيوانات المنوية ، وارتفاع مؤشر تجزئة الحمض النووي للحيوانات المنوية ، وضعف وظيفة الجسم القمي للحيوانات المنوية ، وحتى التأثير على التطور الجنيني. وهو مرض ذكوري شائع في الممارسة السريرية وأحد الأسباب المهمة للعقم عند الذكور. عند تحديد ما إذا كان التهاب الجهاز التناسلي الذكري موجودا ، غالبا ما يختار أخصائيو الذكورة فحص الخلايا المستديرة أو إيلاستاز البلازما المنوية في السائل المنوي كأساس تشخيصي سريري. ومع ذلك ، فإن فحص الخلايا المستديرة يتأثر بسهولة بالخلايا المنوية المولدة للحيوانات المنوية والخلايا الظهارية في الجهاز التناسلي ، والتي لا تساهم في الحد من الاستخدام العشوائي وغير الضروري للمضادات الحيوية. في الوقت نفسه ، فإن عملية الكشف عن الإيلاستاز معقدة نسبيا ، وتستغرق وقتا طويلا ، وبطيئة في الإبلاغ عن النتائج ، وهو أمر غير مفيد للتشخيص المبكر وعلاج أمراض مثل التهابات الجهاز التناسلي الذكري (MGTIs). لقد طبقنا بشكل مبتكر فحص الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) كمعيار تشخيصي ل leukocytospermia ، وحل هذه المشاكل بنجاح. يتطلب هذا الفحص فقط إضافة سائل التشغيل المكون من أربعة كواشف إلى العينة ، ويمكن التحكم في إجمالي وقت التفاعل في درجة حرارة الغرفة في غضون 20-30 دقيقة. مع اللطاخة اللاحقة والفحص المجهري ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي في غضون 60 دقيقة ، والتي يمكن استخدامها لتشخيص ما إذا كان التهاب الجهاز التناسلي الذكري موجودا.
Introduction
برز العقم كقضية صحية عامة عالمية تؤثر على حوالي 15٪ من الأزواج في سن الإنجاب. تساهم العوامل الذكورية بحوالي 50٪ من إجمالي حالات ضعف الخصوبة ، ويمكن أن يعزى ما يقرب من 20٪ إلى 30٪ فقط إلى العوامل الذكورية1،2،3. تشكل التهابات الجهاز التناسلي الذكري (MGTIs) أحد الأسباب المهمة للعقم عند الذكور ، حيث تمثل حوالي 15٪ من الحالات 4,5.
معظم الأفراد لديهم كريات الدم البيضاء في السائل المنوي ، والتي تشكل 13 ٪ من الخلايا غير المنوية ، مع نسب تفاضلية هي العدلات 12 ٪ ، الضامة 0.9 ٪ ، والخلايا الليمفاوية 0.1 ٪ 6،7. وفقا لدليل مختبر منظمة الصحة العالمية (WHO) لفحص ومعالجة السائل المنوي البشري (الطبعة الخامسة) ، عادة ما يتم تعريف الكريات البيض على أنه وجود >1 × 106 خلايا / مل كريات الدم البيضاء في السائل المنوي8. يمكن أن تحدث هذه الحالة بسبب العديد من العوامل مثل السموم البيئية ، وتعاطي المخدرات ، ودوالي الخصية ، و MGTIs ، وما إلى ذلك ، وكلها قد تؤدي إلى زيادة غير طبيعية في تركيز الكريات البيض في السائل المنوي9. يمكن أن ترفع الكريات البيض مستويات أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) في السائل المنوي ، مما يتسبب في بيروكسيد الدهون والضرر التأكسدي للبروتين والحمض النووي ، مما يؤدي إلى انخفاض حركة الحيوانات المنوية ، وزيادة التشوهات المورفولوجية للحيوانات المنوية ، وارتفاع مؤشر تجزئة الحمض النووي للحيوانات المنوية ، وضعف وظيفة الحيوانات المنوية القمي ، وحتى الآثار السلبية على نمو الجنين10،11.
حاليا ، يختار أخصائيو الذكورة عادة فحص الخلايا المستديرة في السائل المنوي أو الإيلاستاز في البلازما المنوية عند تحديد التهاب الجهاز التناسلي. ومع ذلك ، غالبا ما يكون من الصعب التمييز بين الخلايا المنوية المتدهورة والخلايا الظهارية في الجهاز التناسلي ، والتي لا تساهم في تقليل الاستخدام العشوائي وغير الضروري للمضادات الحيوية6. طريقة الفحص الأخيرة معقدة نسبيا وتستغرق وقتا طويلا ، مع بطء الإبلاغ عن النتائج ، وهو أمر غير مفيد للتشخيص والعلاج المبكر لأمراض مثل MGTIs. تقترح الجمعية الأمريكية لجراحة المسالك البولية (AUA) مزيدا من التمييز بين كريات الدم البيضاء والخلايا المقطوعة من الجهاز التناسلي عندما يكون تركيز الخلايا المستديرة في تحليل السائل المنوي أكبر من 1 × 106 خلايا / مل12. تستخدم بعض مختبرات أمراض الذكورة قياس التدفق الخلوي13 أو مستضد الكريات البيض (على سبيل المثال ، CD45) الكيمياء المناعية14 لفحص الكريات البيض. في حين أن هذه الأساليب دقيقة ، إلا أنها مكلفة وتستغرق وقتا طويلا ، مما يجعل التنفيذ السريري على نطاق واسع أمرا صعبا ، خاصة في البلدان النامية.
يتم توزيع البيروكسيديز على نطاق واسع في أنواع مختلفة من الخلايا ويلعب دورا حاسما في مقاومة تلف الإجهاد التأكسدي. الميلوبيروكسيديز (MPO) هو عضو في فصيلة البيروكسيديز التي يتم التعبير عنها بشكل عام في الخلايا المناعية. يتم التعبير عنه بشكل كبير في حبيبات العدلاتالمحبة للعدلات 15,16 ويتم التعبير عنه أيضا في الخلايا الليمفاوية17,18 ، وحيدات ، والبلاعم19. يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض ، وخاصة العدلات ، في السائل المنوي عن طريق فحص الخلايا المستديرة الإيجابية للبيروكسيديز7،20. لجعل عملية فحص الكريات البيض في السائل المنوي اقتصادية ومريحة وفعالة ، قمنا بإعادة هندسة طريقة الفحص. بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض في غضون 60 دقيقة. تقلل هذه الطريقة الجديدة من تكاليف فحص المرضى ووقت الانتظار للحصول على النتائج ، وتخفف من عبء العمل على فنيي المختبرات ، وتقصر فترة انتظار تشخيص الطبيب وعلاجه.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت مراجعة هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات الطبية التابعة للمستشفى الثالث التابع لجامعة صن يات صن.
1. إعداد حل العمل
- اجمع الكواشف التالية الضرورية لإعداد محلول العمل - محلول ركيزة أورثو تولويدين ، محلول كلوريد الأمونيوم المشبع (NH4Cl) ، محلول 148 مليمول / لتر ملح ثنائي الصوديوم لحمض الإيثيلين ديامينيترايتيك (Na2EDTA) ، ومحلول بيروكسيد الهيدروجين 6٪ (v / v). ضعها على مقعد مختبر بدرجة حرارة الغرفة (RT) مع الأدوات اللازمة ، مثل ماصات النقل (1000 ميكرولتر ، 200 ميكرولتر ، 10 ميكرولتر) ورفوف أنابيب الاختبار.
تنبيه: اقرأ ورقة بيانات السلامة (SDS) قبل التعامل مع الكواشف المذكورة أعلاه. - قم بإعداد زجاجة كاشف بنية غير شفافة لتخزين وحماية محلول العمل المحضر من التعرض للضوء.
- انقل الكواشف إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف وفقا للنسب المحددة أدناه:
- استخدم ماصة النقل 200 ميكرولتر واضبط الميزان على 100 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. بعد ذلك ، انقل 100 ميكرولتر من محلول NH4Cl إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف.
- استبدل طرف الماصة وانقل 100 ميكرولتر من محلول 148 مليمول / لتر Na2EDTA إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف باستخدام ماصة النقل 200 ميكرولتر المذكورة أعلاه. ثم ، تهب بلطف عن طريق سحب وتجانس الحل تماما.
- استخدم ماصة النقل 1000 ميكرولتر واضبط الميزان على 900 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. بعد ذلك ، انقل 900 ميكرولتر من محلول الركيزة أورثو تولويدين إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف ، وانفخ برفق عن طريق السحب ، وقم بتجانس المحلول تماما.
- استخدم ماصة النقل 10 ميكرولتر واضبط الميزان على 5 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. بعد ذلك ، انقل 5 ميكرولتر من محلول بيروكسيد الهيدروجين 6٪ (v / v) إلى زجاجة الكاشف البني غير الشفاف.
- استخدم ماصة النقل 1000 ميكرولتر واضبط الميزان على 1000 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، وانفخ برفق عن طريق السحب ، وقم بتجانس المحلول تماما في زجاجة الكاشف البني غير الشفاف.
- قم بتخزين محلول العمل الجاهز للاستخدام في زجاجة الكاشف البني غير الشفاف في RT ، بعيدا عن الضوء. حل العمل تفاعلي لمدة 24 ساعة.
- تتطلب كل عينة من السائل المنوي 900 ميكرولتر من محلول العمل. تأكد من أن كمية محلول العمل المعد كل يوم تتوافق مع عدد العينات التي يتم فحصها يوميا.
2. تحضير عينة السائل المنوي
- قبل جمع عينة السائل المنوي ، تأكد من أن المريض قد امتنع عن القذف لمدة 2 إلى 7 أيام كما هو مطلوب من قبل دليل مختبر منظمة الصحة العالمية (WHO) لفحص ومعالجة السائل المنوي البشري (5 ed.) 8. الاستمناء هو الطريقة المفضلة للحصول على عينات السائل المنوي. لتحسين دقة الفحص ، اطلب من المريض جمع كل السائل المنوي المقذوف.
- قم بتشغيل حامل درجة الحرارة الثابتة وقم بالتسخين حتى 37 درجة مئوية مقدما حتى يمكن أن يستمر التسييل اللاحق لعينة السائل المنوي بسلاسة.
- عند استلام عينة السائل المنوي للمريض ، قم بتسجيل المعلومات التفصيلية بدقة ، بما في ذلك رمز التعريف ، ووقت الجمع ، ومدة الامتناع عن ممارسة الجنس ، وغيرها من المعلومات ذات الصلة ، على الجدار الخارجي للوعاء القائم على البوليمر.
- ضع الوعاء القائم على البوليمر الذي يحتوي على عينة السائل المنوي على حامل درجة حرارة ثابتة مسخن مسبقا إلى 37 درجة مئوية ، وهو أمر مفيد لتسييل السائل المنوي.
- اسحب عينة السائل المنوي إلى ماصة قائمة على البوليمر وراقب حالة التسييل كل 5 دقائق حتى يتم تسييل عينة السائل المنوي بالكامل.
- إذا لم يتم تسييل عينة السائل المنوي بالكامل في غضون 30 دقيقة ، فلا تقم بإجراء الفحص بعد ؛ استمر في الانتظار لمدة 30 دقيقة أخرى. إذا كان السائل المنوي لا يزال غير مسال بالكامل بعد 60 دقيقة ، أضف حجما متساويا من محلول الفوسفات العازل لتخفيف 1: 1 وحركه برفق لتعزيز التسييل.
- بعد التقليب الشامل والتجانس المتسق ، احتفظ بعينة السائل المنوي المسال بالكامل لإجراءات الفحص اللاحقة.
3. تلطيخ الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز وتحليل عينة السائل المنوي الأصلية
- قبل أخذ العينات ، استخدم ماصة قائمة على البوليمر للنفخ بشكل متكرر عن طريق سحب عينة السائل المنوي قيد الفحص وتجانسها تماما.
- استخدم ماصة النقل 200 ميكرولتر واضبط الميزان على 100 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، ثم انقل 100 ميكرولتر من عينة السائل المنوي إلى أنبوب طرد مركزي.
- استخدم ماصة النقل 1000 ميكرولتر واضبط الميزان على 900 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، ثم انقل 900 ميكرولتر من محلول العمل المذكور أعلاه إلى أنبوب الطرد المركزي.
- النفخ بشكل متكرر عن طريق سحب المادة المتفاعلة وتجانسها تماما ، والذي يتكون من عينة السائل المنوي ومحلول العمل ، باستخدام ماصة نقل 1000 ميكرولتر.
- ضع أنبوب الطرد المركزي في رف أنبوب اختبار على شاكر ثنائي الأبعاد وعرضه للتحريك المستمر عند 200 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة في RT.
- أثناء انتظار تفاعل التلوين ، قم بتحليل عينة السائل المنوي باستخدام نظام CASA لتحديد تركيز الحيوانات المنوية في عينة السائل المنوي الأصلية في الوعاء القائم على البوليمر.
- قم بتشغيل مفتاح الطاقة لنظام CASA وانقر نقرا مزدوجا فوق رمز SCA SCOPE لفتح البرنامج التطبيقي.
- قبل أخذ العينات ، قم بالنفخ بشكل متكرر عن طريق سحب عينة السائل المنوي الأصلية وتجانسها تماما مرة أخرى باستخدام ماصة أساسها البوليمر.
- استخدم ماصة النقل 10 ميكرولتر واضبط الميزان على 10 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، وماصة تصل إلى 10 ميكرولتر من عينة السائل المنوي الأصلية ، وضعها في غرفة عد SCA. انتظر لمدة 60 ثانية حتى تتوقف عينة السائل المنوي عن الانجراف.
- ضع غرفة عد SCA على حامل العينة لنظام CASA واضبط معلومات المريض في مربع حوار البرنامج التطبيقي للتحضير للفحص الرسمي.
- افحص عينة السائل المنوي الأصلية في غرفة عد SCA باستخدام نظام CASA بالنقر فوق الزر "ابدأ " وتسجيل البيانات اللازمة ، مثل تركيز الحيوانات المنوية.
4. مراقبة الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز المنوية
- استخدم ماصة النقل 1000 ميكرولتر واضبط الميزان على 1000 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة ، ثم قم بالنفخ بشكل متكرر عن طريق سحب المادة المتفاعلة وتجانسها تماما ، والذي يتكون من عينة السائل المنوي ومحلول العمل في أنبوب الطرد المركزي مرة أخرى في نهاية عملية التفاعل لمدة 30 دقيقة.
- استخدم ماصة النقل 10 ميكرولتر واضبط الميزان على 10 ميكرولتر عن طريق تدوير المقبض. استبدل طرف الماصة، أي ماصة حتى 10 ميكرولتر من المادة المتفاعلة المذكورة أعلاه، وضعها في غرفة عد المنوية. أخيرا ، قم بتغطية غرفة عد المنوية بغطاء زجاجي مخصص.
- ضع غرفة عد المنوية على المرحلة المجهرية وقم بتشغيل مفتاح الطاقة للمجهر الضوئي باستخدام عدستين 10x. بعد ذلك، انتظر حتى تتوقف عينة المتفاعلات عن الانجراف لمدة 60 ثانية.
- قم بتبديل المحول المجهري إلى العدسة الموضوعية 10x أثناء وقت الانتظار. ثم اضبط مقبض الضبط الخشن ومقبض الضبط الدقيق بالتسلسل. أخيرا ، راقب المنوية والخلايا المستديرة تحت تكبير 10×10.
- قم بتبديل المحول المجهري إلى العدسة الموضوعية 40x بعد تحديد مجال الرؤية المراد تحليله ، ولاحظ المنوية والكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز البني تحت تكبير 10 × 40.
- استخدم نظام العداد الإلكتروني لحساب ما لا يقل عن 200 منوي وعدد كريات الدم البيضاء الإيجابية للبيروكسيديز البني في الحقول المقابلة.
5. حساب تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز
- احسب تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز من خلال استخدام الصيغة التالية:
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
عند تنفيذ الإجراء المذكور أعلاه ، يظهر المتفاعل في أنبوب الطرد المركزي في كثير من الأحيان مظهرا شبه شفاف وبراق (الشكل 1). الكشف عن اللون البني الواضح يكشف عن احتمال تحلل كريات الدم البيضاء ، مما قد يؤدي إلى تلطيخ السائل. وبالتالي ، يمكن أن تفشل عملية التلوين ، مما يجعل من الضروري إما إعادة تلطيخ أو جمع عينة جديدة من السائل المنوي لإعادة الاختبار21.
أظهرت الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز لونا بنيا ، يتناقض مع الخلايا المستديرة العادية غير الملوثة (الشكل 2 ، الشريحة العادية). بعد ذلك ، تم حساب كل المنوية والكريات البيض البنية تحت حقل المجهر الحالي قبل التحول إلى مجال جديد تماما للمراقبة المستمرة والعد. لضمان الدقة المثلى ، من الضروري حساب ما لا يقل عن 200 منوي وكريات الدم البيضاء الموجودة في مجال الرؤية المقابل.
الشكل 1: محلول متفاعل. المتفاعل الذي يكمل عملية التفاعل هو سائل براق دون شفاف. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: الملاحظة تحت المجهر الضوئي (الشريحة العادية). (أ) كريات الدم البيضاء الإيجابية للبيروكسيديز و (ب) الخلية المستديرة العادية التي لوحظت عند المجهر البصري للتكبير 10 × 40. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
أورثو تولويدين وبيروكسيد الهيدروجين لهما خصائص حساسة للضوء ويمكن أن تتحلل عند تعرضها للضوء. لضمان فعالية كواشف الاختبار ، يوصى بتخزين سائل العمل المحضر في مكان مظلم.
تظهر عينات السائل المنوي بشكل طبيعي خصائص غير متجانسة. في عملية تحضير عينات السائل المنوي ، يعد الحكم بشكل صحيح على حالة تسييل السائل المنوي وتجانس عينات السائل المنوي تماما قبل كل أخذ عينات أمرا بالغ الأهمية لتحسين موثوقية نتائج الاختبار. عينات السائل المنوي تسييل تماما في غضون 15 دقيقة. يجب مراعاة التجانس الميكانيكي أو الهضم الأنزيمي إذا لم يتم تسييلها بالكامل بعد 60 دقيقة. يمكن الحصول على عينات أكثر تجانسا من السائل المنوي عن طريق هز حاوية العينة برفق باستمرار أثناء عملية التسييل باستخدام شاكر ثنائي الأبعاد8.
تمتلك طريقة الفحص المقدمة في هذه الورقة مزايا البساطة والسرعة والفعالية من حيث التكلفة. ومع ذلك ، قد لا يكون مفيدا في ظل ظروف معينة: يتم تخزين البيروكسيديز في حبيبات azurophilic التي سيتم إفرازها في الفضاء بين الخلايا من خلال التحبب أو cytopempsis عند التنشيط21,22. وبالتالي ، قد تفشل العدلات في تلطيخ ولا يمكن تحديدها. في مثل هذه الحالات ، يصبح من الضروري تكرار عملية التلوين أو حتى مطالبة المريض بتقديم عينة جديدة من السائل المنوي لإعادة الفحص. لتقليل هذا الموقف ، يوصى باستخدام عينات السائل المنوي الطازجة كلما أمكن ذلك مع الحد الأدنى من وقت التنسيب وعملية التجانس اللطيفة. يمكن لهذه الطريقة تحديد الأمراض أو الالتهابات النشطة فقط ولا يمكنها تحديد الأمراض في مراحل لاحقة ، مثل الالتهابات المزمنة16. بالإضافة إلى ذلك ، تشكل أنواع أخرى من الكريات البيض ذات المحتوى المنخفض من البيروكسيديز ، مثل الخلايا الليمفاوية ، الضامة ، والوحيدات ، صعوبات في تلطيخ هذه الطريقة ؛ وبالتالي ، يمكن تحقيق نتائج موثوقة من خلال استخدام مستضد الكريات البيض (على سبيل المثال ، CD45) تلطيخ كيميائي مناعي.
كما هو مطلوب في الطبعة 5 من دليل منظمة الصحة العالمية ، يتطلب تلطيخ الميلوبيروكسيديز الإيجابي التقليدي (اختبار Endtz) العد المجهري لما لا يقل عن 200 كريات الدم البيضاء إيجابية البيروكسيديز في لوحة عد خلايا الدم لحساب تركيزها8. بالمقارنة مع اختبار Endtz اليدوي التقليدي ، يقدم هذا البروتوكول بيانات تركيز المنوية التي تم الحصول عليها عن طريق اكتشاف CASA ، والجمع بين الطرق اليدوية والتلقائية. لحساب تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز ، تم حساب ما لا يقل عن 200 من المنوية والكريات البيض في مجال الرؤية المقابل تحت المجهر. نظرا لأن تركيز الحيوانات المنوية في السائل المنوي أكبر بكثير من تركيز الكريات البيض ، فقد تطلب الأمر وقتا أقل لحساب 200 حيوان منوي مقارنة بحساب 200 كريات بيضاء إيجابية البيروكسيداز.
غالبا ما يواجه المرضى الذين يعانون من قلة النطاف الشديدة ، و cryptozoospermia ، و azoospermia تحديات في حساب عدد كاف من المنوية. في مثل هذه الحالات ، يمكن حساب تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز مباشرة باستخدام لوحة عد خلايا الدم كما هو موضح في دليل اللوحة. بالإضافة إلى ذلك ، بالنسبة للمرضى الذين لا يحتاجون إلى CASA أو المختبرات بدون معدات CASA ، يمكن أيضا استخدام لوحة عد خلايا الدم لتحديد تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيداز.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
المؤلفون ممتنون لمختبر أمراض الذكورة التابع لمركز الطب التناسلي ، المستشفى الثالث التابع لجامعة صن يات صن ، لتوفير التسهيلات لهذه الدراسة. لم يشارك أي تمويل في إعداد هذه المقالة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia B |
| 6% (v/v) hydrogen peroxide solution | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia D |
| Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE | Microptic S.L. | 1222996; Model type: SCA-SCOPE-H | Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment |
| Disposable centrifugal tube (1.5 mL) | Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD | 2210009 | Centrifugal tube for Staining process |
| Disposable transfer pipette (3 mL) | Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD | 20221101 | Polymer-based pipette |
| Electronic counter | None | None | A multichannel counter |
| Electronic scales | Shanghai Liangping Instrument Co., LTD | D9008084 | MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g |
| Makler counting chamber | Makler | MQ30004 | 0.01 sq.mm, 10 μm deep |
| Optical microscope | Olympus | 3G41067201307 | CX31, 10×40 |
| Ortho-toluidine substrate solution | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia C |
| Pipet tips(1 mL) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd | 02923205 | 1000 tips/unit, 5 units/case |
| Pipet tips(10 µL) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd | 00323961 | 1000 tips/unit, 20 units/case |
| Pipet tips(200 µL) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd | 32822810 | 1000 tips/unit, 20 units/case |
| Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia A |
| SCA counting chamber | Microptic S.L. | 102230608 | 10 µm, 2 Chambers |
| The container for semen sample | Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD | 20230701 | Polymer-based receptacle for semen sample |
| Thermostatic table | Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD | MQ30004 | MQ-300 |
| Transfer pipette (10 µL) | Eppendoff | 3121000.015 | |
| Transfer pipette (1000 µL) | Eppendoff | 3121000.12 | |
| Transfer pipette (200 µL) | Eppendoff | 3121000.082 | |
| Two-dimensional shaker | DragonLab | 822000010000 | VC5A002205 |
References
- Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. A unique view on male infertility around the globe. Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).
- Sharlip, I. D., et al. Best practice policies for male infertility. Fertil Steril. 77 (5), 873-882 (2002).
- Choy, J. T., Eisenberg, M. L. Male infertility as a window to health. Fertil Steril. 110 (5), 810-814 (2018).
- Pellati, D., et al. Genital tract infections and infertility. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 140 (1), 3-11 (2008).
- Rivero, M. J., Kulkarni, N., Thirumavalavan, N., Ramasamy, R. Evaluation and management of male genital tract infections in the setting of male infertility: an updated review. Curr Opin Urol. 33 (3), 180-186 (2023).
- Long, S., Kenworthy, S. Round cells in diagnostic semen analysis: A guide for laboratories and clinicians. Br J Biomed Sci. 79, 10129 (2022).
- Johanisson, E., Campana, A., Luthi, R., de Agostini, A. Evaluation of 'round cells' in semen analysis: a comparative study. Hum Reprod Update. 6 (4), 404-412 (2000).
- World Health Organization. WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen. 5th edn. World Health Organization. , (2010).
- Domes, T., et al. The incidence and effect of bacteriospermia and elevated seminal leukocytes on semen parameters. Fertil Steril. 97 (5), 1050-1055 (2012).
- Aziz, N., Agarwal, A., Lewis-Jones, I., Sharma, R. K., Thomas, A. J. Novel associations between specific sperm morphological defects and leukocytospermia. Fertil Steril. 82 (3), 621-627 (2004).
- Alahmar, A. T. Role of oxidative stress in male infertility: An updated review. J Hum Reprod Sci. 12 (1), 4-18 (2019).
- Schlegel, P. N., et al. Diagnosis and treatment of infertility in men: AUA/ASRM guideline Part I. J Urol. 205 (1), 36-43 (2021).
- Ricci, G., Presani, G., Guaschino, S., Simeone, R., Perticarari, S. Leukocyte detection in human semen using flow cytometry. Hum Reprod. 15 (6), 1329-1337 (2000).
- Brunner, R. J., Demeter, J. H., Sindhwani, P. Review of guidelines for the evaluation and treatment of leukocytospermia in male infertility. World J Mens Health. 37 (2), 128-137 (2019).
- Amulic, B., Cazalet, C., Hayes, G. L., Metzler, K. D., Zychlinsky, A. Neutrophil function: from mechanisms to disease. Annu Rev Immunol. 30, 459-489 (2012).
- Khan, A. A., Alsahli, M. A., Rahmani, A. H. Myeloperoxidase as an active disease biomarker: recent biochemical and pathological perspectives. Med Sci (Basel). 6 (2), 33 (2018).
- Khan, A. A., Rahmani, A. H., Aldebasi, Y. H., Aly, S. M. Biochemical and pathological studies on peroxidases -an updated review). Glob J Health Sci. 6 (5), 87-98 (2014).
- Liu, W. Q., et al. Myeloperoxidase-derived hypochlorous acid promotes ox-LDL-induced senescence of endothelial cells through a mechanism involving beta-catenin signaling in hyperlipidemia. Biochem Biophys Res Commun. 467 (4), 859-865 (2015).
- Nicholls, S. J., Hazen, S. L.
- Wolff, H. The biologic significance of white blood cells in semen. Fertil Steril. 63 (6), 1143-1157 (1995).
- Chen, Y., Hashiguchi, N., Yip, L., Junger, W. G. Hypertonic saline enhances neutrophil elastase release through activation of P2 and A3 receptors. Am J Physiol Cell Physiol. 290 (4), C1051-C1059 (2006).
- Weiss, S. J.
